80例人乳头瘤病毒HPV分型阳性检测结果分析

凤婷，陈徳林，金长碧，刘雁

人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）是一种无包膜的双链DNA病毒，目前已发现的HPV种类有200多种，然而只有30多种与生殖道系统肿瘤有关。在临床上，引起肛门外生殖器尖锐湿疵和宫颈病变（包括宫颈癌）的亚型主要有HPV6、11、16、18、31、33、35和38型等8个亚型[1]。科学家已经发现感染高危型HPV是导致宫颈癌发生的主要原因，这为宫颈癌的防控带来了新的契机。而HPV感染较为普遍，绝大多数妇女均感染过HPV，并且多数为一过性[2]。国内学者研究发现，在我国与宫颈高级别病变密切相关的HPV型别依次是16、18、45、31、33[3]。近年来，中国宫颈癌的发病率和死亡率呈上升趋势[4]。患病的“年轻化”趋势非常明显。有研究表明，对宫颈癌患者早期诊断、治疗，其5年治愈率可达80%～90%[5]。因此有效的筛查方法是发现宫颈癌前病变，阻断、降低宫颈癌发生的重要手段之一。

1 材料与方法

1.1 标本来源 本院妇产科住院患者,女性80例,年龄21～80岁.平均年龄42.3岁。标本都以无菌专用棉拭子采集本院妇产科患者宫颈分泌物，加入专用病毒保存液中,旋紧管盖并密封送检.

1.2 标本采集方法 标本都以无菌专用HPV宫颈刷由临床医生采集本院妇产科患者宫颈分泌物放入HPV专用病毒保存液中,旋紧管盖并密封送检。

1.3 采集完的标本应立即送检或放在4℃冰箱内（若现场没有冰箱，可立即放入冷藏箱内），在24小时内用冷藏箱运送至实验室进行检测。若24小时内不能送达，需置-70℃以下保存。

1.4 核酸提取 ①将密闭送检宫颈分泌物反复搅拌洗脱刷上分泌物混匀，准确吸取200μl标本加入EP管中，12 000转离心10 min，去上清；②沉淀中加入500μl无菌生理盐水，吹打混匀，震荡数秒钟，离心10 min，去上清；③沉淀中加100μl提取液,吹打混匀,震荡数秒钟，瞬时离心数秒钟，100℃加热10 min,12 000离心5 min备用；④将配好反应液取36μl于扩增管中，加入提取DNA 4μl后，震荡数秒钟，离心30 s上机扩增检测。

1.5 试剂 上海之江生物有限公司生产的人乳头瘤病毒核酸核酸提取宫颈分泌物HPV分型检测HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、82和66型等，均为批检合格产品。

1.6 仪器 本次研究采用SLAN-96P核酸检测仪。

1.7 方法

1.7.1 实验步骤 按照SLAN-96P核酸检测操作规程进行检测,实时荧光定量PCR技术可实时监测PCR的整个反应过程，从整个实时监测的荧光曲线上找到扩增反应的指数扩增起始期，利用每一个扩增检测到达指数扩增期起始所需要的扩增循环数来进行定性检测。根据、临界、阳性质控条件进定性结果判定分析，确定检测结果有效。

1.7.2 质量控制 阴性质控品的增长曲线不是”S”型曲线或无Ct值；阳性质控品的增长曲线呈”S”型曲线且Ct值≤30。结果判断：若检测样本无典型”S”型扩增曲线或Ct值≥34.8，则判断为HPV型阴性；若检测样本呈典型”S”型扩增曲线或Ct值≤34.8，则判断为HPV型阳性。

1.8 统计学方法 用SPSS统计软件处理，组间比较采用配对资料t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 本次研究的80例患者都来自临床住院最终确诊为子宫肿瘤、子宫平滑肌瘤、子宫炎症患者。

2.2 子宫肿瘤36例定性检出阳性率主要16型为38.9%、52型阳性为27.8%、58型阳性为22.2%、39型阳性为8.3%、82型阳性为8.3%、68型阳性为5.6%。

2.3 子宫平滑肌瘤23例检出阳性率主要16型为21.7%、52型阳性为17.4%、58型阳性为13.0%、82型阳性为13.0%、39型阳性为8.7%、68型阳性为8.7%。

2.4 子宫炎症21例定性检出阳性率主要52型阳性为28.6%、58型阳性为 23.8%、59型阳性为 19.0%、16型为14.3%、18型阳性为9.5%、68型阳性为9.5%、35型阳性为9.5%。各组间差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

3 讨论

3.1 人乳头瘤病毒是一组无包膜的小DNA病毒，能诱发人和多种高级脊椎动物的皮肤黏膜产生疣和乳头状瘤，是引起男、女生殖道感染常见病原体。HPV的血清型超过66种，HPV感染的后果与HPV的型别有密切关系。 黏膜感染中有近30种类型的HPV可以引起生殖道感染，其危险程度分为低危险型HPV和高危险型HPV（可能导致恶性变）。低危险型HPV6、11、42、43、和44型等，可引起尖锐湿疣，引起恶性变的概率较小。高危险型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、82和66型等，可导致男性阴茎癌和女性宫颈癌。HPV通常经性接触传染。本次研究80例女性宫颈分泌物高危险型HPV阳性分型在子宫肿瘤、子宫平滑肌瘤、子宫炎症患者宫颈分泌物中HPV分型结果来探讨如何指导临床预防和治疗。

表1 HPV阳性80例分型病毒核酸检测三种病毒子宫肿瘤、子宫平滑肌瘤、子宫炎症阳性分型关系[n（%）]Table 1 HPV positive detection of viralnucleic acid in 80 cases of uterine tumor,uterine leiomyoma and uterine inflammation[n(%)]

3.2 此次研究对象为80例，标本较少,但是仍然发现人乳头瘤病毒HPV分型阳性患者,子宫肿瘤阳性率高达45%(36例)，与子宫平滑肌瘤阳性率高达28.7%（23例）和子宫炎症阳性率26.3%（21例）。呈显著性差异，说明高危险型HPV分型检测阳性患子宫恶性肿瘤概率相当高。

3.3 子宫恶性肿瘤HPV分型发现HPV16型占38.9%与HPV52型占27.8%和HPV58型占22.2%以及其它类型呈显著性差异，HPV感染导致子宫恶性肿瘤以HPV16型为主，如果三项联合检测88.9%,通过这三联合HPV分型可对危险度进行评估。

3.4 子宫平滑肌瘤HPV分型HPV16型占21.7%、HPV52型占17.4%与HPV58型占13.0%,HPV82型占13.0%,发现子宫平滑肌瘤由人乳头瘤病毒HPV感染引起主要HPV16、52、58和82型。四项合占65.2%,而HPV16、52和58又是引起恶性肿瘤的主要亚类型。应引起高度观注。可较准确地评估妇女患宫颈癌的危险度。

3.5 子宫炎症HPV分型HPV52型占28.6%、HPV58型占23.8%、HPV59型占19.0%与HPV16型占14.3%,四项结果呈显著性差异,人乳头瘤病毒HPV感染引起子宫炎症主要是HPV52、58、59和16型。

3.6 通过人乳头瘤病毒HPV感染诊断辅助分型检测，可对危险度进评估，进议作为妇女健康体检筛查指，及时进行有效预防和治疗，降低患宫颈癌的危险度。

终上所述，子宫肿瘤主要是16型、52型和58型感染为主，子宫平滑肌瘤主要是16型、52型和58型感染为主，子宫炎症主要52型、58型、59型和16型感染为主。但三项联合检测为88.9%，通过这三联合HPV分型可对对危险度进行评估。

参考文献

[1] 张静,张亚静.HPVL1蛋白在宫颈鳞状上皮内病变中的表达及意义[J].实用医学杂志,2013,29(19)：3199-3201.

[2] 庄勋,顾晓梅,何爱琴.宫颈癌危险因素的流行病学调查[J].中国妇幼保健,2008,23(28)：4053.

[3] 王宏景,龙秀荣,耿建祥,等.宫颈癌瘤组织中HPV感染基因型分布的比较研究[J].国际检验医学杂志,2014,35(5)：533-535.

[4] 胡尚英,郑荣寿,赵方辉,等.1989至2008年中国女性子宫颈癌发病和死亡趋势分析[J].中国医学科学院学报,2013,36(2)：129-135.

[5] 金红雁,黄惠娟,陆红梅.HPV,TCT及阴道镜对宫颈癌筛查的意义[J].中国妇幼保健,2010,25(29)：4307-4308.