肝脂溶颗粒对非酒精性脂肪肝模型大鼠血清Leptin表达的影响※

隋晓丹

（长春中医药大学附属医院肝脾胃病科，吉林 长春 130021）

本实验通过观察肝脂溶颗粒对NAFLD大鼠血清瘦素（Leptin） 表达的影响，及Leptin抵抗在NAFLD中的作用并探明调节其作用的传导途径，为中医临床干预治疗非酒精性脂肪肝提供理论依据和新的思路。

1 实验材料

1.1 实验动物 Wistar大鼠60只，雄性，体重（200±20）g。

1.2 药物 肝脂溶颗粒：长春中医学院附属医院制剂室，批准文号：长卫制药字 (96)1367号。多烯磷脂酰胆碱胶囊：赛诺非安万特（北京）制药有限公司，批准文号：国药准字H20059010。

2 实验方法

2.1 非酒精性脂肪肝模型复制方法 大鼠适应环境1周后随机分为正常组9只、高脂组51只。正常组予普通饲料喂养，高脂组予高脂饲料（88%基础饲料、10%猪油、2%胆固醇）喂养，自由饮水。12周后随机选出7只大鼠（正常组1只，高脂组6只），处死后取肝脏组织进行HE染色，验证造模情况。

2.2 实验动物分组及给药方法 12周后，正常组大鼠普通饲料喂养同时每日给予生理盐水灌胃。高脂组大鼠随机分为模型组、多烯磷脂酰胆碱胶囊对照组（简称：对照组）、肝脂溶颗粒高、中、低剂量组（简称：高、中、低剂量组）。继续高脂饲料喂养同时每日给予不同药物进行灌胃（模型组：生理盐水灌胃1 mL/100 g；对照组：多烯磷脂酰胆碱胶囊水溶液灌胃，按0.14 g/kg体重给药；高剂量组：100%浓度肝脂溶颗粒水溶液灌胃，按3 g/kg体重给药；中剂量组：70%浓度肝脂溶颗粒水溶液灌胃，按2.1 g/kg体重给药；低剂量组：30%浓度肝脂溶颗粒水溶液灌胃，按0.9 g/kg体重给药），连续灌胃4周后取材。

2.3 血标本采集 以2%戊巴比妥钠溶液腹腔内注射麻醉，腹主动脉采血4～5 mL，分离血清，置于-20℃冰箱保存备用。

2.4 观察指标 血清Leptin采用ELISA法定量测定，按试剂盒说明书规范操作，并用酶联仪在450 nm波长依次测量各孔样品的光密度 (OD)值。

2.5 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件处理数据，计量资料数据以均数加减标准差（）表示。

3 实验结果

实验16周末各组NAFLD大鼠血清Leptin的含量均明显高于正常组（P＜0.01），差异有显著统计学意义；模型组大鼠血清Leptin的含量最高，与其它药物干预组相比有显著差异（P＜0.01）；高剂量组大鼠血清Leptin的含量明显低于对照组（P＜0.05），差异有统计学意义；中剂量组大鼠血清Leptin的含量与对照组相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；低剂量组大鼠血清Leptin的含量高于高、中剂量组及对照组（P＜0.05），差异有统计学意义。说明肝脂溶颗粒具有一定降低NAFLD大鼠血清Leptin含量的作用。见表1。

表1 各组大鼠16周末血清Leptin结果比较 （，ng/mL）

表1 各组大鼠16周末血清Leptin结果比较 （，ng/mL）

注：与正常组相比，*P＜0.01，**P＜0.05；与模型组相比，ΔP＜0.01，ΔΔP＜0.05；与对照组相比，#P＜0.05，##P〉0.05

1.51±0.27 4.96±0.75*2.50±0.31*△1.93±0.54*△#2.46±0.92*△##3.32±0.16*△#组别 只数 Leptin正常组模型组对照组高剂量组中剂量组低剂量组8 9 8 9 8 9

4 讨论

Leptin主要由脂肪细胞合成分泌，主要通过控制食欲、抑制脂肪合成、增加能量消耗3种途径来调节机体脂肪代谢[1]。Leptin参与肝脏内的糖代谢及脂肪代谢，如刺激肝糖原的产生，限制合成甘油三酯，提高肝脏及外周组织对胰岛素的敏感性[2]。目前广泛认为存在瘦素-胰岛素轴的相互作用，即Leptin通过对胰岛β细胞超极化状态来控制胰岛素的分泌[3]，进而使脂肪的合成及储存减少，同时胰岛素又能够刺激Leptin的合成，而形成Leptin与胰岛素之间的双向调节作用[4]。当Leptin抵抗时，双向调节被破坏，便会导致高胰岛素血症、胰岛素抵抗，产生与胰岛素相关的肝内脂肪储积，同时又通过改变胰岛素信号的传递，而使肝细胞内脂肪酸的浓度提高，三酰甘油的合成增加，促使脂肪肝形成。此外，Leptin还作为炎症-坏死的致病因子之一[5]，参与NAFLD的“二次打击”，调节脂肪肝的炎症反应，促使脂肪肝发展为脂肪性肝炎。Leptin还是肝纤维化的启动因子之一[6]，参与“三次打击”或“多重打击”，激发肝纤维化，促进其最终发展为肝硬化。

刘铁军教授总结多年治疗非酒精性脂肪肝的临床经验，依据《临证指南医案·湿》云：“而但湿从内生者，必其人膏粱酒醴必度”，非酒精性脂肪肝的发病多因嗜食肥甘厚味导致损伤脾胃，运化失司，湿热内蕴，伤及肝胆，疏泄失职，导致气机郁滞，血脉瘀阻，痰浊瘀积，肝脏脉络受阻，湿热瘀积互结于肝而成脂肪肝。自研肝脂溶颗粒，由决明子、枳椇子、泽泻等组成。诸药合用，消而不伐，补而不滞，寒温并用，药性平和，共奏清热利湿、化瘀消积之功效。本实验结果表明：肝脂溶颗粒能够显著降低血清Leptin表达，有助于改善胰岛素抵抗，减少脂肪酸含量，减轻肝脏脂肪变性，从而达到治疗脂肪肝的目的。其疗效与剂量呈正相关，且对降低血清Leptin表达效果优于多烯磷脂酰胆碱胶囊。高脂饮食诱导致NAFLD大鼠血清Leptin表达显著增高，这可能是大鼠引起非酒精性脂肪肝的机制之一，肝脂溶颗粒显著降低了血清Leptin表达，因此，肝脂溶颗粒对非酒精性脂肪肝的防治作用，可能是通过降低血清Leptin表达而完成。

[1]CollinsS，Kuhn CM，PetroAE.etal，Role ofleptin in fot regulation[J].Nature，1996，380:677.

[2]刘佃辛，王长龄，金宏.瘦素降低胆固醇作用的观察[J].解放军预防医学杂志，2000，18(6):452.

[3]Seufert J Kieffer TJ，Habener JF.Leptin inhibits insulin gene transcription and reverses hyperinsulinemia in leptin-deficient ob/obmice[J].Medical Sciences，1999，96:674-679.

[4]Seufert J，Kieffer TJ，Leech CA，et al.Leptin suppression of insulin secretion and gene expression in hum an pancreatic islets Imp lications for the development ofadipogenic dia-betes mellitus[J].J Clin EndocrinoMetab，1999，84(3):670.

[5]Faggioni R，Jones-Carson J，Reed DA，et al.Leptin-deficient(ob/ob)mice are protected fromT cell-mediated hepatotoxicity:role of tum or necrosis factoralpha and IL-18[J].Pros Natl Acad Sci USA，2000，97(5):2367.

[6]Piche T，Vandenbos F，Abakar-Mahamat A，et al.The severityofliver fibrosis is associatedwithhighleptinlevelsinchronichepatitis[J].JViralHepat，2004，11(1):91-96.