冠脉旋磨术介入治疗老年钙化病变的效果及血浆miRNA32的表达

邱炳华　苏方成　周福华　齐　欣　

(潍坊市人民医院急诊内科，山东　潍坊　261041)

1潍坊市潍北监狱医院内科2潍坊高新区人民医院科教科

老年冠脉病变患者多数为钙化病变，重度钙化病变是导致常规经皮冠状动脉介入(PCI)术失败的主要危险因素〔1〕。通过冠脉旋磨术去除血管腔内膜面钙化灶后行支架置入或球囊扩张有利于保证PCI术的顺利完成〔2〕。但冠脉旋磨术操作复杂，易引发冠脉穿孔、无复流等不良事件，导致心肌梗死、心源性死亡等严重并发症〔3〕。钙磷在血管组织中异常沉积是动脉钙化的主要病理特征，其中PI3K、MAPK两个信号通路具有关键调控作用，而碱性磷酸酶(ALP)、核心结合蛋白因子(RUNX)2等成骨关键因子是上述通路的重要组成部分〔4〕。动物模型已发现，miRNA32表达在动脉钙化发生、发展中发挥调控作用〔5〕，但对人动脉钙化的影响尚未见报道。本研究拟分析旋磨术对老年冠脉钙化病变治疗的有效性、安全性及miRNA32调控血管钙化的分子机制。

1　对象与方法

1.1对象选取2015年1月至2016年6月潍坊市人民医院经冠脉造影确诊为冠状动脉钙化病变需行PCI治疗的老年患者49例，根据是否行冠脉旋磨术分为旋磨组21例和非旋磨组28例。旋磨组男13例，女8例，年龄61～82〔平均(66.39±9.15)〕岁；非旋磨组男16例，女12例，年龄60～80〔平均(65.80±8.37)〕岁；两组性别、年龄差异无统计学意义(均P>0.05)。冠脉内旋磨术联合球囊扩张术应用标准：冠脉造影现实病变血管狭窄段较参考血管直径下降70%及以上，冠脉钙化程度为重度病变或支架难以置入、球囊扩张不全者。

1.2方法

1.2.1手术方法非旋磨组给予常规PCI治疗；旋磨组先行冠脉内旋磨术联合球囊扩张术再联合PCI治疗。冠脉旋磨术过程：将旋磨导引钢丝送至病变血管远端，对通过困难者可先使用普通PTCA导丝通过，再换为旋磨导引钢丝，选用直径1.25～1.75 mm的旋磨头；术中高压注射0.9% NaCl溶液来润滑、冷却旋磨系统，转速(0.6～0.8)×104r/min，旋磨完成后根据情况选择行球囊扩张术并植入支架。

1.2.2疗效观察手术成功标准：术后残余冠脉狭窄<20%，围术期无急性心肌梗死、死亡、E-CABG等并发症。术后为期1年随访，每月电话随访1次，询问并记录心绞痛发生情况，主要心血管不良事件(心肌梗死、病变处血运重建、心源性死亡)，每6个月复查心脏彩超和心电图。

1.2.3标本采集与处理术中抽取冠状动脉硬化患者动脉血5 ml为钙化组；选取同期在本院行手术治疗且冠状动脉无钙化的老年患者，术中抽取动脉血5 ml为对照组；两组均签署知情同意书。标本静置20 min后，2 000 r/min离心15 min，将血浆分装在不同EP管中，-80℃保存待测。

1.2.4qRT-PCR检测血浆miRNA32表达水平取300 μl血浆，加入等体积Trizol裂解液提取总RNA，逆转录得到cDNA，使用DRR036A Takara PCR试剂盒进行检测，miRNA32特异性扩增引物由荣研生物科技(中国)有限公司设计并合成。反应体系25 μl(Sybr green荧光染料10 μl、上游和下游引物各0.5 μl、dNTP 1 μl、Taq酶1 μl、cDNA 5 μl、双蒸馏水7 μl)；扩增条件：93℃ 2 min预变性、93℃ 1min、55℃ 1 min、72℃ 1 min，共40个循环，72℃延伸5 min。扩增产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳，以GAPDH为内参计算miRNA32相对表达量。

1.2.5血浆ALP和RUNX2表达水平检测取300 μl血浆，采用比色法检测ALP活性，酶联免疫吸附(ELISA)法检测RUNX2表达水平，操作严格按试剂盒说明进行，反应终止后10 min内使用酶标仪读取450 nm波长处吸光度值，以标准品孔为对照计算ALP、RUNX2相对表达量。

1.3统计学分析使用SPSS20.0软件进行t检验、χ2检验及Pearson相关性分析。

2　结　果

2.1旋磨组与非旋磨组冠脉病变比较旋磨组冠脉1～2支病变、轻中度钙化病变比例明显低于非旋磨组，3支病变、重度钙化病变比例明显高于非旋磨组(均P<0.05)；两组左主干病变、回旋支病变、回旋支病变、右冠脉病变比例差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

2.2旋磨组与非旋磨组手术治疗情况比较旋磨组手术成功20例(95.24%)，手术失败1例因钙化病变处硬度较大，旋磨头滞留到钙化病灶内，无法通过狭窄处；非旋磨组均手术成功。旋磨组与非旋磨组术前血管直径〔(0.84±0.35)mm、(0.92±0.40)mm〕差异无统计学意义(P>0.05)；旋磨组术后血管直径〔(4.33±1.65)mm〕明显高于非旋磨组〔(3.15±0.57)mm，P<0.05〕。旋磨组与非旋磨组术前血管狭窄率〔(88.16±6.51)%、(86.31±8.19)%〕差异无统计学意义(P>0.05)；旋磨组术后血管狭窄率〔(1.15±0.18)%〕明显低于非旋磨组〔(2.34±0.38)mm，P<0.05〕。两组围术期均未出现急性心肌梗死、冠脉穿孔、心源性死亡等并发症。

2.3旋磨组与非旋磨组术后随访情况术后6个月复查心脏彩超显示，旋磨组、非旋磨组左室舒末径〔(46.89±3.82)mm、(47.76±4.24)mm〕与术前〔(46.78±3.20)mm、(47.65±4.18)mm〕相比略有提升，但差异无统计学意义(P>0.05)。旋磨组、非旋磨组的左室射血分数〔(58.95±6.13)%、(55.08±5.41)%〕均明显高于术前〔(51.52±5.07)%、(51.68±4.75)%，P<0.05〕；且术后旋磨组明显高于非旋磨组(P<0.05)。两组术后1年内无再发心绞痛、心肌梗死及心源性死亡等不良事件发生。

1～3为对照组；4～6为钙化组图1　血浆miRNA32表达RT-PCR电泳图

2.4钙化组与对照组血浆miRNA32、ALP、RUNX2表达比较见图1。RT-PCR检测显示，钙化组miRNA32相对表达量(2.95±0.39)明显高于对照组(1.16±0.27，P<0.01)。比色法、ELISA法检测显示，钙化组ALP、RUNX2相对表达量(3.72±0.55、46.24±8.39)均明显高于对照组(1.64±0.27、24.96±4.11，P<0.05)。

2.5miRNA32表达与ALP、RUNX2活性的相关性miRNA32表达水平与ALP活性呈正相关(r=0.651，P<0.01);与RUNX2呈正相关(r=0.837，P<0.01)。

3　讨　论

冠脉钙化病变分为内膜面钙化和外膜面钙化，内膜面钙化会引发血管腔狭窄，是导致常规PCI术失败的重要影响因素〔6〕。本研究提示对多支病变、重度钙化的老年患者行旋磨术安全有效，可有效降低术后血管狭窄发生率，提升血管直径。但研究中仍有未能成功行旋磨术者，原因为病变处硬度大，旋磨头无法前进，说明该术式对操作方式要求很高，应避免硬性推进旋磨头，宜采用啄食样推进。另外本研究也反映了冠脉旋磨术在促进老年钙化病变患者预后方面的优越性。

动脉钙化是以钙磷在血管组织中异常沉积为主要的病理特征，临床仍无有效控制动脉钙化进展的方法，主要原因与尚未完全明确动脉钙化病变发病机制有关。目前研究认为，动脉钙化的发生与发展主要为血管平滑肌细胞由收缩表型转化为分泌表型的成骨样细胞转化，该过程由PI3K与MAPK两个信号通路调控，而ALP、RUNX2等成骨关键因子在上述信号通路中发挥重要生物学作用〔7〕。相关研究显示，miRNA可参与调节动脉钙化的发生、发展〔8，9〕。本次研究结果提示miRNA32可能通过影响ALP、RUNX2活性来参与动脉钙化病变的调控。

1姚云婕，钱雪松，盛宇峰.老年冠心病患者外周血同型半胱氨酸及尿酸水平与冠脉病变程度的相关性〔J〕.中国老年学杂志，2016；36(23)：5871-3.

2王海珠.氯吡格雷抵抗对伴糖尿病的冠心病患者冠脉介入预后影响及相关因素〔J〕.中国卫生工程学，2017；16(2)：234-5.

3郭华涛，徐丽华，常征利，等.冠脉斑块CT值改变及血清炎性因子与冠脉斑块稳定性的相关研究〔J〕.北华大学学报(自然科学版)，2017；18(1)：57-61.

4赵璐，赵航，李付勇，等.老年冠心病合并糖尿病患者冠脉病变严重程度的相关危险因素〔J〕.中国老年学杂志，2016；36(7)：1607-8.

5李永辉.miR-29a在动脉粥样硬化发生发展中的作用及其分子机制〔D〕.石家庄：河北医科大学，2013.

6杨迅.冠心病患者血清HMGB1及hs-CRP水平与冠心病严重程度的相关性〔J〕.中国卫生工程学，2017；16(3)：394-5，398.

7李欣颖，李巍，张铁山，等.斑点追踪成像技术对冠心病患者室壁运动的二维应变研究〔J〕.北华大学学报(自然科学版)，2017；18(1)：70-3.

8周继朋.ADMA代谢酶基因多态性与中国汉族人群动脉硬化性心脑血管疾病易感性及机制研究〔D〕.长沙：中南大学，2014.

9张新焕.动脉硬化关键信号分子相关的血清microRNA在亚临床甲减病人中表达谱初探〔D〕.济南：山东大学，2014.