艾滋病HAART前后IL-7与CD4+T细胞及HIV-RNA定量相关性研究

蒋 奕，胡 腾，刘 冰，荣秀明

（四川绵阳四0四医院感染科，四川 绵阳 621000）

艾滋病,即获得性免疫缺陷综合征（acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS）是一种是由人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）感染引起的危害极大的传染病，严重威胁人类公共卫生与健康，影响到经济发展和社会稳定[1-2]。HIV主要攻击人类免疫系统的CD4+T淋巴细胞，影响CD4+T细胞数量和功能，最终发生一系列免疫缺陷综合征[3]。高效抗逆转录病毒治疗（Highly active antiretroviral therapy,HAART）能够最大限度地降低HIV病毒载量，保护和重建部分免疫功能，降低HIV相关疾病的发生率和死亡率[4]。IL-7属于促红细胞生成素家族Ⅰ型短链细胞因子，在T细胞稳态的维持中发挥着关键的作用，IL-7与其受体CD127结合后促进T细胞存活的基因高表达，并增强抗凋亡分子，提高T细胞的存活，刺激CD4+T细胞数量增加[5]。但HAART前后艾滋病患者IL-7水平与CD4+T细胞计数及HIV-RNA的关系尚不明确。本研究监测HAART前后艾滋病患者血清IL-7水平、CD4+T细胞计数及HIV-RNA，并探讨它们的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年1月～2016年12月间接受HAART的艾滋病患者73例，其中男54例，女19例，年龄18～45岁，平均年龄（30.6±9.2）岁。按传播方式分别为性传播64例，血液传播7例，其他2例；HAART方式分别为2NRTIs+NNRTI方式59例，2NRTIs+PI方式14例，见表1。所有患者均经四川省绵阳市疾病预防控制中心蛋白印迹试验（Western Blot，WB）确认HIV-1抗体阳性，诊断符合2012年发布的卫生部《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》[6]，并依照2011年发布的《艾滋病诊疗指南》，采用HAART，推荐方案采用2种NRTIs+1种NNRTIs或者2种NRTIs+1种加强型PIs（含RTV）[7]。入组患者自愿签署知情同意书。排除高血压、心脏病、糖尿病等代谢性疾病及严重精神神经疾病患者。

表1 患者一般情况统计Table1 General statistics of patients

1.2 实验设备与试剂

1.2.1 实验设备 美国BioTek ELx800通用酶标仪，德国罗氏公司LightCycler96定量PCR仪，CD4+T淋巴细胞绝对计数采用美国BD Facscalibun/FACsCoum流式细胞仪测定。病毒载量的测定使用荷兰生物梅里埃公司EasyQ病毒载量测定仪。

1.2.2 试剂 人类IL-7检测试剂盒（美国BD公司），人类免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒（深圳匹基生物工程有限公司），人类CD4抗体（美国BD公司）。

1.3 方法 收集HAART前和治疗3个月后患者血液标本，检测IL-7水平、CD4+T细胞计数和HIV-RNA定量。

1.3.1 血清IL-7水平检测于HAART前和治疗3个月后收集艾滋病患者血液标本，分离血清后保存于-80℃冰箱待测，通过ELISA法检测IL-7水平，操作步骤按试剂盒说明书进行。

1.3.2 CD4+T细胞计数于HAART前和治疗3个月后收集艾滋病患者血液标本，取100µL血液，加入10µL CD4抗体，混匀后避光孵育20 min，利用流式细胞仪检测CD4+T细胞计数。

1.3.3 HIV-RNA定量 于HAART前和治疗3个月后收集艾滋病患者血液标本，利用人类免疫缺陷病毒（HIV-1）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒分析HIV-RNA定量，根据荧光信号的变化来检测 HIV-RNA定量。该方法定量检测范围为5.0×102～1.0×108拷贝/ml。

1.4 统计学方法 本研究采用SPSS 19.0统计软件，计量资料采用表示，治疗前后的结果比较采用配对t检验分析，两组之间的相关系数采用r2线性表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 艾滋病患者HAART前后IL-7水平、CD4+T细胞计数和HIV-RNA定量 经过HAART后艾滋病患者IL-7水平降低、CD4+T细胞计数增高，HIV-RNA定量减少（P＜0.001），见表2和图1。

表2 HAART前后IL-7水平、CD4+T细胞计数和HIV-RNA定量情况Table2 The levels of IL-7,CD4+T and HIV-RNAwere measured before and after HAART

表2 HAART前后IL-7水平、CD4+T细胞计数和HIV-RNA定量情况Table2 The levels of IL-7,CD4+T and HIV-RNAwere measured before and after HAART

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图1 HAART前后IL-7水平、CD4+T细胞计数和HIV-RNA定量比较Figure1 IL-7 levels before and after HAART,CD4+T cell count,and HIV-RNAquantitative comparisons

2.2 艾滋病患者HAART前后IL-7改变量与CD4+T细胞数量及HIV-RNA定量改变量的相关性 HAART前后的IL-7改变量与CD4+T细胞数量改变量成负相关（r2=0.8050）；与HIVRNA定量的对数值改变量无相关性（r2=0.0150），见图2。

3 讨论

艾滋病的病原体为获得性免疫缺陷病毒（HIV），HAART的出现和广泛推广应用是艾滋病发展史上最重大的事件，它能够最大程度的抑制患者体内的 HIV病毒水平，从而缓解HIV的临床进程，使患者的免疫功能得到重建，改善预后并提高生存质量[8]。HIV-RNA主要影响以CD4+T细胞为主的T细胞及机体免疫系统功能，HIV血清阳性患者与健康对照试验以及单核-巨噬细胞系统体外细胞试验研究证明,HIV感染可导致细胞因子的产生发生紊乱[9]，反之，细胞因子也可对HIV的表达发挥调节作用。其中IL-7在维持T细胞的稳态这方面发挥着关键的作用。IL-7属于EPO家族细胞因子，可由基质细胞、树突状细胞、内皮细胞等产生[10]，能提高成熟T细胞的生存能力[11]，动员造血干细胞入血补充T细胞。国外有研究报道HIV感染者血浆IL-7水平较正常对照升高，与病毒载量呈正相关，与CD4+T细胞的数量呈负相关，同时发现IL-7可使CD4+T细胞上CXCR4表达水平上调，这与SI表型的形成有一定相关性，并影响疾病进展[12]。

我们的研究发现HAART后艾滋病患者IL-7水平降低、CD4+T细胞计数增高，HIV-RNA定量减少（P＜0.001），这与已有的报道结果保持一致[13]；HAART前后的IL-7改变量与CD4+T细胞数量改变量成负相关（r2=0.8050）；与HIV-RNA定量的对数值改变量无相关性（r2=0.0150）。HAART后，控制大多数艾滋病患者HIV病毒复制，使得血HIV-RNA定量下降到检出下限以下（＜5.0×102拷贝/ml），病毒量的减少使得T细胞稳定性增加。本研究发现HAART后IL-7改变量与CD4+T细胞数量改变量成负相关，IL-7降低后CD4+T细胞数量增加，提示IL-7可能在艾滋病患者HAART后免疫重建中发挥着重要的作用。但IL-7与HIV-RNA并无相关性，其原因在于我们对于HIV-RNA的检出下限为5.0×102拷贝/ml，大部分患者经3个月的HAART后HIV-RNA降低到检出下限以下，故未发现IL-7与HIV-RNA存在相关性。

HAART是目前艾滋病治疗过程中最有效抑制HIV-RNA定量、减少并发症、延长生命、改善生活质量的治疗手段。事实证明接受长期HAART的艾滋病患者淋巴细胞亚群数量功能和免疫功能可以得到一定程度的恢复。IL-7在固有免疫和获得性免疫之间起着重要的桥梁作用，HAART前后的IL-7改变量与CD4+T细胞数量改变量成负相关，其机制可能是IL-7降低后导致CD4+T细胞数量增加，这提示IL-7在 HAART后免疫重建过程中发挥着重要的作用。在HARRT过程中动态监测IL-7水平和CD4+T细胞计数及病毒载量的相关性能够更好地反映HIV感染者免疫状态，为预防机会性感染及指导抗病毒治疗提供依据

图2 HAART前后IL-7改变量与CD4+T细胞数量及HIV-RNA定量改变量的相关性分析Figure2 Correlation analysis between IL-7 modified variables and CD4+T cell number and HIV-RNAquantitative changes before and after HAART

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