糖肾康对糖尿病大鼠肾组织保护的研究*

张云飞，张 燕，娄 缨

(1.河南中医药大学第三附属医院,河南 郑州 450008； 2.河南省人民医院，河南 郑州 450003；3.原阳县食品药品监督管理局，河南 原阳 453500)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病并发症，每年发生率高达47.7%，己成为终末期肾衰竭死亡的主要原因[1]。目前缺乏DN的有效治疗手段，探讨其早期防治非常重要。糖肾康由生地黄、黄芪、槐米、大黄、益母草、山楂6种中药材组成，具有益气养阴、清热祛湿、活血化瘀之效。本研究观察了糖肾康对实验性糖尿病大鼠血糖、体质量、肾脏肥大指数、肾脏病理形态学的影响，探讨其对糖尿病肾病的防治效果及作用机制。

1 材料与方法

1.1 动 物

成年Wistar大鼠52只，清洁级，雌雄各半，体质量(200±20)g，由河南省动物实验中心提供，实验动物生产许可证号为SCXK(豫)2013-002，饲养于河南中医药大学动物实验中心。饲养室内氨浓度小于20×10-6，室温为17～21 ℃，相对湿度40%～65%。明暗周期12 h，自由饮食，适应性喂养1周后，随机分组饲养。

1.2 药品、试剂与仪器

糖肾康组成：生地黄30 g,黄芪20 g,槐米30 g,大黄5 g,益母草20 g,山楂20 g。水煎两次，合并药液，浓缩为含生药2 g/mL的药液，4 ℃以下贮存备用。依那普利，10 mg/片，扬子江制药股份有限公司产品，批号08011003。链脲佐菌素(STZ)，美国Sigma公司，购自北京博奥森生物工程技术服务有限公司，批号L09838，使用时以0.1 mmol/L柠檬酸缓冲液新鲜配制成质量分数为10 g/L的 STZ溶液，pH值4.2。柠檬酸,上海浦口化学试剂有限公司提供，批号200110628；柠檬酸三钠,西安化学试剂厂产品，批号011108。RightestTu血糖仪，华广公司产品,机号230GK4065；RightestTu检测试纸条,华广公司产品,批号1189151。UV-120-02型 HANGPING电子秤，上海精科公司天平仪器厂产品；BM2135型石蜡切片机，LEICA产品；BS60型光学显微镜及显微镜摄像系统，OLYMPUS公司产品。

1.3 模型的建立与分组

成年52只Wistar大鼠，适应性饲养1周，尾静脉取血测量血糖，血糖值均正常(≤7.0 mmol/L)。随机取10只作为正常对照组，余42只造模。方法：大鼠禁食不禁水12 h，一次性单侧腹腔注射新鲜配制的质量分数为10 g/L的 STZ溶液(50 μg/g)，正常对照组注射等体积的0.1 mmol/L柠檬酸缓冲液。72 h后经大鼠尾静脉采血，测血糖值。以随机血糖≥16.7 mmol/L为大鼠DM模型成功。造模大鼠死亡3只，将剩余39只大鼠随机分成模型对照组、依那普利组、糖肾康组3组，每组13只。

1.4 给药方法

模型成功后，将所有动物在同一条件下(保持温度20～40 ℃，相对湿度40 %，12 h交替照明，保持垫料干燥)以普通饲料喂养，自由饮水，控制饲料。成模24 h后，开始灌胃。灌胃剂量按大鼠与人体表面积比折算成大鼠等效剂量[大鼠与人的体表面积比为0.018，人用剂量×0.018×5=大鼠所用标准剂量(g/kg)，取标准剂量的2倍为实验治疗剂量]。糖肾康组给以糖肾康药液5.4 g/(kg·d)(人用剂量30 g/d)灌胃，依那普利组给以依那普利3.6 μg/(g·d)(人用剂量20 mg/d)溶于等体积蒸馏水，灌胃；正常对照组与模型对照组以等体积蒸馏水灌胃。1 d 2次,连续56 d。

1.5 检测指标

观察大鼠一般情况，即体质量、食量、饮水量、尿量、形态、毛发、精神状态和活跃程度等。灌胃开始后第7天、第28天、第56天测体质量(电子称测量)、血糖(尾静脉取血，血糖仪测定)。第56天，脱颈椎处死全部大鼠，取大鼠左肾，用电子称称量质量；经肾门冠状面取组织，100 g/L 中性甲醛固定，石蜡包埋，切4 μm厚片，HE染色，采用光学显微镜观察肾脏组织形态学，显微镜摄像系统阅片、拍照。肾脏肥大指数=肾质量/体质量×103。

1.6 统计学方法

2 结 果

2.1 各组大鼠一般情况对比

实验过程中正常对照组大鼠精神状态良好，强壮肥硕，毛发光泽，活泼好动。与正常对照组对比，模型对照组、依那普利组、糖肾康组出现明显的多饮多食和消瘦症状，精神不振，毛发枯槁，行动迟缓；但糖肾康组呈逐渐好转的态势，灌胃开始后第49天时，大鼠饮水、食量接近正常。造模后3只大鼠死亡，分别死亡于造模后6 h、10 h、48 h。模型对照组有1只大鼠在灌胃开始后第15天死亡，考虑死亡原因为感染和高血糖所致的酮症酸中毒，正常对照组、依那普利组、糖肾康组无死亡，总死亡率为7.69%。

2.2 各组大鼠体质量、肾脏肥大指数对比

实验期间，正常对照组大鼠体质量逐渐增加，模型对照组、依那普利组、糖肾康组体质量逐渐减轻，其中糖肾康组减轻较为缓慢。第56天时，糖肾康组体质量已明显高于依那普利组(P<0.05)、模型对照组(P<0.01)。第56天时，模型对照组、依那普利组、糖肾康组肾脏肥大指数均高于正常对照组，差别有统计学意义(P<0.01)；模型对照组肾脏肥大指数最高，分别与依那普利组、糖肾康组对比，差别均有统计学意义(P<0.01)；糖肾康组肾脏肥大指数低于依那普利组，差别有统计学意义(P<0.01)。见表1、表2。

组别n第7天第28天第56天正常对照组10210．80±17．27221．30±17．08236．80±18．91＊＊模型对照组12175．33±18．92∗∗165．91±18．40∗∗140．91±18．68∗∗＊＊依那普利组13188．00±12．11∗∗172．23±13．70∗∗144．46±18．75∗∗＊＊糖肾康组13181．46±17．94∗∗170．23±17．33∗∗162．70±18．40∗∗##△＊

注：与同期正常对照组对比，**P<0.01；与同期模型对照组对比，##P<0.01；与同期依那普利组对比，△P<0.05；与同组第7天对比，＊P<0.05

组别n肾脏肥大指数正常对照组103．10±0．30模型对照组126．04±0．64∗∗依那普利组134．69±0．33∗∗##糖肾康组134．26±0．35∗∗##△△

注：与正常对照组对比，**P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.01；与依那普利组对比，△△P<0.01

2.3 各组大鼠血糖对比

不同时期模型对照组、依那普利组、糖肾康组的血糖均高于同时期的正常对照组，且维持在较高水平，差别有统计学意义(P<0.01)。第7天、第28天、第56天糖肾康组血糖逐渐降低，且第56天血糖明显低于第7天，差别有统计学意义(P<0.05)；糖肾康组第28天，第56天的血糖与同期模型对照组、依那普利组对比，差别有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表

3 各组大鼠不同时期血糖对比

组别n第7天第28天第56天正常对照组104．55±0．814．78±0．794．41±0．72模型对照组1227．51±2．38∗∗26．76±2．03∗∗28．18±2．16∗∗依那普利组1326．72±2．32∗∗26．28±2．47∗∗26．62±2．06∗∗糖肾康组1325．70±4．32∗∗23．02±2．95∗∗##△△19．53±2．21∗∗##△△＊

注：与同期正常对照组对比，**P<0.01；与同期模型对照组对比，##P<0.01；与同期依那普利组对比，△△P<0.01；与同组第7天对比，＊P<0.05

2.4 各组肾脏组织形态学对比

第56天时模型对照组、依那普利组、糖肾康组的肾脏肿大，包膜紧张，剖面呈充血状，以肾皮质为重，皮、髓质界限尚清。光镜下：正常对照组的肾小球椭圆形，轮廓规则整齐，分布均匀，系膜区无扩张，肾小管正常。模型对照组的肾小球体积增大，结构紊乱，弥漫性的系膜区增宽，基底膜增厚，细胞外基质增多,毛细血管扩张，肾小管细胞肥大，出现空泡样变性。依那普利组、糖肾康组较模型对照组轻，其中糖肾康组整体印象接近于正常。见图1。

3 讨 论

糖尿病肾病属中医学“消渴”“肾浊”范畴。笔者认为糖尿病肾病的基本病机为气阴两虚、血瘀湿热。气阴两虚为本，血瘀湿热为标。早期阴虚燥热，日久则伤阴耗气，致气阴两虚。肾气不固，经脉失养，络脉瘀阻。津血同源，互为资生转化，燥热伤津，津亏液少，势必不能载血循经畅行；燥热内灼，煎熬营血，又可导致血瘀。另外，长期水谷精微随尿下泄，精气大伤，气虚则无法推动血流，出现血脉瘀滞；而阴虚化火，又灼伤络脉，致瘀热阻络。气阴两虚，血脉瘀阻，则下焦运化失司，水湿内停，加之燥热，则湿热下淫。治疗上通常标本兼顾，治标时尤其重视活血化瘀之法，使瘀去络通，诸瘀所致之病理产物也可渐消，兼顾清热利湿，邪去则正安。因此，治疗时在严格控制血糖、控制血压、限制蛋白摄入量的基础上，运用中药，对防止和延缓DN的发生、发展，延缓肾功能下降速度有着重要的意义。糖肾康以生地黄、黄芪二药为君，臣以槐米、大黄，佐以益母草、山楂，全方共奏益气养阴、清热祛湿、活血化瘀之效。方中生地黄味甘、苦、性寒，入心、肝、肾三经，主要功用为养阴生津，清热凉血消瘀。生地黄治疗消渴早在唐代著名医家孙思邈所著的《千金要方》中就有记载。《本经》谓干生地黄“味甘、寒，主折跌绝筋，伤中逐血痹，……,生者尤良”，可以看出干地黄尤其是鲜地黄有逐血痹、消瘀疗伤作用。黄芪性味甘温，被列为本草上品，有补气健脾、升阳固本、托毒生肌、利水消肿的功效；此外，尚有“逐五脏间恶血”(《别录》)、“通调血脉，流行经络”(《本经逢原》)等功效。《千金方》载黄芪汤为专治消渴而设。槐米是豆科植物槐树的干燥未开花的花蕾，功能清热、祛湿、凉血、止血。大黄苦，寒，有清热泻火、活血化瘀、解毒之功，佐以益母草、山楂以增强利水消肿、活血化瘀作用。

本研究从以下几个方面阐述糖肾康对DN的保护。首先，糖尿病肾病肾脏肥大是出现最早、最明显的肾脏病理改变，能否控制糖尿病肾脏肥大，是本病治疗有无成效的标志之一。肾脏肥大指数是衡量肾脏肥大较客观的指标，可以排除因每个动物本身的肾脏随月龄增加而增长的因素，使表示肾重增长的参数更为客观[2]。本实验结果表明，糖尿病模型大鼠经糖肾康治疗后，肾脏肥大指数有明显降低，与同期模型对照组对比，差别有统计学意义(P<0.01)。依那普利为新一代的血管紧张素转化酶抑制剂，口服后在体内分解成依那普利拉，可以抑制血管紧张素Ⅱ的合成，扩张微血管，降低肾小球内压，减少肾小球硬化细胞因子的合成和分泌。早期应用依那普利可以延缓DN的发生、发展[3-4]。本实验支持依那普利对DN具有保护作用。本实验结果表明，糖肾康可使糖尿病模型大鼠的肾脏肥大得到控制，且疗效优于依那普利组(P<0.01)，推测是糖肾康中各药协同，降低了糖尿病大鼠肾血浆流量，改善了肾小球早期高滤过、高灌注状态，从而防止了DN的发生和发展。其次，大量的研究表明，糖代谢紊乱是糖尿病慢性并发症包括DN的启动因素，也是DN发生和发展的基本因素；过多的葡萄糖集中在肾组织是导致DN的根本原因[5]。控制高血糖是防治DN的一项基本措施。本实验研究结果表明，糖肾康具有一定的降低血糖作用，并随治疗时间的延长，降糖作用更明显。第56天时，糖肾康组大鼠的血糖与依那普利组、模型对照组对比，差别有统计学意义(P<0.01)。再次，糖肾康组大鼠体质量降低的态势逐渐变缓，到第56天时，体质量已明显区别于依那普利组(P<0.05)和模型对照组(P<0.01)。考虑可能是血糖的控制导致高渗性利尿的原因。最后，在DN早期，多种因素导致肾脏固有细胞肥大，以后逐渐出现肾小球基底膜增厚和肾小球系膜区为主的细胞外基质进行性积聚；而肾脏固有细胞的增殖、肥大和凋亡在DN发生、发展中起重要作用[6]。肾实质体积增大是DN早期重要的病理特征。本实验中糖肾康可使肾小球体积、系膜区和肾小管扩张程度减轻，其效果较依那普利更明显。

综上所述，糖肾康对糖尿病肾病具有保护作用。

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