《病原生物学》实验教学探索

邹秀月

[摘 要] 通过病原生物学系列实验，树立护士生有菌、无菌观念，培养无菌操作技术。实现课程内容与职业标准对接，以职业需求为导向、以实践能力培养为重点，培养技术技能型护士。

[关 键 词] 无菌观念；有菌观念；无菌技术

[中图分类号] G712 [文献标志码] A [文章编号] 2096-0603（2018）05-0123-01

一、树立有菌观念

微生物是肉眼看不见，经显微镜或电子显微镜放大后才可见的微小生物。病原生物中最常见的微生物是细菌，虽然单个细菌肉眼看不见，但群体的细菌是肉眼可见的，如菌落。根据这个特点，开设系列实验，树立学生的有菌意识。

（一）空气中细菌的检查

将已灭菌好的琼脂平板开盖，让无菌的琼脂培养基暴露于空气中10分钟，然后放入培养箱培养。次日，观察实验结果。

次日，学生肉眼观察到培养基表面有菌落生长，这些菌落就是空气中的细菌掉落进去繁殖出来的，一个细菌繁殖成为一个菌落，记录细菌菌落数，菌落数的多少说明空气的清洁度。该实验证明空气中确实有细菌存在。

（二）皮肤上细菌的检查

用一根手指在已灭菌好的琼脂平板的培养基表面轻轻划线，然后放入培养箱培养。次日，观察实验结果。

次日，学生肉眼观察到培养基表面有菌落生长，这些菌落就是手指上的细菌繁殖出来的，一个细菌繁殖成为一个菌落，记录细菌菌落数，菌落数的多少说明手指皮肤的清洁度。该实验证明手指上确实有细菌存在。

（三）咽喉部细菌的检查

用咳碟法进行试验。取一皿血琼脂平板，打开皿盖，距离培养基5～10 cm处对着无菌的培养基咳嗽3～5次，盖好皿盖后放入培养箱培养。次日观察实验结果。

次日，学生肉眼观察到培养基表面有菌落生长，这些菌落就是咳嗽时喷出的咽喉部细菌繁殖出来的，一个细菌繁殖成为一个菌落。该实验证明咽喉部确实有细菌存在。

取以上这些实验培养出来的细菌经革兰染色后，在显微镜油镜下观察。学生观察到革兰染色阳性和阴性的各种形态的细菌。

通过这样一系列实验，学生从肉眼看不到细菌个体到肉眼看到细菌群体，有菌观念从感性认识上升到理性认识，认识得到升华。人们看不见细菌不等于它不存在，环境中和人体上都有大量细菌存在的，护士生必须牢固树立有菌观念。

二、树立无菌观念

灭菌是指杀灭所有微生物包括细菌的芽孢。无菌是无任何活的微生物，灭菌后的物体就是无菌的，无菌需要灭菌来实现。

（一）琼脂培养基的制备

人工培养细菌需要制备培养基。培养目的菌必须培养在无菌的培养基上，因此要想培养细菌得从制备无菌的培养基开始。

（二）培养细菌

1.灭菌实验

按需要量称量各种物质配制好培养基，然后进行高压蒸汽法灭菌，以无菌操作分装好培养基做好备用。取两皿培养基，甲皿中转种上细菌，乙皿不种，放入培养箱培养。次日观察甲、乙两皿培养基上细菌生长情况。

次日，观察到甲皿中出现细菌菌落，乙皿无细菌菌落，说明高压蒸汽法确实杀灭了培养基中的所有细菌。

2.灭菌对照实验

配制普通琼脂培养基，甲份进行高压蒸汽法灭菌，乙份不灭菌。将两份培养基放入培养箱培养。次日，观察细菌生长情况。

物品要实现有菌变无菌需要灭菌，灭菌后的物品才是无菌的物品。灭菌的方法有多种，病原生物实验室常用高压蒸汽灭菌法、烧灼法、煮沸法对实验用品进行灭菌。临床用的注射器、输液器等都是灭菌后独立包装的无菌包。当包装破损时，由于环境中微生物的污染，它们将变成有菌的。因此，使用前必须检查包装是否完好。

通过以上的实验，提高学生对有菌和无菌的认识，树立起有菌和无菌观念。在将来的工作中，能区分有菌物品及有菌区域和无菌物品及无菌区域，避免交叉污染和感染的发生。

三、学会无菌操作

无菌操作是指防止微生物进入人体或其他物品的操作技术。在进行医疗技术操作和微生物实验时均需要严格执行无菌操作，防止微生物感染和污染的发生。

微生物实验中细菌转种实验需要多次进行无菌操作，特别能训练学生的無菌操作能力，形成无菌操作技术。细菌转种实验是学生树立“有菌和无菌观念”，练习“无菌操作”最好的实验。“有菌、无菌、无菌操作”反复出现，多次练习，有利于“有菌、无菌”观念的树立，同时培养“无菌操作能力。下面以普通琼脂培养基上转种葡萄球菌为例来说明，具体的实验操作过程见下表。

葡萄球菌转种实验结束后，将待种培养皿放入培养箱培养，次日观察实验结果，可能出现两种情况：一种是待种培养皿中有菌落生长，说明转种成功；另一种是待种培养皿中无菌落生长，说明无细菌生长繁殖。分析原因，一种是接种环烧灼后未待其完全冷却就去取菌种，将菌种烫死；另一种是取菌种时未取到菌种，从而导致没有细菌生长繁殖。

在实践教学中树立学生的有菌、无菌意识，形成无菌技术，对诠释抽象理论教学不仅有验证作用，而且能让学生刻骨铭心地掌握无菌技术，并在将来的医疗技术操作中严格执行无菌操作技术，对防止医源性感染有极其深远的意义。

参考文献：

訾自强，杨秀珍.病原生物与免疫学[M].北京：人民卫生出版社，2009.