上海市闵行区宠物犬体表蜱及蜱传病原体初步调查

韩宏晓，赵秋华，盛中华，孙安帮，马福余，朱顺根，张 敏，周光胜，张红飞

（ 上海市闵行区动物疫病预防控制中心，上海201109）

蜱属蜱螨亚纲、蜱亚目，是一类吸食脊椎动物血液的媒介昆虫。蜱在吸血过程中能获得和传播病原体，引发各种严重的自然疫源性疾病及人兽共患病[1]。蜱地理分布广泛，气候适应性强，多种病原体经蜱传播，其中包括细菌（土拉弗朗西斯菌等）、病毒（森林脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、发热伴血小板综合征病毒等）、螺旋体（伯氏疏螺旋体等）、立克次氏体（斑点热立克次体、无形体等）、原虫（巴贝西虫等）以及支原体和衣原体等[2,3]。蜱传病原体种类繁多，但宠物犬被确诊感染发病报道较少。因此，我们选取我国宠物蜱与蜱传病原体调查报道中涉及的3种主要蜱传病原体（螺旋体、犬埃立克体、嗜吞噬细胞无浆体）作为我们研究对象[4-7]。

随着社会经济的发展和人民生活水平的提高，犬作为一种伴侣动物日益成为人们生活的一部分。上海市为国际化大都市，闵行地处上海市郊，居住人口密集，宠物犬基数大，管理面临很大挑战。多年来，闵行地区虽有宠物犬人兽共患病的调查报道，但对宠物犬的蜱和蜱传病原体未有全面整体的调查。因此，本研究对上海市闵行地区宠物犬体表的媒介蜱寄生情况和潜在的蜱传病原体进行了初步调查，为评估闵行地区蜱传病原体带来的公共卫生风险提供参考。

1 材料与方法

1.1 蜱的采集和种类鉴定 2016年1月～12月在上海市闵行区宠物医院随机选取外观健康无明显发病症状的宠物犬作为调查对象，共检查2763只宠物犬，其中57只犬体表共捕获蜱虫183只。将收集的犬体表寄生的蜱虫形态特征进行鉴定[8]，以确定蜱的种类。

1.2 宠物犬血液样本收集 2016年1月～2017年2月在上海市闵行区宠物医院，随机采集外观健康，无明显发病症状的宠物犬392份犬血液样本，保存于EDTA抗凝管中备用。

1.3 蜱标本和血液样本基因组DNA抽提 蜱标本经液氮研磨后，按基因组DNA抽提试剂盒（DNeasy Tissue Kit, Qiagen）说明书操作提取；犬血液样本采用试剂盒（QIAmp DNA Blood Mini Kit , Qiagen）提取基因组DNA。

1.4 PCR扩增鉴定蜱传病原体 根据文献报道[9-11]合成特定的引物，检测病原特异性靶基因。PCR引物序列及参考文献详见表1。使用HotStartTaq（TAKARA）进行PCR扩增，PCR扩增体系50 μL，其中包含10×PCR Buffer 5 μL、HotStarTaq0.5 μL、dNTPs 4 μL、上下游引物各1 μL。PCR扩增结束，使用1.5%凝胶电泳鉴定扩增反应片段。

表1 本研究鉴定的特异性靶基因、PCR引物序列及参考文献Table 1 Target genes and primer sequences used for detected pathogens in this study

2 结果与讨论

2.1 宠物犬体表蜱寄生情况 经过形态学鉴定，宠物犬体表寄生的蜱种为血红扇头蜱（rhipicephalus sanguineus，R. sanuineus）。如表2所示，宠物犬带蜱率（带蜱率%=带蜱犬数/总检查犬数×100%）为2.06%，带蜱指数（带蜱指数=蜱总数/总检查犬数）为0.066。前期有研究报道表明，上海市范围内宠物犬体表寄生的蜱种为血红扇头蜱和长角血蜱，带蜱率为1.2%，平均带蜱指数为0.09[12]。由此，表明本次调查结果与前期研究报道基本吻合。

2.2 蜱和血液样品中病原体的检测及鉴定 通过PCR扩增和凝胶电泳鉴定，发现蜱和血液样品中均检出犬埃立克体（Ehrlichia canis，E. canis），而螺旋体（Borrelia.spp）和噬吞噬细胞无浆体（Anaplasma phagocytophilum，A. phagocytophilum）未有检出（表3）。犬埃立克体（E. canis）在蜱和血液样品检出率分别为0.5%和2.29%，血液样品检出率高于蜱标本。

本调查结果表明，上海市闵行地区宠物犬体表寄生的蜱种类为血红扇头蜱，参加调查的宠物犬体表蜱和血液样本有蜱传病原体犬埃立克体，提示我们宠物犬体表蜱及携带的病原体对居民的健康与公共卫生安全有一定的隐患。莱姆病是由伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdo-rferisensolato）引起的感染性疾病，在部分病人中能引起慢性疾病，本单位在2006年度和2007年度对闵行区宠物犬的主要人兽共患病进行筛查中，发现分别有4.1%和5.4%的莱姆病血清学阳性，但在本次调查中螺旋体未有检出，这说明随着居民健康意识的增强和文明养犬的推行，螺旋体在宠物犬群体中的感染率已经显著降低。犬埃立克体病是由犬埃立克体感染引起的犬败血性传染病，相关病例在国内多次报道，值得注意的是犬埃立克体亦可感染人并致病[13]，在我们的调查中发现有2.29%宠物犬携带犬埃立克体，这需引起我们的重视。犬嗜吞噬细胞无形体病是由嗜吞噬细胞无形体引起的新发蜱传人兽共患病，严重威胁人畜健康，在本次研究的蜱和血液样品中均未检出噬吞嗜细胞无浆体，在今后的蜱传病原体监测中仍需加强关注。

本研究初步明确了上海市闵行区宠物犬体表蜱和蜱传病原体的情况，将帮助我们制定科学合理的防控措施，更好地保障公共卫生安全。

表2 上海市闵行区宠物犬体表寄生蜱情况Table 2 Statistics of ticks parasitizing on the bodies of pet dogs

表3 蜱及宠物犬血液样本病原检测Table 3 Detected pathogens in ticks and blood samples

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