益肾安神口服液特征图谱研究

赵源慧，杨喆茗，白 冰，徐 建*，李长惠，王宝成

（1.吉林修正药业新药开发有限公司 吉林省中药标准化关键工程技术重点实验室，长春 130103；2.通药制药集团股份有限公司，吉林 通化 134000）

益肾安神口服液由熟地黄、五味子、巴戟天、枸杞子、远志、山茱萸、续断等16味中药精制而成，具有健脾补肾，养心安神的功效，用于腰膝酸软，夜频尿多，食欲减退，大便稀薄，精疲乏力，失眠健忘者[1-6]。本文采用HPLC方法建立益肾安神口服液的特征图谱， 为全面评价益肾安神口服液的质量提供依据及方法。

1 材料

1.1 仪器 Ultimate 3000高效液相色谱仪7.2工作站（美国戴安公司），BT125D天平（赛多利斯）；KH 5200 E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。

1.2 试药 五味子醇甲对照品（批号：110857-200608）购自中国食品药品检定研究院；甲醇、无水乙醇、磷酸为分析纯；乙腈、甲醇为色谱纯；益肾安神口服液由吉林修正药业、通药制药集团股份有限公司提供，批号为140701、140702、140703、140801、140802、140803、140901、140902、140903、140101。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性 色谱柱Kromasil 100-5 C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相乙腈（A）-水（B），洗脱梯度：0～10 min，5%A～40% A；10～35 min，40% A～70% A；35～60 min，70% A～100% A；流速：1 mL/min；检测波长为210 nm；进样量10 μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1 mL含49.5 μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取益肾安神口服液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 精密度试验 分别精密吸取同一批供试品溶液各10 μL，连续重复进样5次，按2.1项下色谱条件检测，采用中药指纹图谱相似性评价软件对5次测定结果进行计算，其相似度均为0.99以上，以五味子醇甲为参照峰，各共有峰的相对保留时间RSD值为0%～0.08%，结果表明仪器精密度好。

2.5 重复性试验 取同一批次样品（批号：140701）共6份，按2.3项下制备，各精密吸取10 μL，按2.1项下色谱条件检测，6次测定的图谱其相似度均为0.98以上，以五味子醇甲为参照峰，各共有峰的相对保留时间RSD为0%～0.23%。结果表明同一批次的6份供试品特征图谱相似，方法重现性良好，符合特征图谱的要求。

2.6 稳定性试验 取2.5项下同一供试品溶液，分别在0、3、6、9、12、24 h进行检测，获得不同时间进样的供试品色图谱，其相似度RSD为0%～0.42%。结果表明，在24 h内益肾安神口服液的特征图谱基本稳定，符合特征图谱的要求。

2.7 标准特征图谱的建立 取10批样品，按2.3项下制备，各精密吸取10 μL，按2.1项下色谱条件检测，得到10批样品的高效液相色谱图。将10批益肾安神口服液的测试数据导入国家药典委员会《中药指纹图谱相似度评价系统（2004A）》软件进行处理，经多点校正，将谱峰自动匹配，生成共有模式，以五味子醇甲峰作为参照峰S，生成对照图谱。

从以上结果可以看出，10批益肾安神口服液图谱中共有峰的相对保留时间基本一致，RSD均小于2%；10批益肾安神口服液图谱与对照图谱相似度均大于0.85，符合《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求，所建立的益肾安神口服液HPLC对照图谱可作为益肾安神口服液的标准图谱。见表1、表2。

表1 益肾安神口服液10个共有峰的相对保留时间

表2 益肾安神口服液相似度评价

2.8 特征图谱特征峰归属 按照益肾安神口服液标准处方及制法，制备缺熟地黄、五味子、远志、巴戟天、枸杞子、山茱萸、续断等16味药材的阴性样品。分别取上述16种阴性样品，按2.3项下方法制备，按2.1项下色谱条件检测，将生成的阴性样品图谱与益肾安神口服液标准特征图谱进行比较，确定特征峰的归属。经图谱比较，1号峰与8号峰归属为五味子药材；2号峰、3号峰为续断药材；4号峰、6号峰为远志药材；5号峰为小茴香药材；9号峰、10号峰归属为山茱萸药材。

3 小结

本产品为口服液剂型，供试品溶液制备方法考察了甲醇直接溶解及超声处理30 min 2种方式，选择共有特征峰中最高的色谱峰五味子醇甲峰为指标，结果超声处理对测定结果无影响，增加提取时间，测定值也不再增加，为方便操作确定样品提取方法为甲醇直接溶解[7-11]。

本实验探索考察了特征图谱的色谱系统及检测波长。研究中尝试了甲醇-水系统的梯度洗脱，发现色谱峰保留时间不够稳定，色谱图变化较大。乙腈-水系统较稳定，但不同梯度洗脱结果存在较大差异，经反复试验确定本实验所述的流动相梯度分离效果及色谱峰形最佳。检测波长比较了210、245、278、320 nm，发现210 nm 波长处检测特征色谱峰较多，各特征色谱峰相对保留时间稳定，杂质干扰较少，故确定210 nm为检测波长[12-17]。

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