羊冷冻精液的制作与应用技术研究

孟根巴根那

（内蒙古呼伦贝尔市鄂温克族自治旗红花尔基镇畜牧兽医站，呼伦贝尔 021100）

0 引言

羊人工授精技术是畜牧业生产中家畜繁育改良的一种技术含量较高的生物技术。推广羊冷配人工授精技术能大幅度提高优秀种公羊的利用效率，方便羊品种改良，减少种公羊的购买量，节约成本。同时在进行人工授精作业前，由于种公羊的精液是经过优良的选择，冷冻精液的精液质量高于普通种公羊，因此通过应用冷配受精技术，能极大提高改良效果，缩短改良周期。羊冷冻精液的制作是整个人工授精技术的关键环节，目前应用羊冷冻精液较为先进的国家主要有法国、英国、俄罗斯，这3个国家的羊冷配受胎率普遍在60%以上[1]。我国从20世纪70年代开始应用冷配人工授精技术，但是受胎率一直维持在60%以下，与常温羊人工授精技术配种存在一定差距。大量实践经验表明，羊冷冻精液受胎率低不仅是因为精液解冻后活性受到影响，同时还受到整个精子细胞顶体完整性和细胞结构完整性的影响，而这部分的影响主要取决于羊冷冻精液的制作技术是否过关。

1 材料与方法

1.1 材料

研究选择的公羊主要为道赛特种公羊7头、萨福克种公羊8头。选择的仪器设备主要有电子天平、搅拌器、蒸馏水、电烤箱、高压灭菌器、显微镜、恒温板密度仪、恒温水浴锅、细管分装一体机、冷冻仪、冰箱、消毒柜、精子图像分析仪。研究共配置了4种保护液的配方，配方一是由柠檬酸钠、乳糖、卵黄、甘油、青霉素、链霉素组成，使用量分别为1.5 g、6 g、20 mL、5 mL、10万国际单位、10万国际单位；配方二是由柠檬酸钠、乳糖、卵黄、甘油、青霉素、链霉素组成，使用量分别为4 g、3.6 g、13 mL、5 mL、10万国际单位、10万国际单位；配方三是由柠檬酸钠、乳糖、卵黄、三基、甘油、青霉素、链霉素组成，使用量分别为4 g、4 g、13 mL、0.08 g、5 mL、10万国际单位、10万国际单位；配方四为脱脂奶粉、甘油、柠檬酸钠、葡萄糖、青霉素、链霉素，使用量分别为2.4 g、6 mL、1.8 g、3 g、10万国际单位、10万国际单位。

1.2 方法

采精期间要按照繁殖时期的饲养配方进行科学饲喂。确保种公羊饲料营养价值全面，身体膘情适宜。在采精前，应该对各个器械设备进行严格的卫生消毒，确保采精过程中不会导致各种致病菌感染，提高采精质量。同时还应该做好采精室的卫生消毒工作，认真清扫，然后使用消毒药剂，全面喷洒消毒。在采精作业前，使用清水对台羊的后区进行全面冲洗，擦洗干净后，选择使用1%的高锰酸钾溶液进行全面消毒。同时还应该做好采精种公羊剥皮和腹部的卫生消毒，这样能减少精液中微生物的数量[2]。同时采精前可以适当对种公羊采精部位的羊毛进行修剪。按照常规人工授精方法，假阴道采集新鲜精液。采集精液时，一定要保持室内清洁、卫生、干燥、安静，假阴道内的温度控制在41 ℃左右。采精时要确保各个采精部件之间连接完好，假阴道内部润滑良好。采精结束后，使用消毒过的卫生纸或纱布包裹住采精瓶，并将采精瓶外层擦拭干净，带回实验室镜检稀释。

1.3 精液品质鉴定

精液采集完毕后，带回实验室观察精液颜色，正常的精液颜色呈现云纹状白色，气味正常，pH值为6.4～6.8，每次射精量在0.8 mL以上，每毫升的精子密度保持在20亿个以上，顶体完整率为40%，精子畸形率为14%。凡是夹杂着血液、毛发和其他污染物的精液，不能用于精液稀释和配种。

1.4 精液稀释和冷冻

采集到的精液进行鉴定，合格后按照要求，将其划分为四等。在稀释前，应该确保配制好的稀释液经过水浴巴氏消毒。通常采用上午人工采精，精液稀释，机械压装管，中午精液平衡，下午冷冻[3]。平衡时间通常控制为4～5 h。精液稀释完毕后可进行分装，将稀释好的精液放置在细管自动分装机内分装，每个细管容量为0.25 mL。细管制作完毕后，对气管进行冷冻处理，冷冻结束后，抽取2%的比例进行解冻后的质量检验，确保冻精符合标准。

1.5 冷冻精液解冻和输精

精液解冻采用水浴法，使用镊子从液氮罐中取出吸管冻精，放入40 ℃的温水中，解冻15 s。细管冻精解冻完毕后，放入输精枪内，采用内窥镜输精到经过发情鉴定的母羊子宫颈口内。在母羊的整个情期使用2次输精法，能极大提高母羊的受胎率。

2 结果

2.1 不同稀释液对精液品质的影响

试验结果显示，配方三有利于提高冻精的成活率，多次解冻后，冻精的成活率普遍在45%以上，与其他3种稀释液相比，存在较大差异性，见表1。

表1 不同稀释液对精液品质的影响 单位：%

2.2 冷冻精液对母羊受胎率的影响

研究共选择了100头经过发情鉴定的母羊，采用人工授精的方式，进行2次输精作业。输精前按照随机原则，将其划分为5个组别，前4组分别使用上述4种稀释液配制的冷冻精液进行人工授精；第5组作为对照组，采用新鲜精液人工授精技术进行授精作业。试验结果显示，前4组的母羊受胎率普遍在60%以上，对照组的受胎率较为接近。本次研究制备的冷冻精液受胎效果接近和达到了常温条件下的授精水平，见表2。

表2 冷冻精液对母羊受胎率的影响

3 结论

通过本次冷冻精液的制作发现，该项工作是一项技术要求很高的系统性工作，冷冻精液的质量与操作过程的各个环节紧密相连，其中对稀释液的选择尤为重要。此外，在进行冷冻精液制作时，为加快羊冷配改良效果，采用试验研究和推广相结合的方法[4]。在辖区范围内的多个乡镇开展了羊冷配改良，构建了完善的改良体系，使技术在广大基层地区得到了进一步的推广和应用。