HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值

于锰锰 李小芹

人巨细胞病毒（HCMV）感染为儿科常见病、多发病，属于疱疹病毒科β属，是一种具有潜伏性的双链DNA病毒，当免疫功能发育不全或者减弱后，HCMV原发性或者潜伏-再激活感染就会使患者表现出黄疸、肝脾肿大、咳嗽、发热及贫血等临床症状，因上述临床症状不具备特异性，因此对患者开展早期HCMV感染活性诊断意义重大。有文献指出，HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染中有明显价值[1]。现选择2014年7月～2017年7月在我院就诊的疑似HCMV感染患儿为研究对象，探讨HCMV-PP65抗原检测对其诊断价值，报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2014年7月～2017年7月于我院就诊的疑似HCMV感染患儿为研究对象，共200例。男116例，女84例。年龄2.5月～5.14岁。按照卫计委颁布的关于HCMV感染诊断方案，最终确诊为感染者共计104例。排除其余类型感染。分别使用HCMV-PP65抗原检验、化学发光法、FQ-RCR法对200例患儿进行检测。

1.2 设备与试剂 化学发光仪，荧光定量PCR仪，荧光显微镜。HCMV-PP65抗原检验试剂盒，DNA提取试剂盒，化学发光免疫分析试剂盒，FQ-PCR检验试剂盒。

1.3 样本收集及检测 在患儿监护人知情同意前提下，收集受试者空腹静脉血5.0ml进行检验，均分为2份。其中1份进行3.0ml ED-TA-K2抗凝，开展PP65检测。样本收集完成后6h内对PMNLs细胞进行分离。另取1份2.0ml促凝，以3 000r/min 离心，分离血清和血浆。放置在4℃环境中保存。利用化学发光法完成检测，留取被检测者尿液开展FQ-PCR检查，完善质量控制，同批次样本在24h内完成相关检查。

1.4 结果判定 FQ-PCR检测阳性标准：HCMVDNA拷贝数量在1.00E+03以上。PP65抗原阳性检测标准：2×105个多形核白细胞内PP65抗原阳性细胞在3个以上。化学发光法测定HCMV-IgM在15AU/ml以上为阳性。相关检测阳性和阴性对照品均符合标准。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件，计数资料使用χ2检验，一致性计算经Kappa系数进行表示。ROC曲线下面积计算经在本软件ROC绘图功能得以实现，假设检验水准为α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

化学发光法灵敏性较高，漏诊率最低，PP65抗原检测误诊率最低，特异性最高（P<0.05）。PP65抗原检测的阳性似然比、阳性预测值、总符合率较高（P<0.05），Youden指数与化学发光法相似，比PCR高。化学发光法的阴性预测值较高（P<0.05）。FQPCR、化学发光法和PP65抗原检测3种方法ROC曲线下面积分别为0.677、0.696、0.744。3种检测方式检测小儿巨细胞病毒感染的灵敏性、特异性、漏诊率以及误诊率情况见表1，阳性预测值、阴性预测值以及阳性似然比、阴性似然比、Youden指数和总符合率情况见表2，ROC曲线分析见图1。

表1 不同方式检测小儿巨细胞病毒感染的灵敏性、特异性、漏诊率及误诊率比较（%）

表2 不同方式检测阳性、阴性预测值及阳性、阴性似然比、Youden指数、总符合率情况

图1 ROC 曲线分析不同方式对巨细胞病毒感染的诊断价值

3 讨论

HCMV感染为引起小儿中枢神经系统受损、癫痫、脑瘫、发育迟缓等疾病的主要因素，感染后病死率高达20.00%以上。当前，WHO已经将其认定为危害小儿生命健康的疾病之一。敏感性强、特异性高、重复率佳的早期诊断方式及针对性治疗，为诊治HCMV感染的关键所在[2]。

PP65抗原在HCMV活动性感染中呈高表达，且在病毒血症前8d及临床症状出现前2周呈现为阳性，其和PCR法检测出的HCMV-DNA时间更早。血液内出现的PP65抗原阳性白细胞，可判定为抗原血症阳性，结合相关临床诊断，可判定为HCMV感染。本研究中，和其他两种方式相比，PP65的阳性似然比、阳性预测值、总符合率较高（P<0.05），Youden指数和化学发光法相似，比FQ-PCR高，误诊率较低，ROC曲线下面积最大，证实PP65抗原检测为诊断HCMV感染的良好方式。HCMV-IgM抗体为抗原经刺激后较早出现的抗体种类，血清内如果出现HCMV特异性IgM抗体，证实在近期内存在活动性感染。化学发光法较为简单，可实现自动化操作[3]，其为当前常用的检测IgM抗体方式。本研究中化学发光法的灵敏性较高，漏诊率最低。但因为小儿的免疫系统尚未发育完善，因而对于IgM抗体评价过程中，应注意假阴性结果。因为患者机体内高水平IgG及类风湿性因子等干扰，实验结果会出现假阳性，这与本研究中化学发光法误诊率最高相符合。

FQ-PCR为当前临床应用较多的定量PCR方式[4]。因病毒DNA的出现通常比细胞病毒感染的临床症状或者血清学反应早，使用此法开展HCMV感染DNA检测，对于抗HCMV治疗和预防有着一定意义[5，6]。HCMV具有噬上皮特点，其容易在肾脏细胞内感染，检查尿液内的HCMV-DNA就阳性检出率来讲，比血液标本高[7]。本研究中，此法除阴性似然比及漏诊率和化学发光法存在差异外，其余指标相近。但使用此法检测出的HCMV-DNA片段，仅能证实存在HCMV感染，无法区分其感染性质，这一点和本研究中FQ-PCR误诊率高有一致性。

综上所述，3种HCMV感染检测方式各有优势，也存在一定不足。但与其他两种方式相比，PP65抗原阳性细胞能全面反映HCMV数量情况，可被用于检测早期活动性HCMV感染及治疗效果观察，其特异性强、操作简单，值得进一步推广使用。

1 袁浩，唐曾，周毅峰.巨细胞病毒的3种检测方法在诊断小儿巨细胞病毒感染中的评价[J].现代预防医学，2014，41（14）：2607-2610

2 陈鲲，胡洪波，彭巧英.UL37x3检测在新生儿晚期黄疸巨细胞病毒感染诊断中的应用 [J].中国热带医学，2015，15（2）：204-206

3 谢栋栋，林政，施浩强，等.HCMVpp65抗原血症和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值[J].安徽医科大学学报，2011，46（9）：950-952

4 刘小宁，衡春，李元媛，等.60例小儿巨细胞病毒感染的血液学检测分析 [J].中华医院感染学杂志，2012，22（4）：733-734

5 裴蕴锋.小儿巨细胞病毒感染状况分析[J].检验医学与临床，2013，10（8）：980-981

6 严达尊，吴起武.婴幼儿人巨细胞病毒感染合并反应性血小板增多症 36例 [J].广东医学， 2014，35（3）：428-429

7 钟峰，赵俊，张业婷，等.定量检测HCMVpp67mRNA快速诊断人巨细胞病毒活动性感染[J].安徽医科大学学报，2016，51（3）：324-328