抗中性粒细胞胞浆抗体检测对系统性血管炎的临床价值

谭立明， 焦安君， 冯晓晶， 徐镠粤， 谭福燕， 何思齐， 罗 姮， 陈娟娟， 蒋永清， 李 华

（1. 南昌大学第二附属医院检验科，江西 南昌 330006；2. 南昌大学公共卫生学院，江西 南昌 330031）

抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic antibody，ANCA）是近些年针对以韦格纳肉芽肿（Wegener's granulomatosis， WG）为代表的系统性小血管炎的一类特定血清学标志性抗体，是一组以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体。已有文献报道ANCA是一种诊断系统性血管炎的特异性指标[1]，具有重要的临床意义。近年来检测ANCA的技术发展很快，在类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）、系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）等许多结缔组织疾病患者血清中均能检测出ANCA。本研究应用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence，IIF）对13 866例患者进行了血清ANCA检测及回顾性分析。

1 材料和方法

1.1 一般资料

选取2014年6月—2016年6月在南昌大学第二附属医院住院和门诊检测ANCA的患者13 866例，其中男6 533例、女7 333例，年龄0～102岁。

1.2 方法

仪器为EUPOStar Ⅲ Plus荧光显微镜（德国EVROIMMUN公司）、SUNRISE酶标仪（瑞士帝肯贸易有限公司）、PW-960全自动洗板机[记忆科技（深圳）有限公司]。试剂包括ANCA IgG检测试剂盒、抗髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）抗体检测试剂盒、抗蛋白酶3（protease 3，PR3）抗体检测试剂盒（德国EUROIMMUN公司）。血清抗MPO抗体和抗PR3抗体检测采用ELISA，ANCA检测采用IIF，以上2种方法均严格按试剂说明书及标准操作规程操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析，计数资料分析采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ANCA的检测

在13 866例患者中检出ANCA阳性318例，阳性率为2.29%。其中在6 533例男性患者中，ANCA阳性135例，阳性率为2.07%；在7 333例女性患者中，ANCA阳性183例，阳性率为2.50%。男、女性患者间ANCA阳性率差异无统计学意义（χ2=2.650，P＞0.05）。见表1。

表1 男、女性患者血清ANCA水平的比较 [%（例/例）]

2.2 各年龄组患者ANCA水平的比较

在13 866例患者中，71～80岁组患者的ANCA阳性率最高，达到3.55%，＞80岁组、61～70岁组患者分别居第2位（3.26%）和第3位（2.54%）。见表2。

2.3 ANCA靶抗原的分布

在318例阳性患者血清中，荧光核型以p-ANCA为主，其阳性率为77.7%（247/318），c-ANCA阳性率为22.3%（71/318）。同时p-ANCA的靶抗原以MPO为主（67.2%），而c-ANCA的靶抗原以PR3为主（49.3%）。见表3。

表2 不同年龄、性别患者ANCA的阳性率比较 [%（例/例）]

2.4 318例ANCA阳性患者的临床诊断及分型

318例ANCA阳性患者的临床诊断及分型结果见表4。

表3 ANCA靶抗原的分布 [%（例/例）]

表4 318例ANCA阳性患者的分型及临床诊断结果 [例（%）]

3 讨论

ANCA最早（1882年）由DAVIES等[2]在6例原发性局灶节段坏死性肾小球肾炎患者的血清中检测到。VAN DER WOUDE[3]在1985年发现WG患者血清中存在ANCA并认定其为WG的特异性血清学诊断标志物，此时ANCA的重要临床作用才得到认识。

我们回顾性分析近3年13 866例患者血清样本，ANCA的阳性率达到2.29%，并以p-ANCA为主。其中男性阳性率为2.07%，女性阳性率为2.50%，ANCA总体阳性率与国内的报道[4]相一致。分析不同年龄组患者ANCA的检测结果，ANCA阳性高发于中老年人，随年龄增长ANCA的阳性率增加。

ANCA分为c-ANCA和p-ANCA 2种荧光核型，检测ANCA的基质片包括乙醇固定的中性粒细胞、甲醛固定的中性粒细胞、HEP-2细胞和猴肝组织，后二者的作用主要是排除抗核抗体（anti-nuclear antibody，ANA）对检测的干扰。其中p-ANCA的主要靶抗原为抗MPO抗体，MPO是一种相对分子质量为146 000的高阳离子化蛋白质，呈现核周平滑或细颗粒型荧光；c-ANCA的主要靶抗原为抗PR3抗体，呈现粒细胞胞浆颗粒型荧光。另外，在318例阳性血清分析中，非MPO/PR3的p-ANCA和c-ANCA有54例，表明存在除PR3、MPO以外的靶抗原，包括溶菌酶、组织蛋白酶、弹性蛋白酶、乳铁蛋白和通透性增加蛋白等抗原，临床上还有待对其他特异性靶抗原作进一步证实。

有研究表明，不同类型的ANCA和靶抗原对应不同疾病的发病率，PR3-ANCA主要引起WG，而MPO-ANCA主要引起显微镜下多血管炎[5]。本研究结果显示，WG患者ANCA的阳性率为12.9%，且抗PR3抗体的阳性率为100.0%；显微镜下多动脉炎患者ANCA的阳性率为13.2%，以抗MPO抗体为主，阳性率为88.1%。这与文献报道[6]相一致。

在ANCA继发性血管炎中，临床疾病以SLE和RA为主，其阳性率分别为17.2%、11.3%，这与文献报道[7-8]相符。有研究表明，ANCA阳性与肾病有一定的关系[9]。本研究统计出3种类型肾病，分别为慢性肾炎（5.4%）、肾病综合征（10.1%）、急进性肾小球肾炎（3.8%），这与参考文献[10]基本一致，其中尤以抗MPO抗体阳性率最高，可达75.0%，原因为肾脏是原发性小血管炎受累的主要部位，其主要表现在狼疮肾炎、慢性肾炎、慢性肾功能不全及急进性肾小球肾炎等疾病中[11-12]。同时，本研究还发现17例甲状腺功能亢进症患者ANCA阳性，推测ANCA可能与甲状腺功能亢进症也有一定的关系，已有文献报道甲状腺功能亢进症患者可出现ANCA阳性[13]，本研究结果与之相符。在本研究的318例ANCA阳性患者中，间质性肺炎10例（3.1%）、慢性阻塞性肺病10例（3.1%），这与血管炎累积肺脏有一定的关系，与参考文献[14]基本一致。ANCA阳性还可见于硬皮病、结缔组织疾病等其他自身免疫性疾病患者中。值得注意的是，在本研究318例ANCA阳性患者中有4例脑梗死患者，这4例患者脑梗死是由中枢神经系统血管炎所致，脑梗死损伤导致了ANCA抗原位点的暴露[15]。本研究还发现20例其他疾病，包括4例慢性盆腔炎、5例肝硬化、2例反应性关节炎、3例肺结核、2例感染性心内膜炎、3例阿米巴原虫感染和1例霍奇金淋巴瘤，因其确诊病例较少无法分析出与检测项目的直接关系而被归为其他疾病，这些病种与ANCA的相关性还有待于进一步研究。

本研究通过对13 866例患者血清ANCA检测结果的回顾性分析，得出了ANCA在不同年龄、性别、靶抗原、临床疾病患者中的分布。ANCA对WG、原发性小血管炎的诊断，对继发性血管炎引起的疾病，如SLE、RA等的诊断与治疗均有重要的指导意义。随着检验方法的不断改进，ANCA对系统性血管炎的诊断、治疗更加重要，因此应注重ANCA在临床疾病中检测的价值。

[1] 刘霞，胡伟新. 抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎的临床研究进展[J]. 医学研究生学报，2016，29（3）：323-326.

[2] DAVIES D J，MORAN J E，NIALL J F，et al. Segmental necrotising glomerulonephritis with antineutrophil antibody：possible arbovirus aetiology?[J]. Br Med J（Clin Res Ed），1982，285（6342）：606.

[3] VAN DER WOUDE F J. Anticytoplasmic antibodies in Wegener's granulomatosis[J]. Lancet，1985，2（8445）：48.

[4] 刘维佳，黄俊波. ANCA相关性系统性小血管炎患者血清指标、内皮损伤标记物与肾损害的关系[J].海南医学院学报，2016，22（10）：976-979.

[5] MIYAOKA T，ITABASHI M，KUMON S，et al.Rituximab therapy in the treatment of anti-neutrophil cytoplasmic antibody（ANCA）-positive interstitial pneumonia：case report[J]. Nihon Jinzo Gakkai Shi，2016，58（1）：38-44.

[6] SADA K E，YAMAMURA M，HARIGAI M，et al.Issues associated with the Ministry of Health，Labour and Welfare diagnostic criteria for antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitides：reclassification of patients in the prospective cohort study of remission induction therapy in Japanese patients with ANCA-associated vasculitides according to the MHLW criteria[J]. Mod Rheumatol，2015，25（4）：657-659.

[7] JARROT P A，CHICHE L，HERVIER B，et al.Systemic lupus erythematosus and antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis overlap syndrome in patients with biopsy-proven glomerulonephritis[J]. Medicine（Baltimore），2016，95（22）：e3748.

[8] WEINER M，SEGELMARK M. The clinical presentation and therapy of diseases related to antineutrophil cytoplasmic antibodies（ANCA）[J].Autoimmun Rev，2016，15（10）：978-982.

[9] SATHE K P，MEHTA K P. Coexistence of atypical hemolytic uremic syndrome with membranoproliferative glomerulonephritis and antineutrophil cytoplasmic antibodies-associated vasculitis[J]. Saudi J Kidney Dis Transpl，2016，27（4）：800-804.

[10] YANG Y Z，SHI S F，CHEN Y Q，et al. Clinical features of IgA nephropathy with serum ANCA positivity：a retrospective case-control study[J]. Clin Kidney J，2015，8（5）：482-488.

[11] BARCELOS F L，FONTES T M. Case report-IgA nephropathy ANCA positive with favorable outcome[J]. J Bras Nefrol，2015，37（3）：414-417.

[12] ZOU R，LIU G，CUI Z，et al. Clinical and immunologic characteristics of patients with ANCA-associated glomerulonephritis combined with membranous nephropathy：a retrospective cohort study in a single chinese center[J]. Medicine（Baltimore），2015，94（37）：e1472.

[13] SCHAMP V，VERFAILLIE C，BONROY C，et al.Propylthiouracil induced ANCA-associated vasculitis in a 14-year-old girl[J]. Acta Clin Belg，2015，70（2）：127-129.

[14] ZAKHAROVA E V，IAKOVLEV V N，VINOGRADOVA O V，et al. ANCA-associated vasculitis affecting lungs and kidneys：clinical and morphological characteristic，treatment，outcomes[J]. Klin Med（Mosk），2013，91（7）：38-43.

[15] 余巧燕，刘荣丽，赵美英，等. 以脑梗死为首发表现的ANCA相关性小血管炎1例报告[J]. 中风与神经疾病杂志，2016，33（4）：371-372.

上海市临床检验中心肌酐和糖化血红蛋白参考方法被批准列入JCTLM参考实验室列表

新春伊始，上海市临床检验中心收到国际检验医学溯源联合委员会（Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine，JCTLM）通知，肌酐和糖化血红蛋白2个质谱参考方法被批准列入JCTLM参考实验室列表。包括2016年被批准的7个光谱法项目，目前上海市临床检验中心为全球提供赋值服务的项目达到9项。上海市临床检验中心的质谱技术研究始于2013年，此次获批意味着其参考体系建设又上了一个台阶。

JCTLM由国际计量局、国际临床化学与检验医学联合会和国际实验室认可合作组织共同组成，旨在推动检验医学的标准化和溯源性的建立，为检验结果的准确性提供保证。目前，上海市临床检验中心建立了包括蛋白、酶类、代谢物和底物、激素、离子等22项参考方法，具备了为质评机构、生产厂商和实验室等提供赋值服务的能力。

上海市临床检验中心将再接再厉，为实现检验标准化而努力！