PNPLA3基因多态性与非酒精性脂肪性肝病肝损伤间相关性的系统评价*

魏益国，陈 捷，石明巧，吴晓娟，苏真珍，蔡 蓓

(1.四川大学华西临床医学院，成都 610041；2.四川大学华西医院实验医学科，成都 610041)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是以单纯脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化等进行性肝病的统称，被认为是影响人体健康的一种重要疾病，患者肝细胞内脂质水平增加，引起细胞脂肪变性逐渐发展为纤维化，甚至发展为肝硬化[1]。近年来相关研究表明，遗传因素与NAFLD有密切关联，最新研究发现马铃薯糖蛋白样磷脂酶蛋白 3(PNPLA3 )基因在NAFLD中起到了关键的作用[2]，PNPLA3基因的变异会使肝细胞中的三酰甘油(TG)沉积，导致肝脏发生脂肪变性，严重影响肝脏代谢，进而逐渐发展为肝纤维化、肝硬化[3]。然而，该位点基因多态性是否与NAFLD肝损伤相关还没有达成共识，本文对相关文献进行全面、严格的Meta分析，探讨PNPLA3 rs738409 基因多态性与NAFLD肝损伤的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1文献检索策略 通过四川大学图书馆以“PNPLA3”或者“rs738409”为检索词检索Pub Med、CNKI、Embase、Ovid数据库，搜索有关PNPLA3基因多态性与NAFLD肝损伤的相关文献，未对检索词进行其他限制，同时浏览了相关文献的参考文献来补充可能遗失的文献。检索时限为建库至2017年4月20日，具体检索策略见图1 。

图1 检索策略流程图

1.2纳入标准

1.2.1研究类型 PNPLA3基因多态性与NAFLD肝损伤的横断面研究。

1.2.2暴露因素 PNPLA3 rs738409位点多态性。

1.2.3结局指标 肝脏代谢指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、TG、胆固醇(TC)水平。

1.3排除标准 (1)没有具体基因型数据的文献；(2)合并HIV/HCV等感染；(3)肝纤维化未通过病理活检确诊；(4)研究对象为同一人群的重复文献；(5)研究对象有代谢综合征、糖尿病等干扰本研究的基础疾病的文献。

1.4方法

1.4.1文献筛选 所有纳入文献均首先由2位研究者独立筛选文献、提取资料，然后交叉审核。如遇分歧，则由第3位研究者对分歧内容进行校对审核，判定是否纳入。

1.4.2数据提取 所有纳入文献中的资料由自制提取表提取，包含(1)第一作者，发表年份，国家，受试者的年龄、种族、体质量指数(BMI)、性别；(2)各基因型对应的样本量，相应肝功能指标；(3)是否符合哈-温平衡(HWE)。

1.4.3纳入文献的质量评价 本研究采用Agency for Healthcare Research and Quality (AHRQ)量表作为纳入横断面研究的方法学质量评分标准，共分为6个条目：是否明确了资料的来源；是否给出了人群选择的纳入及排除标准；是否给出了鉴别患者的时间段；研究对象是否连续；纳入的种族是否相同；是否符合HWE。分别作出“是”“否”和“不清楚”的评价，“是”得 1 分，“否”或者“不清楚”得 0 分，评价也是先由2位研究人员独立完成，如遇分歧，则由第3位研究人员进行校对。

1.5统计学处理 本研究采用STATA14.0软件进行分析；计数资料采用比值比(OR) 为效应指标，计量资料采用加权均数差(WMD)为效应指标，各效应量均给出其点估计值和95%CI，以P<0.05为差异有统计学意义；纳入研究结果间的异质性采用χ2检验进行分析(检验水准为α=0.1)，同时结合I2定量判断异质性的大小，若各研究结果间无统计学异质性(I2<50%)，采用固定效应模型进行Meta分析；若各研究结果间存在统计学异质性，则采用随机效应模型进行Meta分析(I2>50%)，对有明显的临床异质性采用亚组分析或敏感性分析等方法进行处理。

2 结 果

2.1纳入文献结果及特点 初筛相关文献 45 篇，其中中文5篇，英文40篇，经过研究人员逐步筛选，最终纳入9篇文献[2-10]。纳入研究的基本特征见表1。

表1 筛选文献基本信息表

2.2Meta分析结果

2.2.1PNPLA3 rs738409 与ALT水平的相关性研究 共纳入9个研究，分析结果显示，PNPLA3 rs738409基因多态性与ALT水平相关(MD=21.661，95%CI：7.818～35.504，P=0.002)。基于年龄的亚组分析结果显示，在青年人中PNPLA3 rs738409基因多态性与ALT水平相关(MD=45.522，95%CI：2.947～88.098，P=0.036)；而在中老年组中该基因位点多态性与ALT水平无相关性(MD=21.661，95%CI：7.818～35.504，P=0.298)。基于人种亚组分析显示，在亚洲人群中PNPLA3基因的多态性与ALT水平相关(MD=35.566，95%CI：10.471～60.662，P=0.005)；但在高加索人群研究中该基因与ALT水平无相关性(MD=3.330，95%CI：-6.660～13.320，P=0.514)。见图2、图3。

2.2.2PNPLA3 rs738409 与AST水平的相关性研究 共纳入7个研究，分析结果显示，PNPLA3 rs738409基因多态性与AST水平相关(MD=13.842，95%CI：3.950～23.735，P=0.006)。基于亚组分析显示，在亚洲人群中，该基因多态性与AST水平相关(MD=22.240，95%CI：2.499～41.981，P=0.027)；但在对高加索人群的分析结果显示，PNPLA3与AST水平无相关性(MD=-0.648，95%CI：-3.515～2.220，P=0.658)。基于年龄分析的结果显示，PNPLA3基因在青年人(MD=30.797，95%CI：-9.956～71.550，P=0.139)与中老年人群(MD=5.739，95%CI：-6.845～18.324，P=0.371)中差异均无统计学意义。见图4、图5。

注：a为青年人群(<50岁) ；b为中老年人群(≥50岁)

图2 PNPLA3 rs738409与ALT水平的相关性年龄亚组分析

注：Asian为亚洲人群；Caucasian为高加索人群

图3 PNPLA3 rs738409与ALT水平的相关性种族亚组分析

注：Asian为亚洲人群；Caucasian为高加索人群

图4 PNPLA3 rs738409与AST水平的相关性种族亚组分析

注：a为青年人群(<50岁)；b为中老年人群(≥50岁)

图5 PNPLA3 rs738409与AST水平的相关性年龄亚组分析

2.2.3PNPLA3 rs738409 与GGT水平的相关性研究 共纳入6个研究，分析结果显示，PNPLA3 rs738409 基因多态性与GGT水平无相关性(MD=-1.057，95%CI：-13.801～11.687，P=0.871)。

2.3PNPLA3 rs738409 与肝细胞脂代谢的相关性

2.3.1PNPLA3 rs738409 与TG水平的相关性研究 共纳入6个研究，分析结果显示，该位点基因多态性与TG水平无相关性(MD=-19.085，95%CI：-38.834～0.665，P=0.058)。

2.3.2PNPLA3 rs738409 与TC水平的相关性研究 共纳入6个研究，分析结果显示，PNPLA3 rs738409基因多态性与TC水平无相关性(MD=-2.793，95%CI：-15.282～9.697，P>0.05)。

2.4敏感性分析 在逐一剔除每一篇原始文献后，Meta分析的结果并未发生方向改变，仅在AST水平研究中在剔除文献[10]时MD、95%CI值稍大于原值，但I2未明显改变，表明Meta结果稳定可靠。

3 讨 论

含patatin样磷脂酶域3，即PNPLA3，位于22 号染色体长臂1区3带3亚带1次亚带，是由3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞过程中的一种非分泌型脂肪因子，所编码的蛋白是由481个氨基酸组成的非分泌蛋白，又称脂肪滋养蛋白，其N端具有高度的保守序列Gly-X-Ser-X-Gly，有非特异性酰基水解酶活性，可促进TG水解，在肝脏组织中水平最高，部分体外试验证实 PNPLA3具有TG水解酶和酰基甘油转酰基酶活性，但体内生物学活性仍不十分清楚。研究表明PNPLA3基因148位点基因变异导致酶的活性中心被掩盖，使PNPLA3失去水解酶活性，从而影响肝脏脂肪细胞功能并直接反映在ALT、AST、TG等指标的明显升高，且G等位基因携带者与C[11]等位基因携带者相比，发生NAFLD的相对危险度升高。

本次研究采用Meta分析的方法探讨基因PNPLA3 rs738409位点的多态性与NAFLD肝细胞损伤及脂代谢水平的相关性，结果显示，PNPLA3 rs738409位点的突变对于肝细胞功能的损伤有着明显相关性，这与 HOTTA等[5]的研究结果保持了一致性。本次研究中ALT和AST水平分别为21.661 IU/L、10.221 IU/L，表明PNPLA3 rs738409位点的多态性与NAFLD肝细胞损伤有相关性。在PNPLA3基因与肝细胞脂代谢研究中得到TG和TC水平分别为0.215、0.072 mmol/L，PNPLA3 rs738409位点与TG水平无相关性，这与TAI等[10]研究的结果不一致，分析可能是因为本次研究纳入的文献较少，研究对象数量不足导致最后得到的结果与所查阅的资料不符。

本研究存在的局限性：(1)全文纳入的文献仅9篇，共涉及34个研究，4 285例患者，样本量小，导致检验效能较低，导致结果与其他研究人员的结论不一致的情况；(2)所纳入的全部文献中，人种分布不平衡，6篇文献的研究对象均为亚洲人，仅3篇是高加索人，因而导致一些研究无法进行人种亚组分析；(3)通过对年龄的亚组分析，异质性虽减小，但依然很高，提示该研究的差异性可能还有其他因素影响；(4)由于所有研究纳入的文献均少于10篇，所以文中并未对纳入的文章进行发表偏移分析，从而可能造成研究结果与真实情况假性相关。

综上所述，PNPLA3 rs738409位点的突变与NAFLD肝细胞功能损伤及脂代谢密切相关，但受限于所纳入研究的文献数量、病例总数、人种分布等影响，以上结论仍需更多的研究加以证实。

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