中越进出口水果拟除虫菊酯类农药残留检验分析

2018-03-02凌经昌蒋新英何成伟

农产品加工 2018年4期

谭灵，凌经昌，蒋新英，何成伟

（凭祥出入境检验检疫局，广西凭祥 532600）

拟除虫菊酯是一类仿生合成的杀虫剂，是改变天然除虫菊酯的化学结构衍生的合成酯类，广泛应用于农业生产和日常生活中的一类杀虫剂，具有高效、低毒、广谱的特点，近年来拟除虫菊酯类杀虫剂的中毒事件发生较频繁，已引起人们关注。残留在水果中的拟除虫菊酯类农药对人体健康危害较大，国际食品法典委员会（CAC）、农药残留法典委员会（CCPR），以及欧美国家对拟除虫菊酯类农药的残留限量都有具体要求，我国在GB 2763—2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留量》中也明确对拟除虫菊酯类农药在水果中的最大残留限量要求[1]。凭借中国-东盟自贸区的建成与“一带一路”建设的契机，中越边境贸易水果进出口量呈现迅猛增长势头，2011年以来我国经广西凭祥口岸进出口的水果均超过100×104t，2016年更是超过了200×104t，同比增长超过40%，进出口量占同期我国对东盟水果贸易总量的首位。由于边境贸易具有区域性、民族性、传统性和贸易方式简单、近距离运输等特点，与一般贸易相比，具有多、小、快、杂的特征，疫病疫情、有毒有害物质、不合格商品进出境的风险程度较高。因此，应当建立一种适合中越进出口水果拟除虫菊酯类农药残留的快速检测方法，以适应口岸检验检疫把关的需求[2-4]。用拟除虫菊酯类农药残留快速检测仪筛查水果中拟除虫菊酯类农药，产生阳性结果的样品再通过气相色谱法定性定量，该方法能对中越进出口水果进行拟除虫菊酯类农药残留实施有效检验监管。

1 试验内容

1.1 薄层色谱快速检测法

1.1.1 材料与方法

（1）仪器设备。GDYN-402SD型菊酯类农残快速检测仪，吉大小天鹅公司产品。

（2）试剂。石油醚（60～90℃）、丙酮、正己烷，均为分析纯；试剂盒。

（3）试样。凭祥口岸进出口水果。

1.1.2 测试步骤

（1）试样的制备。取有代表性水果可食部分样品，切成直径1 cm左右小块，然后用组织捣碎机打碎。

（2）试样的提取。称取5.0 g试样放入100 mL塑料样品提取管中，加入石油醚+丙酮（1+1）（以刚好浸没样品为准，约15 mL），用金属搅拌棒搅拌1～2 min，抽滤溶液全部流出后，再用5 mL石油醚+丙酮（1+1）淋洗样品，合并提取溶液于浓缩瓶中，弃去下层溶液，保留上层溶液。

浓缩至近干，加入2 mL石油醚淋洗内壁，倒入净化柱，加入菊酯洗脱试剂，用5 mL浓缩瓶接取净化液，浓缩至近干，加入0.5 mL石油醚淋洗内壁，准备点样。

（3）测试。在层析缸内加入约13 mL菊酯展开剂，盖好上盖，锁死四角。选取一张完整的薄层板，在中间位置5 cm处轻划一铅笔线，放入检测仪的薄层板定位槽内（白色薄层面朝向点样器）。取出7根长度接近一致无破损的毛细管，用镊子夹取1根毛细管，放入装有标准溶液的玻璃瓶中，使溶液充满整个毛细管，然后放在点样器的0号通道内，盖紧玻璃瓶盖，标准溶液上样完毕，样品上样方式同标准溶液，6个样品按顺序从1～6排列，合上点样器的保护板。设置点样温度37℃，点样间隔6 s，启动点样开关，开始点样。将点样后的薄层板放入层析缸内（点样端朝下，白色薄层面朝上），盖好上盖，锁死四角，待溶剂前沿到达薄层板中间标记铅笔线时，取出薄层板，挥干试剂。

1.1.3 结果与判定

将薄层板放进检测仪，启动谱图分析按钮，若检出与标准斑点颜色、位置一致，判断该结果可能含有菊酯类农药，需要进一步进行假阳性排除。取出薄层板，喷洒显色剂，挥干后将薄层板置于检测仪紫外光下照射5～10 min，取出后若斑点颜色与背景一致为假阳性，样品中含有菊酯类农药时斑点呈现蓝色（注：氯菊酯呈现浅黄色斑点）。也可以不喷显色剂，保留薄层板，1 h后再次检测，若发生斑点区域扩大或斑点密度变大，可以直接判定为假阳性。

薄层背景呈绿色，菊酯农药呈灰色或黑色斑点，含量高时斑点变大，颜色变深。每一个阳性结果都需要用气相色谱法进一步定性和定量。

各种菊酯相对位置比较见图1。

图1 各种菊酯相对位置比较

1.2 气相色谱检测法

薄层色谱快速检测法产生阳性结果的样品用气相色谱法定性和定量。

1.2.1 材料与方法

（1）仪器设备。岛津GC-2014型气相色谱仪，配电子捕获检测器（ECD），日本岛津公司产品；TDL-5-1型离心机，上海安亭科学仪器厂产品；LBM-1型氮吹仪，美国产品；RE5299型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂产品。

（2）试剂。4种菊酯类农药标准：甲氰菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯，质量浓度为100 μg/mL，农业部环境保护科研监测所研制；正己烷、丙酮，均为色谱纯；无水硫酸钠，于650℃条件下灼烧4 h，干燥器内冷却至室温，密封备用；弗罗里硅土，于650℃条件下灼烧4 h，使用前于130℃条件下活化4 h，干燥器内冷却至室温，加1%的水脱活，备用；净化柱，200 mm×15 mm（内径）玻璃柱，底部垫约5 mm脱脂棉和约20 mm无水硫酸钠，5 g弗罗里硅土，顶端加约20 mm无水硫酸钠，使用前用30 mL正己烷淋洗；水为二次蒸馏水或去离子水。

（3）试样进出口水果样品。

1.2.2 测试步骤

（1）试样的制备。取可食部分，用组织捣碎机捣碎。

（2）试样的保存。将试样于-18℃以下保存，在制样过程和保存过程中，应防止样品受到污染或发生待测物残留含量的变化。

（3）试样的提取与净化。称取5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入15 mL正己烷-丙酮（1+1）混合溶剂，以转速5 000 r/min均质1 min。加入4 g氯化钠，摇匀，以转速4 000 r/min离心3 min，将上层有机相转移入浓缩瓶中，残渣中再加入15 mL正己烷-丙酮（1+1）混合溶剂，重复提取1次，合并上层有机相，在45℃以下水浴减压浓缩至近干，待净化。

浓缩瓶中残留物用3 mL正己烷溶解洗涤2次，提取液移入净化柱中，弃去流出液，用100 mL正己烷-乙醚（7+3）混合溶剂洗脱，流速为3 mL/min，收集洗脱液，在45℃以下水浴减压浓缩至约1 mL，转移入离心管中，用氮吹仪吹干，加入正己烷溶解并定容至1.0 mL，供气相色谱测定。

需要注意的是进行空白试验及加标回收试验时，除了不加试样和取完试样加标外均按上述步骤进行。

（4）色谱条件。色谱柱：DB-5型石英毛细管柱，30 m×0.25 mm （内径），膜厚0.25 μm，或相当者；柱温：160℃保持10 min，以10℃/min升至230℃保持15 min；载气：氮气，纯度≥99.999%；流速：0.78 mL/min，尾吹气流速60 mL/min；进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；进样方式：不分流进样；进样量：1 μL。

2 结果与讨论

2.1 线性关系和方法检出限

2.1.1 薄层色谱快速检测法

根据仪器对各种农药响应及菊酯类农药在水果中限量的情况，此快速检测方法可以检测联苯菊酯、氟氰戊菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、顺式氰戊菊酯、氟胺氰菊酯共11种菊酯类农药，检出限均为0.5 mg/kg，结合样品的称样量及定容体积，确定以上11种菊酯类农药方法检出限（MDL）均为0.05 mg/kg。

2.1.2 气相色谱法

取适量标准储备液，分别稀释成10，20，50，100，200 μg/L标准溶液，直接进行气相色谱测定，峰面积对浓度作线性回归曲线，计算相关系数。甲氰菊酯线性方程为Y=691.97X+9.245 6，相关系数为0.999 9；氯菊酯线性方程为Y=3 463.4X-14.043，相关系数为0.999 9；氰戊菊酯线性方程为Y=1.31.6X+160.76，相关系数为0.999 9；溴氰菊酯线性方程为Y=1 731.6X+1.355，相关系数为0.999 9，表明4种农药在10～200 μg/L范围内线性关系良好。

根据仪器对各种农药的响应情况，以3倍信噪比确定检出限（LOD），10倍信噪比确定定量限（LOQ），结合样品的称样量及定容体积确定方法检出限（MDL）。甲氰菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯4种菊酯类农药的方法检出限均为10 μg/kg。

2.2 气相色谱法的回收率及精密度

选择新鲜红毛丹、柑橘样品，做加标回收和精密度试验，添加10，20，100 μg/kg 3个不同质量浓度水平，每个水平重复测定5次。同时，做样品空白试验，利用保留时间定性，采用外标法定量，扣除空白后计算加标的回收率。

红毛丹样品回收率及精密度试验见表1，柑橘样品回收率及精密度试验见表2，回收率及精密度试验统计见表3，空白红毛丹样品色谱见图2，空白红毛丹样品添加10 μg/kg混合标样色谱见图3。

表1 红毛丹样品回收率及精密度试验/%

表2 柑橘样品回收率及精密度试验

3结论

边贸进出境水果批量小、批次多，需要快速通关，而使用气相、气质联用等方法检测农药残留检测周期较长，成本也较高，该方法结合口岸特点，建立了一种拟除虫菊酯类农药残留的快速检测方法，产生阳性结果的样品再通过气相色谱法定性定量，该方法较为科学有效地对凭祥出入境口岸进出口水果的拟除虫菊酯类农药残留进行筛查。通过加标试验，用快速检测法产生的阳性样品中，经气相色谱法验证阳性结果的符合率达100%，加标回收率在80.23%～96.24%，精密度也达到要求，说明这是一种能对边贸进出口水果拟除虫菊酯类农药残留实施有效检验监管的方法。