葛根芩连汤激活PPARγ上调脂联素和GLUT4表达改善脂肪胰岛素抵抗

罗新新+朱水兰+李冰涛+史秀明+涂珺

[摘要] 該实验研究复方葛根芩连汤体内外改善脂肪胰岛素抵抗（IR）的药效及相关分子机制。采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型，葛根芩连汤给药干预3个月，检测糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白，计算胰岛素抵抗指数。提取大鼠脂肪组织总RNA，qPCR检测糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、脂联素（ADPN）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）、乙酰辅酶A羧化酶α基因（ACACA）和乙酰辅酶A羧化酶β（ACACB）基因mRNA表达水平。1 μmol·L-1地塞米松诱导建立稳定IR-3T3-L1脂肪细胞模型，CCK-8法检测葛根芩连汤含药血清对细胞活力的影响，采用5%，10%，15%葛根芩连汤含药血清干预24 h检测细胞培养液葡萄糖含量、游离脂肪酸（NEFA）含量和外泌脂联素含量，测定细胞内甘油三酯（TG）含量。荧光定量qPCR和Western blot分别检测IR-3T3-L1细胞PPARγ，ADPN和GLUT4 mRNA和蛋白质表达水平。结果显示葛根芩连汤给药3个月可明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白（P<0.01），下调胰岛素抵抗指数（P<0.05），具有较好的降糖效果。葛根芩连汤可显著升高糖尿病大鼠脂肪组织PPARγ，ADPN，GLUT4，GLUT2，ACACA和ACACB基因mRNA表达水平。5%，10%，15%葛根芩连汤含药血清均可显著性上调IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量（P<0.01）；降低IR-3T3-L1细胞TG含量（P<0.01）；一定程度下调NEFA含量但并不显著。此外，葛根芩连汤含药血清剂量依赖上调外泌ADPN，15%含药血清上调ADPN非常显著 （P<0.01）；各剂量含药血清显著上GLUT4表达（P<0.01）。该研究显示葛根芩连汤激活PPARγ上调ADPN和GLUT4调节糖代谢改善脂肪IR。

[关键词] 葛根芩连汤； 脂肪胰岛素抵抗； 3T3-L1脂肪细胞； 过氧化物酶体增殖物激活受体γ； 脂联素； 葡萄糖转运蛋白4

[Abstract] To investigate the effects of Gegen Qinlian decoction（GQD） in improving adipocytic insulin resistance（IR） and explore its related molecular mechanism. Diabetic rats models were induced by high glucose and high-fat diet with a small dose of streptozotocin， and after GQD treatment for 3 months， blood biochemical indexes such as fasting blood-glucose（FBG）， insulin， glycosylated serum protein（GSP） and HOMA-IRI were detected and assessed. After the total RNA was extracted from the adipose tissue of diabetic SD rats， PPARγ， ADPN， GLUT4， GLUT2， ACACA and ACACB mRNA expression levels were separately detected by qPCR. Then， stable IR-3T3-L1 adipocyte model was built with 1 μmol·L-1dexamethasone. After the cell viability was detected by CCK-8 assay， 5%， 10% and 15% GQD-containing serum（GQD-CS） were respectively used to treat IR-3T-L1 adipocytes for 24 h. The contents of glucose， nonesterified fatty acid（NEFA） and adiponectin in cell culture supernatants were separately detected whereas the intracellular triglyceride（TG） contents of IR-3T3-L1 adipocytes were also measured. The ADPN， PPARγ and GLUT4 mRNA and protein expression levels were respectively detected by qPCR and Western blot in IR-3T3-L1 adipocytes. Results showed that GQD significantly decreased fasting blood glucose， insulin and GSP（P<0.01）， and down-regulated HOMA-IRI（P<0.05） after the high-fat diet/streptozotocin-induced diabetic SD rats were treated for three months， with a good hypoglycemic effect. Moreover， PPARγ， ADPN， GLUT4， GLUT2， ACACA and ACACB mRNA expression levels were significantly elevated in the adipose tissue of GQD-treated diabetic SD rats. The 5%， 10% and 15% GQD-CS significantly increased glucose consumption of IR-3T3-L1 adipocytes at 24 h treatment（P<0.01）， significantly decreased the intracellular TG content （P<0.01）， and down-regulated NEFA to a certain extent but not significantly. Moreover， GQD-CS significantly up-regulated GLUT4 and ADPN expression. The results indicated that GQD could activate PPARγ to ameliorate adipocytic insulin resistance in the diabetic SD rats and IR-3T3-L1 adipocytes.endprint

[Key words] Gegen Qinlian decoction； adipocytic insulin resistance； 3T3-L1 adipocytes； peroxisome proliferators-activated receptor γ； adiponectin； glucose transporter 4

2型糖尿病（T2DM）属于中医“消渴病”范畴，被认为是与脾胃虚损最相关的本虚标实之证[1]。在T2DM中医证型临床研究发现，湿热困脾T2DM患者多源于高脂饮食，在温暖潮湿的南方发病率更高，多伴有胰岛素抵抗（IR），且症状越严重，IR指数越高。血脂代谢紊乱在湿热困脾患者IR发生发展中起着重要的作用[2]。仝小林教授等根据中医“异病同治”思想，运用葛根芩连汤组方于湿热困脾型糖尿病中取得良好的临床疗效，目前积累了大量临床有效案例[3-4]。葛根芩连汤源自汉代名医张仲景的《伤寒论》，始用于治疗急性腹泻，组方符合“胃肠湿热症”的病机，与临床中常见的T2DM“湿热困脾证”病机相似，且方中葛根、黄连、黄芩据古今文献记载均有治消渴的功效。动物实验发现葛根芩连汤可以有效减轻IR治疗糖尿病[5]。考虑到脂肪组织是率先发生IR的部位，对糖尿病发生发展起着重要作用。以往体外研究多集中葛根芩连汤干预肝IR和骨骼肌IR上，迄今为止对于葛根芩连汤改善脂肪IR的体内外效用机制研究较少。本课题组拟在研究糖尿病Sprague Dawley（SD）大鼠脂肪组织基础上结合体外IR-3T3-L1脂肪细胞研究探讨葛根芩连汤调节糖脂代谢改善脂肪IR的分子作用机制。

1 材料

1.1 動物 体内实验SPF级雄性SD大鼠由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，合格证号HNASLKJ20121354。体外实验SPF级雄性SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号11400700119627。

1.2 细胞株 3T3-L1小鼠前脂肪细胞株，购于美国模式培养物收集中心（ATCC），批号62996847。

1.3 药材 葛根（野葛，批号150929，产地河南，江中饮片厂）、炙甘草（批号910018，产地内蒙古，亳州市中信中药饮片厂）、黄连（批号905024，产地四川，江西樟树天齐堂中药饮片有限公司）、黄芩（批号911002，产地北京，亳州市中信中药饮片厂）。药材均符合2015年版《中国药典》一部规定。

1.4 试剂 盐酸二甲双胍片（上海信谊药厂有限公司，批号100916）；链脲佐菌素（Sigma公司，批号08/2013）；3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX，Sigma公司，批号15879）；地塞米松（Sigma公司，批号822A0521）；胰岛素（Sigma分装，批号Y0001717）；罗格列酮（Sigma公司，批号R2408）；葡萄糖测定试剂盒、甘油三脂（triglyceride，TG）测定试剂盒和游离脂肪酸（nonesterified fatty acid，NEFA）测定试剂盒（南京建成生物有限公司，批号分别为20160509，20160531，21060704）；糖化血清蛋白（glycosylated serum protein，GSP）酶联免疫分析试剂盒（美国TSZ，批号201302）；RNeasy liquid tissue Mini Kit（Qiagen公司，批号74804）；mirVanaTMmiRNA Isolation Kit（Ambion公司，批号1406120）；TRIzol Reagent（Life technologies公司，批号87806）；GoScriptTM Reverse Transcription System （Promega Corporation公司，批号0000120448）；Power SYBR Green PCR Master Mix （Life technologies公司，批号1509007）；Nuclease-Free water（Promega Corporation公司，批号#0000070302）；脂联素（adiponectin，ADPN） ELISA Kit （Invitrogen公司，批号V24037929）；M-PERTM Mammalian Protein Extraction Reagent（Pierce 公司，批号#QL226664）；β-肌动蛋白（β-actin）抗体（Cell Signaling Technology公司，批号#4970）；过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptor γ，PPARγ）抗体（Cell Signaling Technology公司，批号#2435）；ADPN抗体（Cell Signaling Technology公司，批号#2789）；葡萄糖转运蛋白2（glucose transporter 2，GLUT2）抗体（Abcam公司，批号#ab921599）；葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter 4，GLUT4）抗体（Invitrogen公司，批号#RD2186733）；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗（Invitrogen公司，批号#RB230194）；HaltTMProtease and Phosphatase Inhibitor Cocktail（Thermo Scientific公司，批号#PK207574）；PVDF膜（美国Millipore公司，批号#KIMA4925DK）；30%丙烯酰胺（Bio-Rad公司，批号#161-0156）；TEMED（Bio-Rad公司，批号#161-0800）；脱脂奶粉（BD公司，批号4143846）；ClarityTM Western ECL Substrate（Bio-Rad公司，批号#102030693）。endprint

1.5 仪器 色谱柱Shim-pack XR-ODSⅢ（2.0 mm×7.5 mm，1.6 μm，Shimadzu HPLC packed column）；三重四级杆质谱仪ABQ-TRAP5500；倒置显微镜（Olymplus CKX41）；台式高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司，型号Centrifuge 5424R）；全波长酶标仪（Spectra Max Plus384，Molecular Devices）；电泳仪、垂直电泳槽（Bio-Rad）；化学发光凝胶成像仪（Bio-Rad）。

2 方法

2.1 糖尿病SD大鼠的制备及分组给药 选用120～150 g SD雄性大鼠，无菌洁净（SPF）环境适应性饲养1周后，随机取10只作为正常对照组，喂以普通饲料，其他大鼠高脂饲料喂养4周。禁食12 h后称重，按25 mL·kg-1尾静脉一次注射柠檬酸缓冲溶液新鲜配制的链脲佐菌素诱导糖尿病SD大鼠模型，正常对照组注射同等剂量的柠檬酸缓冲溶液。造模成功的判断标准：各大鼠均于注射72 h和1周后尾尖取血测空腹血糖（FBG），2次血糖值均大于11.1 mmol·L-1，结合大鼠的饮水量和尿量等症状判定为造模成功。

将造模成功的大鼠以FBG为因素，随机分成3组，分别为模型组、阳性二甲双胍组、葛根芩连汤组，每组10只。正常组和糖尿病模型组给予等体积的生理盐水；阳性药组给药盐酸二甲双胍200 mL·kg-1；参考973合作团队仝小林教授在大规模随机双盲临床实验数据[4]，葛根芩连汤组根据大鼠体质量按11.75 mL·kg-1灌胃给药。连续给药3个月，正常对照组大鼠喂养普通饲料，其余各组继续喂以高脂饲料。每日称体质量调整给药量。实验结束后用苯巴比妥鈉麻醉，解剖处死，取血样和脂肪组织。用生理盐水冲洗组织表面残留血液并用滤纸吸干，再用锡箔纸包裹，贴好标签放入液氮灌中，并在-80 ℃冰箱保存待测。血清样本采用全自动生化分析仪检测FBG，胰岛素，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IRI）；ELISA试剂盒检测GSP。

2.2 糖尿病SD大鼠脂肪组织qPCR检测mRNA表达水平 采用Qiagen公司的RNeasy liquid tissue Mini Kit 分离提取脂肪组织总RNA，Nanodrop 2000核酸蛋白测定仪检测A260/A280和A260/A230，1%琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性。采用符合质控标准脂肪组织总RNA样本4～5 μg于20 μL逆转录反应体系，Oligo（dT）和随机引物进行双引物提高逆转录效率，GoScriptTM Reverse Transcription System合成cDNA。通过ABI公司提供软件Primer Premier 5.0进行β-actin，PPARγ，ADPN，GLUT4，GLUT2，乙酰辅酶A羧化酶α基因（ACACA）和乙酰辅酶A羧化酶β（ACACB）基因qPCR引物设计，引物分别针对不同的外显子，β-actin作为内参基因。大鼠qPCR引物序列见表1。所有qPCR引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

2.3 IR-3T3-L1脂肪细胞模型建立 参照本课题组已建立的3T3-L1前脂肪细胞培养及诱导分化成脂肪细胞方法，采用IBMX，DEX和胰岛素进行联合诱导，诱导分化8～12 d后，90%以上呈典型的“戒环状”脂肪细胞运用于后续实验[6]。1 μmol·L-1DEX诱导3T3-L1脂肪细胞96 h，采用葡萄糖氧化酶法检测细胞外液葡萄糖含量，计算得出葡萄糖消耗量，确认IR-3T3-L1细胞模型建立。

2.4 分组及给药24 h葡萄糖含量检测及细胞活力检测 本课题组制备葛根芩连汤水提液（1 g·mL-1），UPLC-MS检测葛根芩连汤含药血清中多个有效成分进行质控，具体详见已发表文章[7]。复制2.3项中的模型，分为正常组，IR模型组，10 μmol·L-1罗格列酮组，5%，10%，15%葛根芩连汤含药血清组。除15%葛根芩连汤含药血清组，其余组均补足正常大鼠血清到15%。给药干预24 h后，每组加 上10 μL CCK-8测定液孵育45 min，酶标仪检测450 nm吸光度来计算细胞存活率。细胞存活率=IR组A450/对照组A450×100%。葡萄糖氧化酶法检测其上清液中葡萄糖含量[8]。

2.5 IR-3T3-L1细胞内TG含量检测、细胞外液NEFA和ADPN含量检测 TG测定盒测定细胞内TG含量，同时用BCA法蛋白定量试剂盒测定总蛋白浓度，对胞内TG数值进行校正，所得数值为TG浓度与细胞总蛋白浓度的比值，单位用mmol·μg-1表示。细胞外液中游离脂肪酸的检测根据NEFA测定试剂盒说明操作。ELISA试剂盒检测细胞外液中ADPN含量。

2.6 实时荧光定量PCR技术测定脂肪IR-3T3-L1细胞PPARγ，ADPN和GLUT4 mRNA水平 采用mirVanaTMmiRNA Isolation Kit分离3T3-L1脂肪细胞总RNA，其余步骤基本同2.2项。引物序列参见本课题组已发表文献[8]，β-actin作为内参基因。qPCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

2.7 Western blot检测IR-3T3-L1细胞PPARγ，ADPN和GLUT4蛋白表达影响 参照M-PERTMMammalian Protein Extraction Reagent使用说明，将培养基弃去加入蛋白裂解液覆盖细胞表面，涡旋15 s，冰上10 min，重复4次保证膜裂解完全，4 ℃离心，14 000 r·min-1，15 min后取上清；BCA法测定蛋白浓度。取各组蛋白样品40 μg，10%SDS-PAGE凝胶分离蛋白，湿转法（280 mA，1 h）将蛋白质转移至0.2 μm PVDF膜上，根据一抗说明书推荐加入5%脱脂奶粉或5%BSA的TBST封闭1 h，加入一抗蛋白4 ℃过夜，1×TBST洗PVDF膜4次，每次5～10 min；加入辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗蛋白1 h，充分洗涤后，加入Bio-Rad公司的ClarityTMWestern ECL Substrate，放入化学发光凝胶成像仪检测，采用Image Lab软件分析。endprint

2.8 统计学处理 所有数据以±s表示，SPSS 17.0软件进行组间差异比较，用单因素方差分析（One-way AVONA）及组间数据比较（与模型组相比）采用t检验分析，由Graphpad prism 6.0统计软件完成并做图。P<0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 葛根芩连汤降低糖尿病大鼠FBG和胰岛素含量改善HOMA-IRI 给药前糖尿病组大鼠采用高糖高脂饲料喂养，体质量明显高于普通饲料喂养的正常组大鼠。随着糖尿病进程加重，糖尿病大鼠体质量不断减轻。给药3个月后，与正常SD大鼠体质量（583.00±42.54） g相比，糖尿病大鼠（374.17±67.88）g明显消瘦，体质量减轻，而二甲双胍组（636.6±64.47） g和葛根芩连汤组（677±60.26） g均较为稳定。与正常大鼠相比，模型组SD大鼠FBG显著升高；与糖尿病组相比，葛根芩连汤组和二甲双胍组均显著降低FBG和胰岛素含量，下调HOMA-IRI，并降低GSP含量（P<0.01），见图1。

实验结果显示葛根芩连汤具有明显稳定降糖药效，可以增加胰岛素敏感性改善IR。

3.2 葛根芩连汤上调PPARγ，ADPN，GLUT4，GLUT2，ACACA和ACACB基因mRNA表达水平 与正常组相比，模型组大鼠PPARγ，ADPN，GLUT4，GLUT2，ACACA和ACACB基因mRNA表达水平显著下降；与模型组相比，葛根芩连汤组大鼠明显上调PPARγ，ADPN，GLUT4，GLUT2，ACACA和ACACB基因mRNA表达水平，见图2。

3.3 葛根芩连汤含药血清对IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量及细胞活力的影响 与正常组相比，IR模型组葡萄糖消耗量明显低于其他组；与IR模型组相比，给药干预24 h后，5%，10%，15%葛根芩连汤含药血清均明顯上调IR脂肪细胞葡萄糖消耗量（P<0.01）。各组细胞在A450处的吸光度变化不大，无统计学意义，表明各剂量含药血清对IR-3T3-L1 细胞活力无显著影响，见表2。

3.4 葛根芩连汤含药血清对IR-3T3-L1细胞外液NEFA和ADPN含量及细胞内TG含量的影响 与正常组相比，IR-3T-L1细胞TG含量明显升高（P<

3.5 葛根芩连汤含药血清上调IR-3T3-L1 脂肪细胞ADPN，PPARγ和GLUT4 mRNA表达水平 与IR模型组相比，各剂量葛根芩连汤含药血清及阳性药罗格列酮均上调ADPN，PPARγ和GLUT4 mRNA表达且差异显著（P<0.01）。各剂量葛根芩连汤组细胞ADPN与PPARγ mRNA表达变化趋势一致，而GLUT4 mRNA表达呈现剂量降低趋势，见图3。

3.6 葛根芩连汤上调IR-3T3-L1 脂肪细胞ADPN，PPARγ和GLUT4 蛋白表达水平 与IR模型组相比，给药组均上调ADPN和GLUT4蛋白表达且差异显著（P<0.01）。葛根芩连汤剂量依赖性激活PPARγ蛋白表达，但10%，15%葛根芩连汤组显著上调PPARγ表达（P<0.01），见图4。

4 讨论

历代医家多数认为糖尿病的中医病机是阴虚为本，燥热为标。整理2004—2014年中国知网文献发现出现频率最高的3个临床治疗糖尿病方剂是黄连解毒汤、补阳还五汤和葛根芩连汤等，而六味地黄丸是国外研究最多的降糖中药方剂，这些常见治疗糖尿病及其并发症方剂多为滋阴补阳或清热燥湿方剂。西医认为高血糖是诱发糖尿病并发症导致病人死亡的最直接因素，在临床治疗中强调快速降糖；中医认为血糖高只是消渴病的表象之一，充其量为“标”，而各个腑脏间机能紊乱失调则谓之“本”，中药降糖方剂更注重调节人体脏腑机能，降糖作用温和稳定，有着一定的竞争优势[9]。因此从机体整体角度出发，以当前中医实践经验为基础，研究方剂治疗糖尿病的作用机制具有重要理论和现实意义。

从单纯降糖角度来说，清热燥湿方剂降糖效果 优于滋阴补阳方剂。葛根芩连汤作为经典的清热燥湿方剂，在调节糖脂代谢改善IR治疗糖尿病方面具有很大的应用潜力[10-11]。临床研究发现中高剂量葛根芩连汤显著降低T2DM患者FBG、餐后2 h血糖和糖化血红蛋白，具有一定的剂量依赖性，高剂量葛根芩连汤有效增强胰岛素敏感指数；揭示葛根芩连汤能改善T2DM患者IR[3]。考虑脂肪细胞功能紊乱（脂肪因子分泌或表达）是引起全身系统性IR的重要诱因[12]，深入研究葛根芩连汤增强脂肪胰岛素敏感性的作用机制可为临床用药提供理论依据和用药指导。实验结果显示葛根芩连汤可显著降低糖尿病SD大鼠的FBG和胰岛素含量，与李颖萌等[13]结果一致。葛根芩连汤降低HOMA-IRI，增强胰岛素敏感性。本实验发现葛根芩连汤显著降低GSP，基于GSP是可有效反映患者过去2～3周内血糖控制水平的中期评价指标，提示葛根芩连汤具有相对稳定的降糖效果。

针对体外脂肪IR细胞研究，本课题组采用复方体外研究中较为公认的血清药理学方法进行[14]。考虑到3T3-L1脂肪细胞广泛用于脂肪IR机制研究中，在优化建立IR-3T3-L1脂肪细胞模型的基础上进行葛根芩连汤含药血清干预实验。研究发现含药血清含量低于20%不影响IR-3T3-L1细胞活力，不影响药效实验有效性，因而采用5%，10%，15% 3个剂量葛根芩连汤含药血清干预IR-3T3-L1脂肪细胞，结果显示葛根芩连汤含药血清组均能显著提高IR-3T3-L1细胞葡萄糖消耗量和降低胞内TG含量。众所周知，肥胖型糖尿病患者体内脂解增加，血清中长期的NEFA浓度升高有抑制肌肉葡萄糖氧化和转运、抑制肝糖原合成、脂肪异位沉积，影响胰岛素的分泌和信号转导和促进β细胞的凋亡等作用。调节机体的脂解，防止NEFA的过度外溢是维持机体能量代谢平衡来防治IR的重要手段。本实验中葛根芩连汤含药血清可降低IR-3T3-L1细胞外泌NEFA，虽然未达到统计学上的显著水平，可能是由于缺乏体内累积效应。本课题组以往研究显示葛根含药血清能增加IR-3T3-L1细胞葡萄糖消耗量和降低TG，与配伍实验中发现葛根芩连汤降糖方中主药是葛根的结论是相吻合的[8]。葛根芩连汤作用于IR-3T3-L1细胞降糖作用可持续稳定至48 h，与单方葛根相比，降糖时间持续更长，降糖效果更佳。葛根芩连汤多种成分如黄酮类（葛根素、大豆苷元、黄芩素和黄芩苷）、生物碱类（小檗碱和药根碱）、萜类（甘草苷和甘草素）等化合物，可调节糖脂代谢改善胰岛素信号转导通路。即使葛根、黄芩和甘草在煎煮中降低黄连成分的含量，并不意味着葛根芩连汤复方配伍后药效会降低。复方药效取决于有效成分的协同作用，推测复方葛根芩连汤多药效成分协同调控来获得比单药及单成分更稳定持久的降糖效果，显示复方配伍的合理性[15]。endprint

从分子层面看，PPARγ作为脂肪组织中唯一高丰度表达的核受体，可调节脂肪细胞因子和炎症因子分泌增加胰岛素敏感性。ADPN是PPARγ基因直接调控的脂肪分泌因子，作为反映胰岛素敏感性的重要生物标志物[6]。许多天然产物可以通过PPARγ激活胰岛素信号转导通路增加GLUT4转位及上调GLUT4基因表达来改善IR[16]。本研究发现葛根芩连汤大鼠明显上调PPARγ基因mRNA表达水平，也显著升高ADPN和GLUT4基因mRNA表达水平。除此之外，研究还发现葛根芩连汤显著升高GLUT2，ACACA和ACACB基因mRNA表达水平。ACACA和ACACB是脂肪酸代谢限速酶乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的2个亚型，ACACA主要在细胞质中催化长链脂肪酸合成，ACACB主要在线粒体膜上催化脂肪酸氧化[17]。葛根芩连汤干预糖尿病大鼠脂肪组织中ACACA和ACACB表达升高表明脂肪组织中脂合成和分解代谢增强，与PPARγ激动剂罗格列酮明显增强ACACA表达不同，ACACA和ACACB同时表达上调可能有利于葛根芩连汤激活PPARγ增强胰岛素敏感性同时减轻脂肪合成带来明显肥胖的副作用。葛根芩连汤含药血清增加ADPN外泌，有助于脂肪细胞的胰岛素敏感性，提示其可在体内分泌入血远端调控肝细胞和骨骼肌细胞胰岛素敏感性。体外研究也观察到葛根芩连汤组中小脂肪细胞数目增多，可能由于PPARγ可促进脂肪组织分化，使大脂肪细胞数量减少，增多对胰岛素更敏感的小脂肪细胞数目来改善IR。

根据体内外研究结果，推测葛根芩连汤激活PPARγ促进脂肪分化，上调GLUT4增加葡萄糖摄取和上调ADPN增强脂肪胰岛素敏感性改善胰岛素降糖信号通路，增强脂肪外泌ADPN来远端调控肝脏和骨骼肌。作者拟在此基础上重点研究以PPARγ为调控中心的葛根芩连汤效用网络机制，深入研究复方及主药效成分的协同作用，为临床治疗糖尿病提供理论基础和用药依据。

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[责任编辑 张宁宁]endprint