赤芍总苷制备工艺优化研究

王桂清

摘 要：目的：本文主要对赤芍总苷制备工艺进行优化流程做出详细的分析。方法：本文实验人员主要使用紫外分光光度法及其高效液相色谱法对赤芍总苷制备工艺进行优化工作做出深入研究，并得出相应的结论。结果：实验人员通过在TPG洗脱的时候，使用UV光谱法来对洗脱液里面存在的PAE进行精准的研究，进而收集诸多的洗脱液，将PAE的纯度加以提升，和TLC及其HPLC方法进行对有着较多的优势，例如方法简便、有着较强的灵敏性。结论：本文实验人员主要使用了大孔吸附树脂当作分离手段，并设计相应的正交实验，对溶剂提取、次数等诸多因素进行研究，将PAE当作控制指标进行论述，并采取紫外光谱及其高效液相色谱法进行检测，而且对TPG制备工艺加以完善，进而获得制备TPG最为完善的工艺。

关键词：赤芍总苷；芍药苷；紫外分光光度法；高效液相色谱法；正交设计；大孔吸附树脂

通常情况下，赤芍属于一种常见的中药，主要来自于毛茛科植物芍药亦或是相关川赤芍的干燥根里面。而以往医学认为赤芍这种中药有着较多的作用，例如可以起到散淤止痛的作用，所以在临床中得到了大力的推广。赤芍总苷经过实验人员提取以后大部分为水提亦或是醇提后进行萃取的制备方式，依据相关报道将乙醇提取以后通过采取大孔吸附树脂将白芍总苷分离出来，但是赤芍总苷的制备方式存在较大的差异性，得率之间存在一定的区别。基于此，本文实验人员主要使用了大孔吸附树脂当作分离手段，并设计相应的正交实验，对溶剂提取、次数等诸多因素进行研究，将PAE当作控制指标进行论述，并采取紫外光谱及其高效液相色谱法进行检测，而且对TPG制备工艺加以完善，进而获得制备TPG最为完善的工艺。

1 仪器、药品与试药

1.1 仪器设备

SSI222HPLC仪，SSI525UV/Vis检测器，ANASTARChromatographyDataSystem软件，OV-100Suntek柱温箱，S-GelC18，5μm色谱柱；UV-2401PC紫外分光光度计。

1.2 药材、药品与试剂

甲醇（色谱纯）：批号971111，上海化学试剂研究所；药用95酒精；无水乙醇（分析纯）：批号001201，蚌埠化学试剂厂；芍药苷对照品（含量测定用）：批号0736-20015，中国药品生物制品检定所；纯化水；赤芍饮片。

2 方法与结果

2.1 TPG制备

2.1.1 正交设计。考察提取溶剂乙醇浓度、体积、提取时间、提取次数对TPG得率的影响，每因素设计3水平，因此采用四因素三水平表L9（34）。

2.1.2 选择大孔吸附树脂。取处理好的大孔吸附树脂D101和DA201各100g，分别装入层析柱（3cm×100cm）中备用。乙醇提取的干膏各4.0g，加热水溶解后，滴加入大孔树脂柱，平衡2h，加水洗脱，UV检测是否有PAE洗出。水洗至近无色，再分别用20的乙醇洗脱，以UV定性检测，收集含PAE洗脱液，以HPLC检测PAE含量，减压回收乙醇后，置真空干燥箱干燥（68°C，-0.08MPa）干燥24h，称重。实验重复3次，比较树脂差异。实验表明，大孔吸附树脂DA201与D101两种型号分离TPG无明显差异，用20乙醇作洗脱液洗脱PAE，DA201型洗脱液用量，洗脱时间明显低于D101型，因此选择DA201型。

2.1.3 确定TPG洗脱液。取6份赤芍醇提干膏各4g，水溶，缓慢加入6支DA201MAR柱（已分别编号），平衡2h，水洗，UV定性检测水洗液是否含有PAE至Molisch反应呈阴性且洗脱液澄清，分别改用10，20，40，80，90等不同浓度乙醇洗脱，UV定性检测PAE并确定收集洗脱液体积，以HPLC检测PAE含量，减压回收溶剂，置真空干燥箱（68°C，-0.08MPa）干燥24h，称重，为TPG得率。表4结果表明，洗脱溶剂乙醇浓度在20以上，均有PAE洗脱出，乙醇浓度增高，杂质含量增高，同时发现洗脱液颜色增深。故确定20乙醇为TPG洗脱液。

2.1.3 正交设计提取分离TPG。取赤芍饮片，粉碎成粗粉（过20目筛），加8倍量乙醇，浸渍1h，回流1h，抽滤分离出提取液，提取3次（实际操作按正交表），合并滤液，减压回收溶剂得干膏，以适量水加热溶解后，缓慢加到处理好的树脂柱（干膏和树脂比1∶15）上，平衡2h，先用水洗至还原糖反应成阴性（Molisch反应检测）且洗脱液无色澄清，改用20乙醇洗至PAE量很少（UV检测）。UV定性检测PAE并确定收集含PAE洗脱液，以HPLC测定PAE含量，减压浓缩得浸膏，置真空干燥箱（68°C，-0.08MPa），干燥24h即得。制得TPG性状为淡黄、疏松粉末，味苦。正交实验结果见表1。

表1 正交实验结果

其中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为各因素同水平x总和：Ⅰ=（Ⅰ2+Ⅱ2+Ⅲ2）/3-（∑x）2/9。

对正交实验结果作方差分析，由于A，B，C，D等四因素Ⅰ值相差较大，可将Ⅰ小者合并当作误差（Se）。

2.1.4 TPG优化工艺验证实验

取3份赤芍各100g，按正交优化条件70乙醇，8倍量，1h，3次进行提取，采用DA201大孔吸附树脂进行分离，20乙醇为洗脱溶剂。结果见表2，可见优化结果较为理想。

表2 TPG优化工艺验证实验

3 讨论

3.1 大孔吸附树脂的选用

通常情况下，大孔吸附树脂属于交联聚合物的一种，有着较强的理化行政，无论对无机盐类还是低分子化合物都不会产生一定的影响，作为一类吸附及其筛选性能有机结合起来组成的一种分离材料，在相关领域中已经得到了普遍的认可。由于TPG作为单萜苷类化合物，实验人员需要对洗脱剂为乙醇做好充分的考虑，这个时候实验人员应当选择较弱亦或是非极性树脂比较适宜，利用相关实验对存在的DA201型大孔吸附树脂要比非极性的D101型大孔吸附树脂使用到TPG中较为适合，所得到的PAE含量当作82.2。

3.2 洗脱溶剂的确定

通过相关实验对水及其系列浓度乙醇存在的洗脱效果进行了详细的对比，依据产生的结果可以得知浓度高于20乙醇无法把TPG从相关树脂柱通过洗脱的方式进行分离，而水不会通过TPG的方式从树脂柱上面洗脱出来；倘若乙醇浓度较高的情况下，那么就会很容易通过TPG方法从树脂柱做好洗脱作业，然而杂质含量也在明显的提升。为了进一步提升TPG中PAE纯度实验选择了具有代表性的20乙醇当作相应的洗脱溶剂。依据相关报道可以得知：所含有的乙醇浓度在大于30的时候，那么无法采取TPG方法从树脂柱进行洗脱，和该实验产生的结果存在一定的差异，这种情况的出现可能因为树脂型号有着不同的型号。

3.3 紫外定性检测洗脱液

实验人员通过在TPG洗脱的时候，使用UV光谱法来对洗脱液里面存在的PAE进行精准的研究，进而收集诸多的洗脱液，将PAE的纯度加以提升，和TLC及其HPLC方法进行对有着较多的优势，例如方法简便、有着较强的灵敏性。

3.4 正交设计的采用

所谓正交设计，简单的说是具有诸多因素实验设计的科学手段。和单因素比较法进行详细的比较，为可以对实验里面的规律提供方便，对具有的综合影响进行明确，避免花费较多的实验次数，进而起到节约资金的作用。依据该实验通过采取TPG的方式进行提取，并且选择了四因素三水平正交表，也就是即L9（34）表，能夠在某种程度上达到制备工艺的效果，采取TPG的方法得率是5.6。

参考文献

[1]张虹，柳正良，王洪泉.大孔吸附树脂在药学领域的应用[J].中国医药工业杂志，2001（01）.

[2]马双成，邓少伟.赤芍总苷的生产工艺条件研究[J].中草药，1998（10）.

[3]金继曙，都述虎，种明才.用大孔吸附树脂分离白芍总甙[J].中国中药杂志，1994（01）.