广金钱草提取物对尿石症大鼠肾功能的保护作用

刘 英 王志勇 杨德慧 刘晓伟 高旭红 徐 辉

(承德医学院附属医院泌尿外科，河北 承德 067000)

近年来，泌尿系结石的发病率在我国有明显增加趋势，发病年龄也日趋年轻化〔1〕。祖国医学现代药理研究发现，泽泻、伏苓、金钱草及排石汤颗粒、结石康胶囊等药物具有降低尿液中结晶盐浓度和增加尿液中抑制剂浓度、预防或降低结石形成的功效〔2〕。金钱草为治疗泌尿系结石的首选中药，具有清热利湿、通淋排石之功效。现代中药化学和药理学研究表明,金钱草含有多种有效成分，如黄酮类、酚性成分、胆碱、氨基酸等。体外研究表明，金钱草水煎液对草酸钙结晶的成核具有一定的促进作用，进而降低尿液的过饱和状态〔3〕。本实验使用乙二醇+氯化铵制造尿石症大鼠模型，探讨广金钱草提取物对尿石症大鼠肾功能的保护作用。

1 材料与方法

1.1动物与药物 SPF级Wistar雄性、体质量(200±20)g大鼠60只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司〔合格证号：SCXK(京)2016-0064〕，自由饮水和标准实验室饮食。广金钱草提取物(陕西帕尼尔生物科技有限公司)。

1.2主要试药与仪器 CX31RBSF型显微镜(日本Olympus公司)；Fresco 17型低温离心机(日本日立公司)；全自动生化分析仪(Hoffmann-La Roche 有限责任公司)；乙二醇、氯化铵(天津市天力化学试剂有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)(南京建成生物工程研究所)；染色试剂盒(上海杰美基因医药科技有限公司)

1.3方法

1.3.1动物模型的制备、分组与给药处理 随机分为空白对照组、模型组、广金钱草低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组自由饮水，其组50只大鼠给予1%乙二醇+1%氯化铵自由饮水，连续喂食2 w，肾小管出现结晶，表明模型建立成功。2 w后，低、中、高剂量组给予广金钱草提取物80、160、320 mg·kg-1·d-1灌胃，连续4 w。

1.3.2观察指标 ①尿量及尿生化指标：给药3 w后，收集24 h尿液,采用铬酸钾氧化甲基红催化光度法测定尿草酸〔计算公式：C(mmol/L)=(Ab-Au)/(Ab-As)×0.01〕，采用漠丙酮硫脉比色法测定尿柠檬酸〔计算公式为尿柠檬(mmol)=样品光密度/标准吸光度×1.038〕，将100 μl尿液均匀滴至干净载玻片，置于偏光显微镜检测尿结晶。

②给药4 w后，腹腔注射10%水合氯醛4 ml/kg麻醉大鼠，经腹部下腔静脉采集血液，3 500 r/min低温离心10 min，取上清液。采用AU800全自动生化分析仪检测大鼠血液中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、钙(Ca2+)、磷(P)的水平；摘取各组大鼠肾脏，采用硫代巴比妥酸法测定MDA，利用黄嘌呤氧化酶-氮蓝四唑还原法测定SOD，GSH；取大鼠左肾，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋后，切片，用苏木素-伊红(HE)染色，置于光学显微镜下观察肾组织草酸钙结晶形态、沉积分布及肾组织病理变化。

1.4统计学处理 采用SPSS14.0软件，多组比较采用LSD法。

2 结 果

2.1广金钱草提取物对尿量及尿生化指标的影响 与空白对照组相比,模型组尿草酸水平及尿钙水平显著升高(P<0.05)。模型组24 h尿量明显高于空白对照组，广金钱草提取物低、中、高剂量组24 h尿量明显高于空白对照组和模型组(P<0.05)。模型组、广金钱草提取物低剂量组尿Ca2+明显高于空白对照组(P<0.05)；广金钱草提取物中、高剂量组尿Ca2+明显低于模型组(P<0.05)，广金钱草提取物高剂量组的尿草酸低于模型组(P<0.05)。与空白对照组相比，广金钱草提取物高剂量组尿柠檬酸明显升高(P<0.05)；各组尿Mg2+水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2广金钱草提取物对血生化指标的影响 与空白对照组相比，模型组血BUN、Cr水平显著升高(P<0.05)；与模型组比较，广金钱草提取物低、中、高剂量组大鼠血BUN、Cr水平明显下降(P<0.05)；而各组大鼠血P、Mg2+、Ca2+水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 各组尿量及尿生化指标检测结果

与空白对照组比较：1)P<0.05；与模型组比较：2)P<0.05；下表同

表2 各组血生化指标检测结果

2.3广金钱草提取物对肾组织SOD活力及MDA含量的影响 与空白对照组大鼠相比，模型组肾脏组织GSH、SOD水平显著降低(P<0.05)；而与模型组比较，广金钱草提取物低、中、高组GSH、SOD含量显著升高(P<0.05)；模型组肾脏组织中MDA水平显著高于空白对照组(P<0.05)，与模型组相比，广金钱草提取物各剂量组MDA含量明显下降(P<0.05)。广金钱草提取物各剂量组大鼠肾脏草酸钙结晶评分明显高于空白对照组，但显著低于模型组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 各组血生化指标检测结果

2.4广金钱草提取物对肾组织草酸钙沉积的影响 显微镜观察结果显示，HE染色的草酸钙晶体为淡灰色至白色透明状晶体(图1)；Von Kossa染色的草酸钙晶体呈黑色(图2)。肾脏组织病理学分析显示，空白对照组无明显病理变化和草酸钙晶体沉积。模型组肾组织内有大量草酸钙晶体形成及沉积(图2)，主要存在于肾髓质内，肾乳头及肾皮质、肾小管上皮细胞肿胀、变性、坏死显著，管腔扩张，管腔内存在草酸钙晶体沉积，肾间质发生明显的慢性间质性炎症。与模型组比较，广金钱草中、高剂量组肾组织中草酸钙晶体沉积显著减少，结构破坏减轻，管腔扩张程度较轻，病理损伤明显减轻。

图1 各组肾组织HE染色结果(×100)

图2 各组肾组织Von Kossa染色结果(×100)

3 讨 论

随着医疗技术的不断发展与进步，泌尿系结石微创和无创技术在临床中应用广泛，但手术易引起急性肾损伤，导致肾功能减退的发生，出现多种并发症，如穿孔、出血、结石残余等。泌尿系结石模型是研究结石形成及防治的重要方法〔4〕，采用1%乙二醇+1%氯化铵饮水饲养，建模时间短，自由饮水4 w。可有效建立Wistar大鼠肾草酸钙模型。病理切片HE和Von Kossa染色证明有效建立了大鼠草酸钙肾结石模型。本研究结果表明广金钱草提取物有利尿作用，增加尿量，利于草酸钙结晶排出，降低尿液饱和度，一方面可以冲刷肾盂，另一方法也避免结晶的形成或滞留。广金钱草提取物组尿Ca2+明显降低，推测是尿钙与草酸结合形成结晶。BUN、Cr是评价肾功能常用指标，可以提示肾功能损害程度〔5〕。本实验结果显示，广金钱草提取物可以保护肾功能，减轻肾脏损伤。MDA是ROS诱导的氧化应激的最常见脂质过氧化产物〔6,7〕，本研究结果发现，广金钱草提取物还具有抗氧化和预防结石复发等作用。肾脏组织病理学分析也显示，广金钱草提取物可以有效缓解造模导致的肾损害。

4 参考文献

1汤宗源,江顺建,李 江,等.广西瑶族成年人肾结石流行病学调查〔J〕.中国全科医学,2015;14:1691-4.

2高玉桥,赖海标,梅全喜,等.中药防治泌尿系结石的实验研究进展〔J〕.亚太传统医药,2008;4(2):37-9.

3Gohel MD,Wong SP.Chinese herbal medicines and their effieacy intreating renal stones〔J〕.Urol Res,2006;34:365-72.

4李笑然,岳中瑾,裴 薇.4种大鼠肾草酸钙结石模型的比较〔J〕.现代泌尿外科杂志,2013;18(4):329.

5Moe OW.Kidney stones:Pathophysiology and medical management〔J〕.Lancet,2006;367(9507):333-44.

6Ghaoui WB,Ghanem EB,Chedid LA,etal.The effects of Alcea rosea L,Malvasylvestris L.and Salvia libanotica L.water extracts on the production of anti-egg albumin Antibodies,interleukin-4,gamma interferon and interleukin-12 in BALB/c,mice〔J〕.Phytother Res,2008;22(12):1599-1604.

7Kardosova A.Antioxidant activity of medicinal plant polysaccharides〔J〕.Fitoterapia,2006;77(5):367-73.