HPLC法检测蔬菜水果中赤霉素的残留量

2018-05-25浙江鼎龙科技有限公司钱辉俊杭州海泰检测有限公司检测中心浙江鼎龙科技有限公司

食品安全导刊 2018年36期

关键词：油麦赤霉素标准溶液

□ 赵燕浙江鼎龙科技有限公司钱辉俊杭州海泰检测有限公司检测中心陈伟浙江鼎龙科技有限公司

1 材料与办法

1.1 材料准备

本次实验中使用的设备包含高效液相色谱检测仪器、波长紫外检测仪器、高速匀浆机、旋转蒸发仪等；使用的溶剂包含甲醇标准品、冰乙酸标准品、乙酸乙酯标准品、石油醚标准品、盐酸溶液标准品和赤霉素标准品。

1.2 检测办法

1.2.1 对标准储备液进行配制

称取含量大于99.0%的赤霉素0.123 1 g，使用甲醇将其溶解同时定容到100 mL。这时该溶液的浓度为每毫升中含有1.00 mg赤霉素。

1.2.2 选取样品处理办法

①对溶剂进行提取。提取剂选用了甲醇与丙酮溶液，将2.0 mg/kg赤霉素标准溶液加入其中检测回收率。②选择提取方式。实验的样品选定为油麦菜，同时采用高速匀浆提取方式提取2 min，使用超声波振荡方式处理15 min，使用超声波振荡方式振荡30 min，之后对效率进行对比。③净化条件的选择。选择的实验样品为西红柿与油麦菜，将5.0 mg/kg的赤霉素标准溶液加入样品中，之后采用净化处理，然后比较回收率。

1.2.3 验证检测办法线性关系、检出限、精密度等

稀释赤霉素标准溶液，之后使用仪器对其进行检测，设置y表示峰面积，x表示质量的浓度，之后绘制回归标准曲线。在操作人员一致、实验地点一致、处理方法一致的前提下，在短时间内测量其中的赤霉素含量。之后选取三个不同的实验地点，同时加入5.0 mg/kg赤霉素标准溶液，反复测试白菜样品。然后将不同浓度的赤霉素标准溶液添加到番茄、白菜、辣椒、香蕉、葡萄、油麦菜中，之后测试其回收率，再对空白样品与加标样品回收率进行比较，同时重复3次实验。

图1 赤霉素溶液的高效液相色谱图

2 结果与分析

2.1 确定提取条件

2.1.1 溶剂的提取

将甲醇作为主要提取剂可以获得85.3%～92.1%的回收率，将丙酮作为提取剂时可以获得82.7%～107.3%的回收率。两种提取剂的回收率较为类似，但相比于丙酮来说，甲醇价格低廉，同时还不会含有较高的毒性，因此在本次实验中赤霉素的提取溶剂采用了甲醇。

2.1.2 提取方式

使用高速匀浆与超声波振荡的提取方式，振荡处理30 min后回收率分别会达到标准，符合实验要求。但使用超声波振荡处理方式会需要更多的时间，同时对提取瓶密封性提出较高要求，从而降低实验效率，因此本次实验中采用了高速匀浆的提取方式。

2.2 选择净化条件

融合C18柱固相萃取净化方法与液液萃取方法，可以使回收率达到71.6%～89.5%，但使用液液萃取与反萃取互相结合的方式可以获得84.5%～96.1%的回收率。可以看出，将液液萃取与反萃取净化方式结合使用的方式，可以使净化效果更佳，同时也不会对目标峰附近产生较多干扰，因此本次实验选取了液液萃取与反萃取净化互相结合的净化方法。为了尽可能降低实验干扰，实施净化处理之前，实验人员采用石油醚彻底清除实验样品中的色素。

2.3 选取色谱条件

2.3.1 对波长进行检测

在200～400 nm波长范围前提下，赤霉素的紫外吸收性最高，这时利用紫外线扫描赤霉素，可以获取赤霉素的波长值，同时206 nm情况下会具备最强的吸收性，因此本文实验采用的波长值为206 nm，同时使用该波长对赤霉素进行检测。

2.3.2 色谱柱分析

赤霉素作为二萜类酸的一种，其分子特点为中等极性，因此对固定相进行选择适应，选择较小极性的键合固定相，因此在本文实验的色谱分析方式为C18柱[1]。

2.3.3 流动相分析

由于赤霉素自身性质因素的影响，因此检测过程应在温度较低的酸性条件下。在pH值达到3～4，赤霉素溶液处于最稳定状态。因此，在本次实验中，将0.1浓度冰乙酸水溶液与甲醇共同作为流动相。通过实验与结果可以看出，使用45%浓度时会获得最佳的峰型，出峰时间更加合理，还可以加强杂质的分离效果。因此实验中流动相使用了0.1%浓度的冰乙酸水溶液与甲醇，流动相的配比情况为45+55。

2.4 液相色谱分析

通过制作赤霉素标准溶液与油麦菜加标样品的液相色谱图，使用上文中描述的方式分析样品，可以确保蔬菜样品杂质峰、目标峰保持分离，从而充分满足赤霉素的定量、定性需求。

2.5 对线性关系、检出限准确性进行检测

赤霉素的线性关系公式为：y=4E-05x+0.2785，相关系数为：r2=0.9999，从公式中可以看出线性关系较好。由于赤霉素的最低检出浓度为0.067 mg/kg，通过对油麦菜中赤霉素含量平行性测定结果可以看出，本文采用的方法与标准偏差值不超过10%。本文使用的方法RSD值都不超过10%，可以确保重复性满足实际应用需求。本文采用的蔬菜水果样品包含油麦菜、番茄、白菜、辣椒、香蕉、葡萄，通过对样品加标回收率及相对标准偏差进行实验与计算后可以看出，回收率都处于71.6%～105.2%，RSD值均为2.1%～9.8%，变异系数均不超过10%，可以说明在进行检测与分析时，并没有出现显著的误差，也可以证明赤霉素样品分析结果十分准确[2]。

2.6 测定方法的成立

2.6.1 样品的预处理

在250 mL三角瓶中加入20 g试样，之后将60 mL 80%的甲醇溶液加入其中，匀浆提取时间为2 min，之后使用布氏漏斗进行抽滤，将提取出的溶液加入到250 mL分液漏斗中，之后使用20 mL甲醇溶液对其进行2次重复润洗滤渣，并将提取液合并。之后将20 mL石油醚加入到提取液中，使用混匀与静止处理方法对其进行处理后，可以使石油醚层被有效去除。然后将完成脱色的提取液放置在40 ℃条件下进行减压浓缩处理，直至容量为20 mL，在其中加入盐酸溶液对pH值进行调节，pH值达到2.5～2.8后，将20 mL乙酸乙酯加入其中并进行3次的反复萃取，使乙酸乙酯相合并，再次进行减压浓缩至20 mL。再使用相同容量的磷酸盐缓冲溶液进行3次反萃取，之后对磷酸盐缓冲液进行合并，将pH值使用盐酸溶液调节至2.5～2.8，并加入20 mL乙酸乙酯进行3次萃取，最后在40 ℃条件下完成减压蒸干处理。处理后加入2 mL甲醇使残渣溶解，使用0.22 μm有机滤膜进行过滤，然后装入瓶中为液相色谱分析做准备。

2.6.2 色谱条件分析

完成液相色谱分析后，获得以下结果：色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C184.6 mm（I.D.）×250 mm，5 μm。流动相为：甲醇结合0.1%浓度冰乙酸水溶液（45+55）；流速为1.00 mL/min；柱温为40 ℃；进样量为10 μL；检测波长为206 nm。