贵阳地区孕妇人群MTHFR C677T基因多态性分布研究

熊永红 任凌雁 卓召振 王仕敏 姜敏敏 李贵芳 黄盛文

[摘要] 目的 探討贵阳地区孕妇5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因多态性分布特征，为科学补充叶酸提供依据。 方法 选取2017年1月～2018年6月贵州省人民医院孕检孕妇2644例，利用PCR-荧光探针法检测MTHFR C677T位点基因型，统计分析贵阳地区汉族与少数民族女性C677T基因多态性分布特征的差异，与已报到的其他地区汉族及少数民族女性比较。 结果 贵阳地区汉族女性MTHFR C677T位点CC、CT、TT基因型频率分别为37.8%、48.3%、13.9%，C、T等位基因频率分别为61.9%、38.1%，与贵阳地区苗族女性比较，差异有统计学意义（P < 0.05），与布依族、侗族、土家族女性比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;与江苏、琼海、南宁、惠州、西安、宁夏、烟台、廊坊、长春、尚志比较，差异有统计学意义（P < 0.05），与成都、昆明比较，差异无统计学意义（P > 0.05），与柳州苗族、三江侗族、三亚黎族、延边朝鲜族女性比较，差异有统计学意义（P < 0.05），与巴东土家族、大理白族、银川回族比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 贵阳地区孕妇MTHFR C677T基因多态性分布在不同民族之间以及与其他地区之间比较有一定差异，具有地区和民族特点。

[关键词] 贵阳地区;亚甲基四氢叶酸还原酶;基因多态性;叶酸

[中图分类号] R394.3          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2018）12（c）-0083-04

[Abstract] Objective To explore the distributions of 5， 10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C677T gene polymorphisms among pregnant women in Guiyang region， provide a theoretical basis of scientific supplementation of folic acid. Methods From January 2017 to June 2018， in Guizhou Provincial People′s Hospital， 2644 pregnant women in Guiyang region were selected， the genotype of MTHFR C677T was detected by PCR-fluorescence probing. The distribution of C677T gene polymorphisms among Han and the ethnic minority women in Guiyang were analyzed statistically， then the results were compared with data of Han women reported and other ethnic minorities women in other regions had been reported before. Results The frequencies of CC， CT and TT of MTHFR C677T genotypes were 37.8%， 48.3% and 13.9%， frequencies of C， T alleles were 61.9% and 38.1% of Han women in Guiyang region， these were compared with Miao women， the differences were statistically significant （P < 0.05）， compared with women of Buyi， Dong and Tujia nationalities， the differences were statistically significant （P < 0.05）， Compared with the Han women in Guiyang and the Han women in Jiangsu， Qionghai， Nanning， Huizhou， Xian， Ningxia， Yantai， Langfang， Changchun， Shangzhi， the differences were statistically significant （P < 0.05）， no statistically differences between Guiyang and Chengdu， Kunming （P > 0.05）. There were statistically significant differences between Miao women in Liuzhou， Dong women in Sanjiang， Li women in Sanya， Chaoxian women in Yanbian， the differences were statistically significant （P < 0.05）， no statistically differences with Tujia women in Badong， Bai women in Dali， Hui women in Yinchuang（P > 0.05）. Conclusion The distributions of MTHFR C677T genes polymorphisms among women of childbearing age in Guiyang are different in various minorities and areas， which have national specificity and regional specificity.

[Key words] Guiyang region; MTHFR; Gene polymorphism; Folic acid

叶酸是一种水溶性B族维生素，参与核酸、蛋白质及磷脂的代谢，是细胞生长和胚胎发育必需的物质，缺乏会导致胎儿神经管缺陷、唇腭裂、先天性心脏病等出生缺陷，孕妇出现妊娠期高血压、先兆子痫和巨幼细胞性贫血等[1]。5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸代谢通路中的关键酶，其基因多态性将会影响血清叶酸和同型半胱氨酸水平[2]，其突变可引起MTHFR活性降低，导致人体利用叶酸能力降低，引起不良妊娠结局和孕妇妊娠期疾病的发生[3]。

本研究以贵阳地区汉族和少数民族孕妇为研究对象，对MTHFR C677T基因多态性位点进行检测，得出其在不同民族中的遗传分布特征，通过与其他地区、民族女性比较，进一步了解贵阳地区女性MTHFR基因多态性，为当地孕妇个体化的孕期保健提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选取2017年1月～2018年6月于贵州省人民医院孕检贵阳地区孕妇为研究对象，并排除籍贯非本市者，曾行肠胃切除手术或患严重消化系统疾病、肝肾功能不全者，患有冠心病、糖尿病、甲状腺疾病、恶性肿瘤、血液系统或免疫系统疾病者。共纳入2644例，其中汉族2263例，苗族81例，布依族79例，土家族67例，侗族60例，其他民族 94例（仡佬族21例，彝族20例，回族11例，白族、满族、穿青人各7例，蒙古族、黎族各5例，水族4例，毛南族、壮族各2例，瑶族、傣族、羌族各1例。平均年齡为（30.4±5.9）岁。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有患者和/或家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

抽取EDTA抗凝静脉血2 mL，提取全血基因组DNA，利用荧光探针与DNA模板特异性结合的特点，使用SLAN90荧光定量PCR仪进行检测，通过报告荧光强度确定各样本MTHFR C677T基因型。具体操作按MTHFR C677T检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书（深圳泰乐德医疗有限公司）进行。

1.3 统计学方法

应用SPSS 20.0软件对研究人群进行单核苷酸多态性（SNPs）的Hardy-Weinberg平衡进行统计学分析，不同民族及地区间基因型及等位基因频率比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 贵阳地区女性MTHFR C677T基因型和等位基因频率分布特征

贵阳地区汉族及少数民族女性MTHFR C677T基因型及等位基因分布详见表1。Hardy-Weinberg遗传平衡检验均P > 0.05，表明样本具有区域群体代表性。贵阳地区汉族MTHFR C677T基因型及等位基因频率与苗族女性比较，差异有统计学意义（P < 0.05），汉族女性MTHFR C677位点的CT、TT基因型频率均高于苗族;与布依族、土家族、侗族及其他少数民族女性比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 不同地区汉族女性的比较

贵阳地区汉族女性MTHFR C677T基因型和等位基因频率与江苏、琼海、南宁、惠州、西安、银川、烟台、廊坊、长春、尚志等地汉族女性比较，差异有统计学意义（P < 0.05），与昆明、成都地区汉族女性比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.3 贵阳地区汉族女性和其他地区少数民族女性的比较

贵阳地区汉族女性MTHFR C677T基因型和等位基因频率与柳州苗族、三江侗族、三亚黎族、延边朝鲜族女性比较，差异有统计学意义（P < 0.05），与巴东土家族、大理白族、银川回族女性比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

3 讨论

我国是出生缺陷高发国家，出生缺陷发生率约为5.6%，每年新增出生缺陷数90万～100万例[22]。贵阳是我国出生缺陷高发省市之一，贵州省2017年出生缺陷率为124/10 000，低于全国平均水平，但仍高于东部地区。MTHFR在叶酸和同型半胱氨酸代谢过程中发挥重要作用，与胎儿先天畸形、自然流产、染色体异常、肿瘤及心脑血管疾病有密切关系[23-24]。

MTHFR基因多态性在不同国家、地区及民族分布存在差异，但贵阳地区目前还尚未有大样本人群关于MTHFR C667T基因多态性分析报道。本研究选取2644例贵阳女性作为研究对象，分析发现贵阳汉族和苗族女性MTHFR C667T基因多态性分布差异有统计学意义，汉族女性CT/TT突变基因型频率及突变T等位基因频率均高于苗族女性，这种差异可能与人群对多种疾病的群体易感性有关。贵阳地区汉族女性MTHFR C667T基因型和等位基因频率与当地布依族、土家族、侗族女性比较差异无统计学意义。由于少数民族样本量较少，还需进一步增加样本量以明确不同民族间的差异。

中国地区MTHFR C667T 纯合突变TT基因型及突变T等位基因频率在地域分布上呈现北高南低的特征[25]，这与我国神经管缺陷发病率北高南低的情况相一致。本研究显示贵阳汉族女性MTHFR C677T基因型和等位基因频率与其他地区汉族女性比较大致符合该特点，与琼海、南宁、惠州、江苏、西安、银川、烟台、廊坊、长春、尚志等地汉族女性比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;贵阳汉族女性MTHFR C667T 纯合突变TT 基因型频率高于琼海、南宁及惠州，低于江苏、西安、银川、烟台、廊坊、长春、尚志（P < 0.05）;突变T等位基因频率与纯合突变TT基因型频率从南到北逐渐上升的趋势一致，提示该位点在贵阳地区与这些地区有着不同的遗传背景;与昆明和成都汉族女性比较，差异无统计学意义（P > 0.05），可能原因为贵州、云南、四川三省地理位置毗邻，生态环境、气候条件及饮食习惯相似等因素，致使MTHFR C677T基因多态性分布无明显差异。贵阳汉族与其他地区少数民族女性比较，MTHFR C677T 基因型和等位基因频率与柳州苗族、三江侗族、三亚黎族、延边朝鲜族差异有统计学意义（P < 0.05），同样符合自南向北逐渐升高的特点，基因多态性的地域、民族分布差异在一定层面上解释了我国出生缺陷发病率南低北高的情况。

MTHFR C677T基因多态性在我国不同地区、不同民族之间存在差异，除了受遗传因素的影响，可能与民族、地理环境、饮食习惯、气候等因素有关[26-27]。这种基因多态性的差异将导致不同地区及人群叶酸利用和代谢能力的差异，研究表明[3]MTHFR C677T纯合突变TT基因型个体的酶活性较正常個体降低60%～70%，杂合突变CT基因型则降低30%～40%。MTHFR C767T基因突变患者需补充更多叶酸，纯合突变TT基因型女性孕期每天需要补充800 μg叶酸才能达到野生型CC基因型补充400 μg叶酸的效果[28]。通过开展 MTHFR C677T基因多态性的检测，了解贵阳地区人群的遗传特征，对孕妇个体化补充叶酸、降低出生缺陷的发生率及孕期疾病的一级预防具有重要指导意义。

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（收稿日期：2018-08-10  本文编辑：苏   畅）