探讨严重畸形精子症患者助孕方式的选择

苏占营 ，吴成亮 ，辜敏 ，巢时斌 ，张琴

(九江市妇幼保健院，1、辅助生殖科，2、检验科，江西 九江 332000)

试管婴儿技术诞生初始主要解决女性不孕不育问题，伴随着第二代试管婴儿助孕技术（卵胞浆内单精子注射：ICSI）的诞生，男性不孕不育问题的治疗迎来曙光。1992年Palermo等人报道卵细胞浆内单精子注射（ICSI）获得妊娠成功，这在男性不孕症的治疗中具有里程碑意义。伴随此技术越来越成熟，人们运用此技术以确保受精率的趋势越来越明显，此技术的适应症范围不断的扩大以至于有被滥用的趋势，由于此技术规避了常规受精过程中优胜劣汰的自然选择法则，人们越来越担心此技术被滥用所引起的严重后果。本文运用该中心39对夫妇助孕结果来探讨单纯男性畸形精子症患者并不都需要借助此技术来确保受精，将男性单纯畸形精子症列为此技术的适应症值得商榷。现将结果报告如下：

1 材料与方法

1.1 临床资料 筛选出该中心接受试管婴儿治疗的39对夫妇。男方均为严重畸形精子症患者（依据WHO第五版精液常规分析SOP文件正常精子形态率均＜4%），精子诊断结果根据此文件，诊断标准为：精子头、颈、中段及尾部均正常的精子诊断为正常形态的精子。（精子头为椭圆形，长为4.0-5.0μm，宽为 2.0-3.5μm，长宽比为 1.50-1.75；中段宽＜1μm，长度为头部1.5倍左右；尾部长约45μm，形态自然平直，所有形态学处于临界状态的精子均列为异常）女方为年龄在25～37岁之间，各项常规检测指标正常，不孕原因仅为输卵管因素。

1.2 方法

1.2.1 精子准备 男性患者均在女性取卵当日，手淫取精。精液通过精液洗涤、离心后取沉淀备用。

1.2.2 卵子准备 女性患者采用控制性促排卵方案。首先用促性腺激素激动剂降调节，用FSH果纳芬或HMG超排至B超观察下卵泡发育到至少有二个直径≥18mm，肌注HCG1万单位以促进卵子成熟，36h后在阴道B超引导下取卵，采集的卵泡由实验室工作人员收集备用。

1.2.3 受精与早补救 依据患者签署的助孕知情同意书，若采用卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术助孕，则收集卵子后2h在透明质酸酶作用下去除颗粒细胞（拆蛋），将成熟卵母细胞（MⅡ卵子）放入配子培养液中，在6%CO2浓度及37℃环境下平衡2h后行卵胞浆内单精子注射（ICSI）进行受精。若要求采用常规体外受精技术助孕，则2h后在卵子周围加入处理过后备用的精子，大约每枚卵子周围5万条活动精子。采用常规受精的胚胎在受精6h后在透明质酸酶作用下去除颗粒细胞 （拆蛋），观察胚胎是否有第二极体排出，排出第二极体的胚胎达到胚胎总数的50%（含50%），则第二天进行原核观察。若未到50%则行卵胞浆内单精子注射（ICSI）进行补救受精，第二天进行原核观察。

1.2.4 胚胎观察及指标统计 观察并记录受精后第1d受精卵的原核（PN）情况，此时受精卵可能呈现双原核(2pn)、单原核(1pn)、多原核（≥3PN）以及无原核(0pn)四种情况的任何一种；继续于受精后第2d和第3d观察胚胎分裂情况并记录分裂细胞数和碎片百分比，计算卵母细胞2PN受精率、2pn卵裂率、优胚率.（优质胚胎为第三天来源于2pn的受精卵分裂为≥7细胞且碎片百分比≤20%的胚胎）。

1.3 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件，计量资料组间均数比较偏态分布用秩和检验，正态分布用t检验，计数资料用检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者情况 此研究共记入助孕患者39例，女方年龄 25～37 岁，平均(30±6．38)岁，共获卵 448 枚（A：常规受精组 240 枚、B：单精组 139 枚、C：补救组69枚）、2PN受精卵332枚（A：常规受精组177枚、B：单精组 105枚、C：补救组 50枚）、2PN 受精卵卵裂316枚（A：常规受精组170枚、B：单精组99枚、C：补救组 47枚）、优质胚胎 155枚（A：常规受精组83枚、B：单精组51枚、C：补救组21枚）。2.2三组治疗结果如下表：

表1 结果比较

3 讨论

不孕不育患病率在育龄夫妇中逐年提高，而且这种趋势在向低龄夫妇方向扩大[1]，这些不孕患者人群中，由于精子畸形引起其不孕不育或者生育力低下比例很高，约为30%～40%，临床以前往往诊断为不明原因不孕症，其根源在于对精子形态异常认识不够及测定不准[2]，现在采用的严格的精子形态学测定方法[3]。精子的形态、结构与功能异常是造成男性不育的重要因素之一[4]，探讨精子形态学检查在辅助生殖技术中具有重要意义，精子结构完整性是其生殖功能基础，精子形态及结构检查对临床男性不育的诊断治疗和预后评价具有重要意义，第五版《WHO人类精液分析实验室技术手册》对精子正常形态有严格标准[5]。相关研究表明大精子空泡与染色质浓缩失败紧密相关[6]，结果可能造成高水平的精子DNA损伤，导致胚胎发育过程中父系基因组表达异常，无法在4～8细胞阶段完成对胚胎基因组的激活，使胚胎发育停滞等[7]。刘丽[8]等指出精子异常形态率与不良孕产史有相关性，精子畸形率高会导致反复性流产、胚胎发育停滞、胎儿孕中畸形等。近年来一些研究[9]指出精子DNA损伤和染色体异常与复发性流产有显著相关性，然而精子畸形与其相关机理尚需进一步研究及数据支持，有人采用WHO精子形态标准研究发现精子形态与受精率、优质胚胎率无关[10]，本研究结果发现畸形精子症采用IVF、ICSI以及R-ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率无统计学意义，目前精子畸形程度对试管婴儿的结局影响报道较少，还需要加大样本量做进一步研究，总之采用WHO第五版精子形态标准在体外受精之前进行精子形态评估[11-13]，可提高男性不育症的诊断水平，可以对受精结果进行预判，有助于选择合适的体外受精方法[14，15]。

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