电针足三里对肠易激综合征大鼠胃肠功能及CGRP、SP、VIP影响研究*

郑　苏,胥　婧,彭　力

(十堰市太和医院 湖北医药学院附属医院，湖北 十堰 442000)

肠易激综合征(Irritable Bowel SyIldmIIle，IBS)是一种慢性肠道功能紊乱性疾病，以感觉动力失调及以对机械性或化学性刺激的高敏感性为特征，临床表现主要为腹部不适或腹部疼痛同时伴有排便习惯及粪便性状的改变[1]。IBS因为发病率高、治疗迁延难愈、严重影响患者生存质量而逐渐被越来越多的学者重视。现今，西医主要以调节肠道功能、内脏敏感性和中枢神经为主，治疗上虽能使症状暂时得到控制，但疗效不佳，患者依从性差且易于复发的缺点使患者备受困扰[2]。研究显示，针灸防治IBS具有较好的临床疗效，特别是针灸对胃肠动力的调整作用更是近年来关注的焦点之一。针刺治疗是目前临床上用于治疗IBS较多的中医外治疗法之一，尤以体针治疗为主,在临床上发挥着较大的优势[3]。近年来的临床研究显示，针灸治疗IBS疗效确切[4]，配穴及方法多样[5-6]，且疗效优于常规药物[7]。因此，如何积极有效挖掘中医理论防治功能性胃肠疾病，提高并阐明针刺对IBS的疗效和作用机制具有重要的科学价值。本研究选择电针足三里治疗肠易激综合征，观察电针足三里对肠易激综合征模型大鼠肠系膜微循环、内脏敏感性、胃肠功能及CGRP、SP、VIP等的影响，探讨电针治疗肠易激综合征可能的作用机制。

1　材料

1.1　动物

选取3个月清洁级健康Wistar雄性大鼠90只，体质量(300±20)g，由湖北医药学院实验动物中心提供，动物质量合格证号: 沪动合证字152号，饲养于湖北医药学院清洁级实验动物房，恒定温度湿度，温度保持在(23±1)℃，湿度50%左右。普通饲料正常饲养，自由摄食饮水，光照12 h/日。

1.2　主要试剂和仪器

韩式电针仪G6805-Ⅱ型(北京华卫产业开发公司)，毫针(0.35 mm×25 mm,苏州环球针灸医疗器械有限公司产品)，大鼠自主行为装置(7420/7445型，意大利)，中心静脉导管(单腔，MEDEX普通型)、2F双腔导尿管和乙酸(北京化学试剂公司)，电子天平(上海梅特勃一托利多仪器有限公生产,规格：万分之一)，安尔碘(上海利康消毒高科技有限公司)，超低温三洋冰箱(日本),乙酸(北京化学试剂公司)，液体石蜡(北京化学试剂公司)，10%中性甲醛(北京百诺威生物科技有限公司)，Elisa 试剂盒(北京环宇金科生物医学技术有限公司进口分装，批号：20120419)。

2　方法

2.1　模型建立及分组

3月龄SPF级雄性Wistar大鼠90只，适应性喂养1周后随机分为3组，正常对照组、模型组和电针组，每组各30只。以高乳糖饲料喂饲与束缚应激相结合的方法制备IBS-D大鼠模型，加工高乳糖饲料[8]，略作改进进行束缚应激，实验采用医用橡皮膏捆绑大鼠固定于高铁架上并倾斜60°放置，使大鼠双后肢完全制动，1 h后解除束缚，造模共14天，此造模方法采用相对温和的应激刺激结合外周致敏法同时使用，大大提高了造模的成功率。正常对照组常规喂养，束缚应激同模型组，其余各组于造模的同时给予相应的处理。

2.2　治疗方法

取穴：参照《实验针灸学》中标准穴位图谱进行定位[9]。足三里穴:位于大鼠膝关节后外侧，腓骨小头下约5 mm。

电针治疗：束缚大鼠后，用0.30 mm×13 mm华佗牌毫针直刺入，胶布固定，接G6805-Ⅱ型电针治疗仪，两侧足三里连接电极，连续波，频率110次/min，刺激强度1～1.5 mA，然后留针25 min，1次/天，共14天。模型组只捆绑束缚20 min,不治疗。正常对照组不做任何处理。

2.3　观察指标

2.3.1内脏敏感性的影响采用腹部回撤反射(Abdominal Withdrawal Reflex,AWR)评分检测[10]。在乙醚麻醉下，络合碘消毒肛门，将石蜡润滑的导尿管(2F双腔)插入大鼠肛门，气囊末端约距肛门1 cm,后固定。大鼠苏醒后，被放在特制的20 cm×5 cm×8 cm的塑料笼内(塑料笼透明便于观察)，待大鼠安静后向气囊内逐渐注水，观察大鼠腹部抬起及背部拱起时分别所需注水量，每个阈值重复3次，每次持续20 s，间隔5 s，数据取3次均值。

2.3.2胃肠道动力检测和结肠蠕动波测定胃肠道动力检测[11]：以min计算单位，观察各组首次排出活性炭黑便所需要的时间。结肠蠕动波测定[12]：以个位计算单位，观察单位时间(5 min)内结肠蠕动波个数。

2.3.3肠系膜微循环检测生理盐水维持37℃恒温环境，在内镜下(×40)观察10、20和30 min大鼠肠系膜同一微血管的管径和血流状态，并记录10、20和30 min图像变化。血流状态分为4级：0级，无或有微颗粒感，血流快呈光滑的索条状；Ⅰ级，有明显的颗粒感，血流较快；Ⅱ级，血流流动缓慢或前后摆动慢，成泥沙状；Ⅲ级，血流停滞不动或不可见血流[13]。

2.3.4血浆SP、CGRP和VIP测定以10%水合氯醛溶液(350 mg/kg)腹腔麻醉大鼠，经腹主动脉采血3 mL，肝素钠抗凝，离心15 min(3 000转/min)后取上清，置-80℃冻存。用放免法测定血浆SP、CGRPT和VIP含量。

2.4　统计学处理

3　结果

3.1　3组大鼠内脏敏感性的比较

由表1可知，治疗后与正常对照组相比，模型组大鼠的腹部抬起肌背部拱起值均降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与模型组比较，电针组腹部抬起与背部拱起均有所改善，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

表1　治疗后3组IBS内脏敏感性比较

注：与正常对照组比较,1)P<0.05；与模型组比较,2)P<0.05

3.2　3组大鼠SP、CGRP、VIP含量比较

由表2可知，治疗后与正常对照组相比，模型组SP和VIP升高、CGRP降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与模型组比较，电针组VIP、SP和CGRP均有所改善，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

表2　治疗后3大鼠血浆SP、CGRP和VIP含量比较　(pg/L)

注：与正常对照组比较,1)P<0.05；与模型组比较,2)P<0.05

3.3　3组大鼠肠系膜微循环比较

由表3可知，治疗后与正常对照组比较，模型组微血管管径在10 min、20 min和30 min均有所收缩，差异均有统计学意义(均P<0.05)；与模型组比较，电针组微血管管径在10 min、20 min和30 min均有所改善，差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组不同时间点比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表3　治疗后3组大鼠微血管直径比较

注：与正常对照组比较,1)P<0.05；与模型组比较,2)P<0.05；与10 min时间点比较,3)P>0.05

由表4可知，治疗后与正常对照组比较，模型组血流缓慢或停止，在Ⅰ～Ⅱ级者较多，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，电针组血流明显加快，全部恢复到0～Ⅰ级，差异有统计学意义(P<0.05)。各组不同时间点差异无统计学意义(P>0.05)。

3.4　3组大鼠胃肠道动力及结肠蠕动波比较

由表5可知，治疗后与正常对照组比较，模型组大鼠首次排出活性炭黑便所需时间明显延长，收缩波个数有所增多，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，电针组大鼠首次排出活性炭黑便所需时间明显缩短，收缩波个数明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)。

表4　治疗后3组大鼠肠系膜微循环血流状态变化　(例)

4　讨论

肠易激综合征(IBS)是一种以腹痛、腹胀、排便习惯及性状改变等为主要症状的感觉动力失调，以对机械性或化学性刺激的高敏感性为特征的慢性肠道功能紊乱性疾病。因其发病率高、治疗困难、严重影响患者生存质量而被逐渐引起重视。

表5　治疗后3组胃肠道动力和结肠蠕动波比较

注：与正常对照组比较,1)P<0.05；与模型组比较,2)P<0.05

目前IBS的病因和发病机制尚未完全阐明，可能与患者肠道感觉和动力异常、神经-内分泌、感染和饮食等因素密切相关[14]。研究证实[15-16]，肠易激综合征模型大鼠的发病与P物质(substance P,SP)、降钙基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)、血管活性肠肽(vasoactine intrestinal peptide，VIP)、内皮素(endothelin，ET)、白细胞介素等生物活性物质分泌失调相关。P物质(substance P, SP)具有刺激小肠、结肠黏膜分泌水和电解质的作用, 可以导致血浆外渗、中性粒细胞浸润，从而影响肠易激综合征的严重程度[17]。降钙基因相关肽(CGRP)是一种内源性舒血管物质，可以通过细胞内CGRP的介导作用，起到调节血流、胃肠分泌和运动的功能[18]。VIP可以抑制肠道蠕动，其机制可能是通过松弛胃肠平滑肌，从而抑制结肠和直肠紧张性，此外还调节肠道对Na+和水的摄入，促进Cl-分泌，导致腹泻,总而言之，VIP与肠易激综合征的发病过程密切相关[19]。

现今，西医治疗肠易激综合征尚无特殊的治疗方法。多以调节肠道功能和内脏敏感性及中枢神经为主，虽能使症状得到暂时缓解，但因疗效不确定，患者依从性差，且易于复发的缺点而使患者备受困扰[20]。祖国传统医学认为，中医学无IBS之病名，根据其腹痛、腹胀、排便习惯及性状改变等症状，隶属于中医学“腹痛”“泄泻”“便秘”和“飧泄”等范畴。其病机多为素体阴虚或阳虚、饮食不节、情志失调和外邪内侵等，造成脏腑气血阴阳失调、脾胃功能失常。足三里经脉循行“属胃络脾，循腹里”，刺之，调节胃肠蠕动[21]。近年来的临床研究已逐渐表明，针灸治疗IBS疗效确切[4]，配穴及方法多样[5]，并且疗效优于常规药物[6]。

本研究显示，肠易激综合征模型组大鼠内脏敏感性明显降低，肠道微循环管径明显变窄，血流缓慢或停止，血浆中的SP和VIP含量升高，CGRP含量降低，次排出活性炭黑便所需时间明显延长，收缩波个数明显增多。而电针组大鼠内脏敏感性有所提升，肠道微循环管径扩张，血流明显加快，血浆中的SP和VIP含量有降低趋势，CGRP含量有所升高，次排出活性炭黑便所需时间缩短，收缩波个数明显减少。通过分析上述研究结果证明,电针可以调节肠易激综合征大鼠血浆中CGRP、SP、VIP水平的变化，够改善肠系膜微循环障碍，扩张管径,降低内脏敏感性，促进胃肠道动力,缓解肠易激症状，从而达到治疗的目的。

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