胃腺癌中异黏蛋白和原癌基因C-myc的表达及临床意义

于　敏　林哲洙　张　红　

(锦州医科大学附属第三医院普外三科，辽宁　锦州　121001)

胃腺癌是高度恶性的浸润性上皮源性肿瘤，来源于胃黏膜上皮，其分化常较差，可以直接蔓延及向周围进行播散，侵袭能力强〔1〕。异黏蛋白(MTDH)是近年来发现的一个癌基因，已被证实在人体大部分组织中低表达，在恶性肿瘤中的表达不同程度升高，其可以通过多种信号通路影响肿瘤形成〔2，3〕。原癌基因C-myc(C-myc)其编码的蛋白质可以介导细胞外转导入细胞内的生物信号，对细胞增殖及肿瘤生长有重要作用〔4，5〕。本文关注胃腺癌术后组织中MTDH和C-myc的表达，探讨其临床意义。

1　材料与方法

1.1临床资料2014年1月至2016年12月锦州医科大学附属第三医院确诊为胃腺癌，并行手术治疗的患者87例为观察组，其中男45例，女42例，年龄40～86岁，平均59.3岁。纳入标准：①经病理医师确诊，并符合WHO诊断标准；②患者或家属同意观察；③临床资料完整。排除标准：①伴有其他器官恶性肿瘤；②有胃部手术史；③有血液系统疾病；④手术前行放、化疗。其中高分化20例，中分化20例，低分化47例。同时选取上述患者中距离肿物边缘>3 cm的正常胃黏膜组织45例为对照组，其中男25例，女20例，年龄42～81岁，平均58岁。两组均常规留取术后蜡块组织(取材由病理医师完成)。两组常规资料差异无统计学意义。

1.2MTDH和C-myc蛋白表达的检测MTDH和C-myc试剂均为浓缩液，按不同比例行预实验，然后检测其表达效果，仔细观察并选择最理想的浓度用在正式实验(MTDH为1∶100，C-myc为1∶50)。MTDH和C-myc检测均应用免疫组化二步法，应用二氨基联苯胺(DAB)显色，操作均由同一技师进行操作，严格实验步骤，减少人为误差。

1.3MTDH和C-myc结果判读MTDH阳性表达部位是细胞膜或细胞质，C-myc的阳性表达部位是细胞质和(或)细胞核，以染成浅黄-棕褐色为着色细胞，以着色强度和阳性细胞百分比的评分之和进行判定。显色强度评分：0分，无；1分，弱；2分，中；3分，强。阳性细胞百分比评分：选择5个400倍的视野，计数阳性率，取其平均值；0分，<5%；1分，5%～24%；2分，25%～49%；3分，50%～74%；4分，≥75%。取两项评分之和的值作为最终评分结果。0～2分为阴性，>2分为阳性。

1.4统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行χ2检验、线性相关分析。

2　结　果

2.1两组MTDH和C-myc蛋白表达两组MTDH和C-myc表达阳性率差异有统计学意义(P<0.001)。见表1。

表1　两组MTDH和C-myc蛋白的阳性表达〔n(%)〕

2.2观察组中不同临床特征中MTDH和C-myc表达比较观察组MTDH和C-myc表达均与肿瘤最大径和增殖指数相关，MTDH表达与分化程度相关，C-myc表达与淋巴结转移相关。见表2。

2.3观察组MTDH和C-myc表达相关性MTDH和C-myc表达呈正相关(r=0.52，P<0.05)。

表2　观察组不同临床特征中MTDH和C-myc阳性表达的比较〔n(%)〕

3　讨　论

侵袭性胃腺癌进展快，肿瘤细胞分化低，细胞体积小，易于直接蔓延和播散，对周围组织的破坏能力强，病变进展中相关蛋白可以出现明显表达失常〔6〕。分化是胃腺癌形成中内在的调控作用，胃腺癌细胞常为低分化状态，呈现幼稚的细胞形态。MTDH是近年发现的癌基因，其全长为3 611 bp，包含11个内含子和12个外显子，位于人类8号染色体上，其是一种保守蛋白，也是一个Ⅰb型的膜蛋白〔7，8〕，分子量为64 kD，由于其富含赖氨酸和丝氨酸残基，可被翻译后修饰〔9，10〕。C-myc是原癌基因，氨基端有两个磷酸化修饰位点，均可以使C-myc形成泛素化而引起降解，因此C-myc在肿瘤中的严格调控是其平衡的重要方面〔11，12〕。本研究提示MTDH和C-myc，二者高表达是促进胃腺癌形成的重要蛋白因素。MTDH高表达时可以促进肿瘤细胞增殖并使其抗凋亡作用增加，其途径被认为是受到磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路的调节作用。MTDH还可以在转录水平活化核因子通路，参与周期素蛋白及Bcl-2等多种细胞的增殖过程〔13〕。MTDH的促侵袭转移机制还可能是通过与内皮细胞上未知受体的相互作用，同时活化一些与黏附因子相关的信号通路引起的〔14〕。张艳艳等〔15〕通过观察MTDH在上皮性卵巢癌中的表达，发现其在肿瘤中表达升高，同时其对血管内皮生长因子有明显的促进作用，认为其高表达在促进肿瘤过程生长过程中，对血管生长的调控是其机制之一。因此MTDH可能具有多种调节功能。C-myc也是促进肿瘤生长的蛋白因素，当外部和内部的各种刺激使C-myc基因表达增加时，引起分裂周期中的静息期细胞增加，引起癌变〔16〕。本研究结果提示MTDH和C-myc二者高表达可以促进肿瘤细胞生长和肿瘤细胞的失控性增殖。MTDH参与肿瘤细胞的幼稚到成熟的演变过程中。C-myc高表达是促进肿瘤淋巴道播散的重要因素，因此C-myc高表达也是转移相关的因子。MTDH和C-myc二者之间有一定的协同作用。MTDH启动子区域发现其含有两个能与C-myc结合的元件，这种结构上的特点使MTDH可以与C-myc有一定的结合作用。此时C-myc作为转录因子通过结合E-box元件，提高了C-myc转录水平，进一步促进肿瘤生长〔17〕。

1陈卫昌，史冬涛，郜恒骏，等.胃腺癌中β-连环蛋白、c-myc表达及其临床意义〔J〕.中华消化杂志，2006；26(12)：809-12.

2Nohata N，Hanazawa T，Kikkawa N，etal.Tumor suppressive microRNA-375 regulates oncogene AEG-1/MTDH in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC)〔J〕.J Hum Genet，2011；56(8)：595-601.

3Sarkar D.AEG-1/MTDH/LYRIC in liver cance〔J〕.Adv Cancer Res，2013；120(20)：193-221.

4Munz M，Kieu C，Mack B，etal.The carcinoma-associated antigen EpCAM upregulates c-myc and induces cell proliferation〔J〕.Oncogene，2004；23(34)：5748-58.

5Lan F，Wang H，Chen Y，etal.Hsa-let-7g inhibits proliferation of hepatocellular carcinoma cells by downregulation of c-Myc and upregulation of p16(INK4A)〔J〕.Int J Cancer，2015；128(2)：319-31.

6李国华，钱伟，王静，等.胃腺癌及癌旁正常组织中c-myc与鸟氨酸脱羧酶mRNA的表达及关系〔J〕.南昌大学学报(医学版)，2006；46(3)：114-6.

7Gong Z，Liu W，You N，etal.Prognostic significance of metadherin overexpression in hepatitis B，virus-related hepatocellular carcinoma〔J〕.Oncol Reports，2012；27(6)：2073-6.

8Casimiro S，Fernandes A，Oliveira AG，etal.Metadherin expression and lung relapse in patients with colorectal carcinoma〔J〕.Clin Exp Metastasis，2014；31(6)：689-96.

9Liang Y，Hu J，Li J，etal.Epigenetic activation of TWIST1 by MTDH promotes cancer stem-like cell traits in breast cancer〔J〕.Cancer Res，2015；75(17)：3672-80.

10Zhang B，Liu X，He JR，etal.Pathologically decreased miR-26a antagonizes apoptosis and facilitates carcinogenesis by targeting MTDH and EZH2 in breast cancer〔J〕.Carcinogenesis，2011；32(1)：2-3.

11Gu C，Lang F，Peng H，etal.MTDH is an oncogene in multiple myeloma，which is suppressed by Bortezomib treatment〔J〕.Oncotarget，2016；7(4)：4559-69.

12Zhang H，Gao P，Fukuda R，etal.HIF-1 inhibits mitochondrial biogenesis and cellular respiration in VHL-deficient renal cell carcinoma by repression of C-MYC activity〔J〕.Cancer Cell，2007；11(5)：407-20.

13Zhang E，Cristofanilli M，Robertson F，etal.Genome wide proteomics of ERBB2 and EGFR and other oncogenic pathways in inflammatory breast cancer〔J〕.J Proteome Res，2013；12(6)：2805-17.

14陈鹭姗，张声.MTDH在肿瘤发生、发展中的作用〔J〕.临床与病理杂志，2010；30(3)：243-6.

15张艳艳，李红雨，张慧，等.MTDH和VEGF在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义〔J〕.临床肿瘤学杂志，2014；19(1)：18-22.

16张全武，肖艳景，赵驰，等.胃腺癌组织c-myc与hnRNP K表达及其临床意义的初步探讨〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2009；14(21)：1661-3.

17Srivastava J，Siddiq A，Gredler R，etal.Astrocyte elevated gene-1 (AEG-1) and c-Myc cooperate to promote hepatocarcinogenesis〔J〕.Hepatology，2015；61(3)：915-29.