血小板直方图在血小板计数中的应用

刘春都

（南京市浦口医院检验科，江苏 南京 210031）

血小板具有重要的止、凝血功能，而本身又容易聚集粘附和变型，甚至退变、崩解，使得识别困难[1]。特别是仪器法阻抗原理检测血小板数时，更难以准确计数。本文通过研究Sysmex XT-4000i提供的血小板直方图及相关参数，并将计数结果与目视法做对比，分析影响血小板直方图的因素。

1 材料与方法

1.1 仪器

Sysmex XT-4000i血细胞分析仪；Olympus双目显微镜。

1.2 试剂

Sysmex XT-4000i血细胞分析仪原装全套试剂以及高、中、低三种室内质控品；草酸铵溶血试剂按《全国临床检验操作规程》配制[2]EDTA-k2真空管。

1.3 标本

本院2017年4.1～4.30每天随机50份标本，共计1500份。

1.4 方法

每位患者迅速、顺利静脉采血2毫升入EDTA-k2真空管，并立即充分混匀。

（1）在30分钟内通过Sysmex XT-4000i血细胞分析仪进行检测，得到血小板直方图及其参数。

（2）准确吸取20 ul血液加到0.38 ml草酸铵稀释液中，充分混匀后冲池进行人工目视计数，由本室技术熟练的检验人员重复计数三次，取其平均值作为本实验的参考值。

（3）将每份标本制作一张血涂片，经瑞氏染色后，显微镜观察血小板的分布、形态、大小、聚集情况等。

1.5 统计学方法

数据采用EpiData软件进行双录入，SPSS 17.0分析，t检验。

2 结 果

将1500例标本分类如表1。

表1 样本分类（±s）

表1 样本分类（±s）

直方图形态血小板分组例数仪器法（×109/L）目视法（×109/L）tP＜100×109/L25285±1488±151.845＞0.05正常直方图组（1123例）100～300×109/L694192±23184±241.414＞0.05＞300×109/L177369±29358±271.543＞0.05大血小板组44147±21195±242.647＜0.01小血小板组43241±26234±221.812＞0.05血小板聚集组11674±15185±279.476＜0.01 EDTA-PTCP现象组3564±13154±187.684＜0.01异常直方图组（377例）血小板卫星现象262±18193±2212.574＜0.01小红细胞干扰组62258±31157±199.745＜0.01红细胞溶血、碎片组35261±28160±219.963＜0.01其它干扰组40213±24151±208.119＜0.01

3 讨 论

（1）血小板直方图正常组。Sysmex XT-4000i血细胞分析仪在2--20 fl范围内分析血小板，直方图在25--30 fl之间与横坐标重合，它是一条偏左分布的光滑曲线。由表1可知1123例血小板直方图正常的标本中，无论血小板＜100、100～300还是＞300×109/L，两者差异均无显著性（P＞0.05），说明若直方图形态正常，无论血小板数升高还是降低，两者的结果相符。但据报道[3]，输注脂肪乳后，仪器法血小板数升高，但直方图形态正常。对一些特殊情况，需要多与临床联系，掌握病史、检查、治疗情况等，综合分析，才能给患者一个准确的结果，这是我们的职责。

（2）血小板聚集直方图,当血小板聚集时，血小板直方图曲线右侧抬高呈拖尾状，不与横坐标重合。从表1可知，两者差异有极显著性（P＜0.01）。常见于技术性血液采集不顺，血液混匀不充分，机体血液处于高凝状态等。镜检时可见有多少不一的聚集成堆的血小板，对技术性原因引起标本凝集的，需要重新正确采集，并迅速混匀，30分钟内仪器法检测。

（3）巨大血小板直方图[4]，血小板直方图右侧右移，在＞30fl处与横坐标重合，MPV明显增大，常常大于12 fl，这时染色镜检，可见血小板大小不均明显[5]，巨大的血小板直径可以达到20～50 nm以上，如ITP、粒细胞白血病等。由表1可知，巨大血小板组仪器法与目视法相比，结果差异有极显著意义（P＜0.01），仪器法结果低。

（4）EDTA依赖性假性血小板减少（EDTAPTCP）组，血小板直方图曲线峰降低，曲线右侧抬高，与轻度血小板聚集组直方图相似，镜检可见许多血小板聚集在一起。其[6-7]机理据报道是由EDTA诱导血小板表面结构使血小板之间形成免疫复合物而聚集在一起，当仪器计数血小板时，将血小板聚集体当成一个血小板或红细胞导致计数假性减少。当更换抗凝剂如用枸橼酸盐时，可以纠正EDTA-PTCP现象发生。

（5）血小板卫星现象，在观察的1500例标本中，共发现了2例血小板卫星现象，从表1可知，仪器法计数与目视法相比结果有显著性差异（P＜0.01），从上面图1e可知，它的直方图和血小板聚集直方图相似。通过染色镜检可见血小板围绕在白细胞周围，形似卫星一样，有的血小板已被白细胞吞噬。当通过仪器法计数时，由于仪器设计原理的局限，使得血小板数量假性减少减少。

（6）小红细胞干扰组的血小板直方图，血小板直方图右侧有一鸟翼样上翘峰，不与横坐标重合。从表1可知，两者的差异极显著性（P＜0.01），仪器法的结果偏高，这是由于仪器设计的原因，血小板和红细胞计数在同一通道内，通过体积的大小来将它们人为的分开而达到各自计数的目的[8]，当红细胞＜25 fl时，仪器就将红细胞误认为血小板，导致计数偏高。

（7）小血小板直方图,血小板直方图曲线光滑，但右侧左移，在＜20 fl处与横坐标重合。从表1可知，小血小板直方图仪器法与目视法相比较，差异无显著性（P＞0.05），正常血小板直方图是偏左的偏态分布的光滑曲线，小型血小板所占的比例占33%～47%[9]。从血涂片染色镜检可看到，小型血小板的比例升高，见于脾功能亢进，某些病毒感染等。

（8）红细胞溶血、红细胞碎片干扰组,此组直方图曲线峰右移，右侧延长于横坐标重叠。由表1可知，二者的差异极显著性（P＜0.01），仪器将一些溶血的、破碎的红细胞碎片当成血小板而计数，使得结果偏高。

（9）其它干扰组。此组血小板直方图形态不规则，与正常直方图有很大的区别。由表1可知，两者极显著的差异（P＜0.01）。由镜检可见血小板的分布与形态基本正常，分析认为待检测的血液里面有细菌、真菌、免疫复合物等，干扰了正常血小板的计数，使得仪器法的结果偏高。

综上所述，当用仪器法计数时[10]，易受到各种因素的干扰而出现错误的值。但由于操作简单快速，可以成批检测，精密度、效率高等优点，以致在检验科广泛应用。可以通过血小板直方图的形态，简单快速的了解测得的值是否正确，达到初筛的作用。当血小板直方图的形态正常时，仪器法测得的值往往正确的，对一些特殊情况，可以通过了解病人的情况加以纠正。对于血小板直方图异常者，一定要目视法计数，有时还需涂片染色镜检来综合判断，才可以得出正确的数。

[1] 熊立凡,刘成玉.临床检验基础[M].6版.北京:人民卫生出版社.2012:125.

[2] 叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:157.

[3] 钱 敏,等.患者输入脂肪乳后的血小板计数准确性的探讨[J].临床检验杂志,2001,19(4):251-253.

[4] 熊立凡,刘成玉.临床检验基础[M].6版.北京:人民卫生出版社,2012:113.

[5] 王兆钺,施菊妹,韩 悦,等.具有异常结构的巨大血小板的自发性聚集[J].中华血液学杂志,2002,23:123-125.

[6] ChaeH,Kim M,LimJ,etal,Novel method to dissociate Palete Clumps in EDTA-dependent pseudothom bocytopenia based on the Pathophysiological mechanism[J].Clin Chen Lab Med,2012,50(8):1389-1391.

[7] 宓庆梅,施巍宇,郝婉莹,等.EDTA依赖性假性血小板减少症一例[J].中华检验医学杂志,2004,77(10):719.

[8] 陆奎英,黄国平.血小板直方图在血小板计数中的应用探讨[J].适用医技杂志,2005,12(7):1772.

[9] 熊立凡,刘成玉.临床检验基础[M].6版.北京:人民卫生出版社,2012:101.

[10] 戴 隽.血小板检测的影响因素探讨[J].中华医药杂志,2016,6(1):122.