血液病毒核酸集中化检测的实践和体会

石庆秋，罗必泰，谢家日，林丹英

(南宁中心血站检验科，广西 南宁 530003)

为提高血液安全水平，进一步缩短“窗口期”，降低输血传播疾病风险。2013年，国家卫生计生委在 《全面推进血站核酸检测工作实施方案》中提出，“积极推进血站核酸检测工作，提高血站实验室检测能力。到2015年，血液筛查核酸检测基本覆盖全国。”由于广西部分血站尚未开展核酸检测，在广西卫计委的协调下，南宁中心血站自2015年12月底承担了崇左市、北海市和防城港市中心血站血液标本的核酸检测工作，实现了核酸检测全覆盖。本文通过对检测数据的分析，了解广西西南部地区感染性输血残余风险，以及核酸集中化检测对提高实验室质量和血液安全的意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 来自于2015年12月至2017年1月广西崇左市、北海市、防城港市无偿献血者的核酸检测标本。献血者均符合 《献血者健康检查要求》。使用EDTA-K2抗凝带分离胶的真空采血管留取血样5ml。标本均为两遍ELISA检测后HBsAg、抗-HCV、HIV抗原-抗体无反应性标本。

1.2 标本采集和运送 核酸标本采集后，在4h内离心，标本需要冰冻运输或保存的，离心后24h内在-40℃～-18℃冻存。标本放置于冷藏储存箱内运送，冰冻标本运输温度在-40℃～10℃，如果运输时间不超过8h，采用2℃～10℃运输。标本到达实验室后72h内完成检测，不可再次冻融。

1.3 仪器与试剂 罗氏Cobas s201全自动血液核酸筛查平台：Hamilton Microlab Star全自动混样仪，Cobas s201 AmpliPrep核酸提取仪，Cobas s201 TaqMan Analyzer核酸扩增检测仪；科华核酸血液检测系统：STAR核酸分离纯化仪、ABI 7500型实时荧光定量PCR仪；核酸检测试剂盒：Cobas TaqScreen MPX 2.0 test、科华核酸检测试剂盒。

1.4 检测方法和质量控制 采用罗氏6人份混样、科华8人份混样模式，初混无反应性的标本，判为检测阴性；系统检出的反应性混样标本继续进行拆分检测，拆分试验无反应性判定为NAT阴性，拆分试验呈反应性标本判为阳性。每批次标本检测均有阴阳性对照品和室内质控品(HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA)来控制质量和试验有效性。本实验室每年参加卫生部临床检验中心组织的室间质量评价，总成绩均合格。

1.5 统计学处理 运用SPSS 18.0统计学软件进行统计分析，采用χ2检验行x列表资料多个样本率的比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2015年12月至2017年1月，共检测南宁、崇左市、北海市和防城港市中心血站ELISA无反应性核酸标本174127例，263例标本拆分结果为阳性，且均为HBV DNA阳性，阳性率为1.51‰。各中心血站核酸标本检测阳性率非常接近，差异无统计学意义（χ2=4.35，P＞0.05），见表 1。

表1 血液标本核酸集中化检测结果

3 讨论

本次血液集中化检测工作共检测了核酸标本174127例，其中3家委托血站送检标本为38444例，占比22.08%。从表1的数据可以看出，各中心血站核酸标本检测阳性率非常接近，差异无统计学意义 （P＞0.05），总阳性率为1.51‰，高于上海（0.63‰）[1]、郑州（0.57‰）[2]和新疆地区（1.10‰）[3]，低于南昌（2.44‰）[4]、新余(1.60‰）[5]和杭州地区（2.00‰）[6]。4家血站筛查出的阳性标本均为HBV DNA阳性（1.51‰），高于国内外一些地区报道[7-10]，未检出HCV RNA和HIV RNA阳性，提示广西西南部地区是HBV感染相对的高流行区。“窗口期”、病毒亚型及变异、隐匿性HBV感染等原因是影响血液安全的主要因素[11]，经酶免4项和ALT筛查阴性的血液仍然存在一定的输血感染残余风险。核酸检测技术应用于血液筛查，特异性好、灵敏度高，可将HBV、HCV、HIV病毒检测的 “窗口期”分别缩短约 50%、80%、50%[12]，还能检出病毒抗体或抗原检测阴性的慢性或隐匿携带者，以及变异株病毒感染者[13]。实施集中化检测后，全面开展血液核酸检测，最大限度的保障了集中化检测区域内所有血站的血液质量安全。

集中化检测有利于整合资源，降低行政管理和血液检测成本，同时提高血液检测水平[14]。广西西南地区部分血站全年检测标本量少，配备的实验室检测人员数量也少，由于核酸检测设备较昂贵，核酸试剂成本高，对检测技术要求高，若自行检测费时费力。而通过集中化检测，由南宁中心血站承担周边血站的核酸检测工作，充分发挥核酸实验室的检验资源优势，可以减少更多的设备、检测试剂和人力资源投入，同时，可以提高血液检测规范化、系统化和科学化水平，更好的保证检测质量。

血液集中化检测工作中标本采集、运输、接收、报告发放等每个工作环节的疏漏都可能影响血液检测质量。经过1年多的实践和探索，针对各环节出现的问题采取了必要措施，使集中化检测工作模式逐步成熟：⑴标本采集、保存和运输不当导致标本留样不足、抗凝不良、溶血甚至试管破裂的情况时有发生。血液标本质量、留取和标识的正确性是保证血液质量和血液安全的关键，直接影响血液的检测结果和血液的可追溯性[15]。要解决这些问题，首先各血站要完善质量管理体系文件，统一规范的操作程序，并对采集人员和标本运送人员进行系统全面的培训。采集人员采血前要仔细检查采血试管有无裂痕和渗漏，采血过程认真核对血袋、标本管和献血者信息，保证标本同源性；标本采集后将标本管内抗凝剂与血液充分混匀，在4h内离心，临时保存温度为2～8℃。标本运送人员采用专用储存箱运输标本，运输过程保持标本管口向上，避免剧烈震荡；广西夏季室外高温，对标本的冷链运输要求很高，应对冷链效果进行确认和定期监测；标本送达后，运送人员与实验室工作人员当面交接，质量不符合要求的标本退回并要求委托血站重新留样。⑵标本标签粘贴不规范，条形码不统一，导致标本无法正常扫描接收，在核酸检测设备上无法识别。通过统一使用唐山血液信息管理系统，采用统一的编码规则，充分保证了数据传输、接收的相容性和准确性。⑶检验报告发布和接收问题：对双方血液信息管理系统进行升级对接，检测实验室发布血液检测结果信息，同时打印结果纸质报告两份，一份由检测实验室归档保存，一份交由委托血站归档保存。委托血站可通过信息管理软件接收检测结果，并依据检测结果实施血液隔离和限行。⑷紧急情况下的血液供应问题：制定计算机信息系统应急预案，每天进行服务器数据备份，定期维护计算机信息系统的软件和硬件，保证故障发生时能快速排除和恢复；制定应急采供血预案，各血站根据临床用血需求，制定不同种类血液产品的最低、最高和合适库存水平，储存一定数量稀有血型血液和紧缺的血液产品，保证突发事件的血液供给，此外，可充分利用合作血站间血液资源，合理调配血液，血液标本无需重复检验。

综上所述，集中化检测后，广西西南部地区全面实施血液核酸检测，通过统一血液网络化管理，统一核酸检测资源，统一血液采集、运输、检测标准，有效降低了输血风险，保障了区域内临床用血的安全、有效。

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