消肿凝胶剂制备工艺质量标准的验证
2018-03-04
(山西医科大学第二医院，山西 太原 030001)
滑膜炎是一种多发性疾病，其临床表现为关节肿胀疼痛，活动困难，严重影响人们的日常生活及身心健康性[1]。因此，通过现代科研手段，研究出一种疗效确切、毒副作用小、使用方便的新剂型十分必要。消肿凝胶剂由海桐皮、红花、当归、桃仁、甘草、苦参等组成，具有活血通络、清热祛湿的功效，对于膝关节肿胀疼痛、发热等具有很好的疗效。该药使用方便易于吸收，同时避免口服用药的不良反应。本实验通过对消肿凝胶制剂的制备方法进行验证，确定其性质稳定；通过薄层色谱法对胶剂主要中药进行定性鉴别，确定消肿凝胶剂的主要成分。
1 材料与仪器
1.1 材料
消肿凝胶剂提取物，卡波姆940，苦参碱、红花、甘草等对照药材均符合2015版《中国药典》相关规定。
1.2 仪器
硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)，电子天平(余姚市金诺天平仪器有限公司)，ZF-2型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)，KQ2200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，pHs-3C型pH计(上海仪电科学仪器股份有限公司)，800离心机(江苏省金壇市荣华仪器制造有限公司)。
2 处方及制备
2.1 处方
2.2 药物有效成分提取
取处方中的甘草、苦参、红花，分别用煎煮法煎3次，滤液过滤提取有效成分，并将药液过筛浓缩成膏，膏的密度按传统方法测得为1.23 g/mL，生药量为3.26 g/mL，制得消肿凝胶剂。
2.3 凝胶剂的制备工艺
卡波姆浸泡48 h后，加入处方所需剂量的保湿剂、药膏；搅匀；再加入三乙醇胺，对羟基苯甲酸乙酯，加蒸馏水至处方量，搅匀即得褐色粘稠状液体。
3 凝胶剂制备工艺的验证
3.1 验证标准
参考《中国药典》2015版规定，凝胶剂应均匀、细腻，在常温时保持胶状，不干涸或液化。将凝胶剂的成型性、涂展性、稳定性、光泽性、失水率、黏度作为指标，考查凝胶剂的成型情况。
3.2 稳定性[2]
3.2.1 离心实验 提取后的药液，加入浸泡48 h的卡波姆，待浸泡溶胀后，加入处方所需剂量的保湿剂、药膏；搅匀；再加入三乙醇胺，对羟基苯甲酸乙酯，加蒸馏水至处方量，搅匀既得褐色粘稠状液体，通过3 000 r/min，离心30 min，观察凝胶剂的分层、结块及其他外观变化。
3.2.2 低温实验 根据制备工艺制备的凝胶剂放置于冰箱(-20℃)24 h，观察同离心实验。
3.2.3 热恒温试验 所制备的凝胶剂置于55℃水浴锅内6 h，观察同离心实验。
3.3 粘度测定
采用NDJ-1型旋转式粘度计，选择相应的转子、转速，17℃测定凝胶剂粘度。
3.4 失水率测定
将适量的凝胶剂放入培养基中，称其质量，在烘箱中干燥，温度为55℃，每1 h取出放冷，再次称重,直至凝胶剂的质量不再改变为终点。
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3.5 防腐剂实验
将消肿凝胶剂按照千分之一的比例加入防腐剂对羟基苯甲酸乙酯，放置1个月，观察现象。
4 质量标准的检测
4.1 性状
取本品，涂于培养皿，要求培养皿白色透明，可观察本品褐色粘稠状液体，无明显气味，具有良好涂展性。
4.2 pH值
将2 g的凝胶剂加入40 mL的蒸馏水中，超声10 min，待凝胶剂溶解后，用pH酸度计测定pH值[2]。测出pH值，连续测定三批试样，三批试样均符合药典规定标准，在皮肤表面pH值4.5～6.5之间。见表1。
表1 三批样品的pH 值
4.3 定性鉴别
4.3.1 甘草的定性鉴别 100 mL的甲醇中溶10g的凝胶剂，超声30 min后过滤，滤液蒸干，再溶于30 mL的水中，用乙酸乙酯提取两次，蒸干，残渣加甲醇1 mL，为供试品溶液，同法制得阴性对照溶液,取甘草对照药材2 g放入100 mL水中，煎煮30 min后滤过，浓缩至30 mL；吸取三种溶液各5μL,点于1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(17∶1∶1∶1.5)为展开剂，展开，取出晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至105℃，斑点显色清晰，置紫外灯下检视。
4.3.2 苦参的定性鉴别 100 mL的甲醇中溶10 g的凝胶剂，超声30 min过滤，滤液蒸干，再溶于50 mL的水中，加浓氨试液调节pH值，范围为9～10，用30 mL的三氯甲烷萃取两次，蒸干，加甲醇1 mL，为供试品溶液,同法制得阴性对照溶液；取苦参碱，加甲醇制成1 mg/mL对照品溶液;吸取三种溶液各5μL，点于2%氢氧化钠溶液的硅胶 G薄层板上，甲苯-乙酸乙酯-丙酮-浓氨试液(2∶4∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出晾干，再喷以改良的碘化铋钾试液，进行观察。
4.3.3 红花的定性鉴别 100 mL的甲醇中溶10 g的凝胶剂，超声30 min后过滤，滤液蒸干，加水30 mL，用乙酸乙酯萃取两次，用1%氢氧化钠溶液20 mL振摇提取2次，用稀盐酸调节PH值至5，再用乙酸乙酯30 mL振摇提取两次，用无水硫酸钠脱水，蒸干，加乙酸乙酯1 mL溶解，为供试品溶液,同法制得阴性对照溶液,取红花对照药材1 g,加水适量，煎煮1 h，放冷滤过，浓缩至约20 mL；吸取溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(7∶4∶1)为展开剂，展开，取出晾干，置浓氨的瓶口熏30 min后，置紫外灯下检视。
5 结果
5.1 消肿凝胶剂的稳定性试验
依照制备工艺制备的凝胶剂经过离心、低温、热恒温实验，凝胶剂无分层，分布均匀，无杂质，外观变化不明显。
5.2 消肿凝胶剂的黏度测定
测定消肿凝胶制剂的黏度值为100 Pa.s，符合规定。
5.3 消肿凝胶剂的失水率试验
按照制备工艺制备的凝胶剂放入烘箱干燥，温度为55℃，分别测定不加保湿剂与分别加入三种不同保湿剂对凝胶剂制备的影响。见表2。
表2 保湿剂对凝胶剂制备的影响
5.4 防腐剂实验
加入防腐剂的效果良好，无发霉现象。
5.5 pH值的测定
通过pH酸度计测定的pH值，范围为4.5～6.5之间；符合皮肤表面pH值。
5.6 定性鉴别
5.6.1 甘草的定性鉴别 紫外灯下可见，与对照药材相应的位置上，有明显的紫色斑点作为区分，阴性对照药材溶液无荧光斑点，阴性对照无干扰。见图1。
5.6.2 苦参的定性鉴别 日光下观察到与对照药材对应的位置上，有明显的黄色主斑点作为区分，阴性对照药材溶液无荧光斑点，阴性对照无干扰。见图2。
5.6.3 红花的定性鉴别 紫外灯下可见，在与对照药材色谱和供试品相应的位置上，显相同颜色的斑点，有明显的斑点作为区分，阴性对照无干扰。见图3。
图1甘草薄层色谱图图2苦参薄层色谱图图3红花薄层色谱图
1.阴性对照 2.供试品 3.甘草标准品 1.苦参碱 2.供试品 3.阴性对照 1.红花标准品 2.供试品 3.阴性对照
Fig.1TLCofGlycyrrhizaUralensisFig.2TLCDiagramofBitterInfiltrationFig.3SafflowerTLC
6 讨论
消肿凝胶制剂方中以苦参、红花等组成药材为主，具有清热燥湿，活血通经，去瘀止痛等多重功效，有效缓解病痛及其症状。本实验采用恒温干燥失重法，观察不同时期的失水率情况，筛选出较强的保湿剂，虽然有多种选择，失水率接近，但是考虑到价格以及方便的情况下选择以甘油为保湿剂；三乙醇胺在中药外用消肿凝胶制剂中主要是增稠剂和保湿剂，三乙胺在本次制备工艺中选择1.5 g，初步判断加入防腐剂的效果好。在薄层色谱法的结果中，红花、苦参、甘草有明显的区分斑点，可用于中药外用消肿凝胶制剂的定性鉴别，该定性方法灵敏度高、准确度好，重现性好、专属性强。
本次实验初步验证了消肿凝胶制剂制备工艺的质量标准，此制备工艺可保证消肿凝胶制剂的稳定性和含有处方的主要成分。
