网织红细胞参数在新生儿溶血病治疗中的应用价值

杨 丹， 李 巍， 叶志成， 徐 锦

（复旦大学附属儿科医院临床检验中心，上海 201102）

新生儿溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）是新生儿常见疾病，轻则引起病理性黄疸，重则引起重度贫血、损害患儿神经系统，甚至死亡[1]。网织红细胞（reticulocyte，RET）数是贫血的敏感指标[2]，RET增多表示骨髓造血功能旺盛，常见于各种增生性贫血。而减少常见于再生障碍性贫血。现国内对RET参数在HDN中的应用研究尚少，因此我们分析RET参数变化在HDN治疗中的价值。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2016年3月1日—9月30日来复旦大学附属儿科医院新生儿科住院的患者，入院确诊为HDN。从中挑选出44例符合要求的患者，其中男21例、女23例，年龄2～28 d。分别于入院当天、治疗中、出院当天采集末梢血备用，当天采集当天检测。

1.2 方法

1.2.1 仪器法计算网织红细胞计数百分比（reticulocyte percentage，RET%）及其他参数 采用日本Sysmex公司生产的CELLPACK DFL 试剂240 μL与40 μL末梢血充分混匀，对末梢血进行1∶7稀释。稀释后的标本采用XN-2000血液分析仪（日本Sysmex公司）1∶7稀释通道检测。测定HDN患者入院当天、治疗中、出院当天3个时间点的RET%，同时检测未成熟网织红细胞百分比（immature reticulocyte fraction percentage，IRF%）、低荧光强度网织红细胞百分比（low fluorescence reticulocyte percentage，LFR%）、中荧光强度网织红细胞百分比（medium fluorescence reticulocyte percentage，MFR%）、高荧光强度网织红细胞百分比（high fluorescence reticulocyte percentage，HFR%）共5个指标。其中，IRF%=HFR%+MFR%，IRF%+LFR%=100%，低荧光强度RET即成熟RET。上机前对血液分析仪进行质控分析，确保各项指标在控后方能进行检测。

1.2.2 分组 以入院时RET%为基线水平，出院时RET%下降≥25%定义为明显降低组（Ⅰ组），下降＜25%为无明显降低组（Ⅱ组）[3]。

1.3 统计学方法

利用Excel 2003和SPSS 22.0软件进行统计分析，呈正态分布的数据以x±s表示，组间比较采用配对样本t检验以及两变量的相关分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RET各参数在HDN治疗过程中的变化情况分析

随着治疗的进行，RET%、IRF%、HFR%、MFR%总体呈进行性下降，LFR%呈进行性上升，入院时与治疗中、入院时与出院时、治疗中与出院时同一参数之间比较差异均有统计学意义（p＜0.05）。入院时RET%＞正常值（2%～6%）有23例[4]，占总数的52.27%。与入院时相比较，出院时RET%明显下降有37例，占总数的84.09%。见图1。

图1 入院时、治疗中、出院时RET各参数的变化情况

2.2 Ⅰ组及Ⅱ组中IRF%、MFR%、HFR%的变化情况

Ⅰ组出院时RET%、IRF%、MFR%、HFR%与入院时相比，差异均有统计学意义（p＜0.05）。Ⅱ组出院时RET%、IRF%、MFR%、HFR%与入院时相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 相关性分析

Ⅰ组RET%下降值（入院时－出院时）与IRF%、MFR%、HFR%下降值进行相关性分析，RET%下降与IRF%、HFR%下降呈正相关（r值分别为0.632、0.639，p＜0.01），与MFR%下降不具有相关性（r=0.321，P＞0.05）。见图2。

图2 RET%与IRF%、HFR%的相关性分析

3 讨论

HDN指母、子血型不合而引起的同族免疫性溶血病，主要分为ABO溶血病和Rh溶血病。发病机制是由父亲遗传而母亲所不具有的显性胎儿红细胞血型抗原，通过胎盘进入母体，刺激母体产生相应的血型抗体，当不完全抗体（IgG）进入胎儿血循环后，与红细胞相应抗原结合，在单核-吞噬细胞系统内被破坏，引起溶血[5]。ABO溶血病会引起病理性黄疸，而Rh溶血病可引起重度贫血，甚至心力衰竭。未娩出时，胎儿血中胆红素可由胎盘进入母亲肝脏进行代谢，故娩出时黄疸并不明显。新生儿出生后，处理胆红素能力较差，若血清中未结合胆红素过高，则可透过血-脑屏障，使基底核等处神经细胞黄染、坏死，发生胆红素脑病[5]。

RET是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡细胞，其数量增减直接反映骨髓红系生成能力。正常新生儿RET%参考区间为2.0%～6.0%[4]。但刘志贤等[6]的研究结果表明，新生儿RET%第一天最高，为3.09%～6.81%，随日龄变化而逐渐降低，最低可至0.27%～1.15%，渡过低值期后逐步回升，于婴儿期前后才达到成人水平（0.5%～1.5%）。新生儿存在生理性红细胞破坏，因此难以在早期根据患儿血红蛋白含量判断是否发生HDN。本研究结果发现，疾病发生阶段RET%升高者占患者总数的52.27%。若严格按刘志贤等[6]研究作为参考，实际上RET%升高占总数的比例还要高，表明RET%是HDN一个比较敏感的指标，RET%升高时提示患HDN概率大。

本研究结果表明，RET%下降与IRF%、HFR%下降呈正比，三者变化趋势一致。当RET%明显降低时，IRF%和HFR%也会降低，相反，LFR%则会升高。由此说明，HDN早期有大量中荧光强度RET进入血液，且其中以高荧光强度RET迅速增加为特征，后期随治疗进行，高荧光强度RET急剧减少，低荧光强度RET升至正常水平，从而标志着患儿进入治愈期。结合患儿病史，在Ⅱ组中，所有患儿入院时黄疸程度均未触及光疗线，患儿溶血程度不高，在RET%的下降幅度上也有所体现。因此，IRF%、HFR%与LFR%可作为监测HDN治疗的辅助指标。曹科等[7]的研究表明，血细胞分析流水线RET参数的参考区间并不适用于儿科实验室。因此，没有建立本实验室参考区间是本研究存在的局限性，希望能在之后研究中加以重视。

综上所述，RET%可作为监测HDN治疗过程中的一个比较敏感的指标，当RET%下降明显时，提示治疗有效。同时，IRF%、HFR%和LFR%也可辅助监测HDN疗效，当IRF%、HFR%下降，LFR%升高时提示治疗有效。

[1]詹影影. ABO血型系统诊断新生儿溶血病的实验研究[J]. 中国卫生检验杂志，2010，20（6）：1421-1422.

[2]栾虹，郑军，董西华，等. 网织红细胞参数在贫血性疾病鉴别诊断中的应用[J]. 中国医科大学学报，2011，40（11）：1018-1019.

[3]张拥黎，卢仁泉，周磊，等. 网织红细胞计数在肿瘤患者化疗监测的临床价值[J]. 检验医学，2016，31（5）：359-362.

[4]刘成玉，罗春丽. 临床检验基础[M]. 5版. 北京：人民卫生出版社，2012： 38.

[5]沈晓明，王卫平. 儿科学[M]. 7版. 北京：人民卫生出版社，2008： 118-119.

[6]刘志贤，李剑鸿，曾建武. 415例新生儿网织红细胞计数参考范围的探讨[J]. 生物医学工程与临床，2008，12（6）：487-489.

[7]曹科，马东礼，罗小娟，等. 全自动血细胞分析流水线网织红细胞参数参考区间在儿科实验室适用性验证[J]. 检验医学与临床，2016，13（2）：184-185.