北青龙衣乙酸乙酯部位化学成分研究

周媛媛，宋红娟，郭爽，张晓娟，付蕾，付起凤

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

北青龙衣，为胡桃科(Juglandaceae)胡桃属(Juglans)植物胡桃楸(JulansmandshuricaMaxim)的未成熟的青色外果皮，味苦、涩，性平，有毒，具有清热解毒、消肿止痒等功效[1]，古时常用于治疗皮肤瘙痒、水痢不止、痈肿疮毒等，民间常泡酒用于止痛且效果显著，现代临床应用将北青龙衣用于食管癌、胃癌、肺癌等，获得明显的治疗效果[2]。近年来，国内外学者对北青龙衣的化学成分进行了大量的研究，从中发现了萘醌类、三萜类、黄酮类、酚酸类等多种类型化学成分[3-5]。为了进一步挖掘北青龙衣的药效物质基础，寻找有效的先导化合物，本实验针对性地对北青龙衣乙酸乙酯部位进行了化学研究，共分离得到7种化合物，分别鉴定为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯 (1)，反式-3-羟基- 4-甲氧基肉桂酸 (2)，4-(1-羟基-1-甲基乙基)苯甲酸 (3)，3,5-二羟基-1,4-萘醌 (4)，4(R)-5-羟基-4-乙氧基-β-四氢萘酮(5)，4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮 (6)，异阿魏酸甲酯 (7)，其中1～3，7为首次从胡桃属中分离获得。

1 仪器与材料

Bruker-400型超导核磁共振光谱仪(美国BRUKER)；Q-Tof(ESI)高分辨质谱仪(美国Waters)；515-2414制备型高效液相色谱仪(美国Waters 公司)；Sephadex LH-20(英国 Amersham Pharmacia Biotech公司)；柱色谱硅胶 (200～300目，青岛海洋化工厂)；反相ODS(日本YMC)，其他试剂均为分析纯。

北青龙衣采自黑龙江省牡丹江地区，经黑龙江中医药大学药用植物学教研室苏连杰教授鉴定为胡桃楸(JuglandmandshuricaMaxim)的青果皮。标本(20160806)保存于黑龙江中医药大学药学院中药化学教研室。

2 提取分离

将干燥粉碎的北青龙衣药材8.0 kg，用95%乙醇冷浸提取3次，减压回收溶剂，得浸膏671 g。将浸膏加适量水分散后用乙酸乙酯反复萃取，萃取液减压浓缩，得到乙酸乙酯部位117 g。乙酸乙酯部位经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇(1:0～0:1)进行梯度洗脱，共得到Fr.1～10，其中Fr.2再经正相硅胶柱反复洗脱，得到化合物4(5.5 mg)，5(7.2 mg)；Fr.4经正相硅胶柱洗脱后再经半制备型HPLC得到化合物6(6.7 mg)，Fr.5经反复正相硅胶柱洗脱结合Sephadex LH-20凝胶柱纯化得到化合物7(5.2 mg)，Fr.6经正相硅胶柱色谱分离，再经过反相ODS柱处理后结合制备型HPLC，依次得到化合物1(5.2 mg)，化合物2(6.6 mg)和化合物3(3.9 mg)。

3 结构鉴定

3.1 化合物1

白色无定形粉末(MeOH)。ESI-MS m/z：389 [M-H]-，推测分子量为390。1H-NMR(CD3OD，400 MHz) δ: 0.93(12H，m，H-11，11′，13，13′)，1.36(1H，12H，m，H-8，9，10，8′，9′，10′)，1.44(4H，m，H-12，12′)，1.69(2H，m，H-7，7′)，4.24(4H，dq，J=16.8，7.2 Hz，H-6，6′)，7.63(2H，dd，J=6.4，2.8 Hz，H-1，1′)，7.72(2H，dd，J=6.4，2.8 Hz，H-2，2′)。13C-NMR(CD3OD，100 MHz)：11.9(C-13，13′)，14.8(C-11，11′)，24.5(C-10，10′)，25.6(C-12，12′)，30.6(C-9，9′)，32.2(C-8，8′)，40.2(C-7，7′)，69.6(C-6，6′)，130.2(C-2，2′)，132.5(C-1，1′)，134.1(C-3，3′)，170.3(C-4，4′)。经与文献对照[6]，鉴定化合物1为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯。

3.2 化合物2

无色针状结晶(MeOH)。ESI-MS m/z：195[M+H]+，推测分子量为194。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ: 3.88(3H，s，4-OCH3)，6.35(1H，d，J=16.2 Hz，H-8)，6.79(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，7.05(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6)，7.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.54(1H，d，J=16.2 Hz，H-7)。13C-NMR(CD3OD，100MHz)：56.5(4-OCH3)，111.7(C-2)，115.5(C-5)，116.4(C-8)，123.3(C-6)，126.2(C-1)，146.7(C-7)，149.6(C-3)，150.3(C-4)，168.2(-COOH)。经与文献对照[7]，鉴定化合物2为反式-3-羟基- 4-甲氧基肉桂酸。

3.3 化合物3

棕色无定形粉末(MeOH)， ESI-MS m/z：179 [M-H]-，推测分子量为180。1H-NMR(CD3OD，400 MHz) δ: 1.52(6H，s，7-CH3)，7.56(2H，d，J=8.2 Hz，H-3，5)，7.95(2H，d，J=8.2 Hz，H-2，6)。13C-NMR(CD3OD，100 MHz)：31.9(8-CH3)，73.4(C-8)，125.5(C-3，5)，130.1(C-1)，130.5(C-2，6)，155.8(C-4)，170.3(C-7)。经与文献对照[8]，鉴定化合物3为4-(1-羟基-1-甲基乙基)苯甲酸。

3.4 化合物4

淡黄色粉末(CH2Cl2)，ESI-MS m/z：191[M+H]+，推测分子量为190。1H-NMR(CDCl3，400 MHz) δ: 6.14(1H，s，H-2)，7.26(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)，7.43(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，7.66(1H，t，J=7.8 Hz，H-7)，12.02(1H，s，3-OH)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)：82.0(C-5)，113.3(C-4)，119.4(C-2)，120.4(C-10)，125.2(C-8)，136.8(C-3)，137.3(C-9)，162.1(C-7)，163.5(C-1)，188.8(C-6)。经与文献对照[9]，鉴定化合物4为3,5-二羟基-1,4-萘醌。

3.5 化合物5

白色粉末(CH2Cl2)，ESI-MS m/z：207[M+H]+，推测分子量为206。1H-NMR(CDCl3，400 MHz) δ: 1.23(3H，t，J=7.0 Hz，H-12)，3.63(1H，q，J=7.0 Hz，H-11a)，3.85(1H，q，J=7.0 Hz，H-11b)，7.07(1H，dd，J=1.1，7.9 Hz，H-6)，7.26(1H，t，J=7.9 Hz，H-7)，7.45(1H，dd，J=1.1，7.9 Hz，H-8)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)：15.5(C-12)，28.0(C-3)，35.9(C-2)，63.6(C-11)，76.0(C-4)，119.2(C-8)，122.4(C-6)，126.8(C-10)，129.3(C-7)，132.1(C-9)，156.0(C-5)，196.5(C-1)。经与文献对照[10]，鉴定化合物5为4(R)-5-羟基-4-乙氧基-β-四氢萘酮。

3.6 化合物6

褐色膏状物(MeOH)，ESI-MS m/z：201[M+Na]+，推测分子量为178。1H-NMR(CD3OD，400 MHz) δ:2.22(2H，m，H-3a)，2.24 (2H，m，H-3b)，2.52 (2H，m，H-2a)，2.95 (2H，m，H-2b)，5.29 (1H，t，J=4.4 Hz，H-4)，7.06 (1H，dd，J=1.2，8.0 Hz，H-6)，7.25 (1H，t, J=7.8 Hz，H-7)，7.45 (1H，dd，J=1.0，7.8 Hz，H-8)。13C-NMR(CD3OD，100 MHz) δ:31.8 (C-3)，34.6 (C-2)，63.4 (C-4)，118.6(C-8)，122.0 (C-6)，130.0(C-7)，131.9(C-10)，133.8(C-9)，157.3 (C-5)，200.5 (C-1)。经与文献对照[11]，鉴定化合物6为4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮。

3.7 化合物7

白色无定形粉末(MeOH)，ESI-MS m/z：209[M+H]+，推测分子量为208。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz) δ:3.66(3H，s，-OCH3)，4.24(3H，s，4-OCH3)，6.31(1H，d，J=16.4 Hz，H-8)，6.78(1H，dd，J=8.8，2.1 Hz，H-6)，7.02(1H，d，J=2.1 Hz，H-2)，7.04(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.50 (1H，d，J=16.4 Hz，H-7)。13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：51.7(-OCH3)，60.1(4-OCH3)，114.2(C-2)，115.0(C-5)，117.1(C-8)，121.3(C-4)，122.1(C-3)，145.9(C-7)，148.5 (C-1)，150.5(C-6)，167.2(C-9)。经与文献对照[12]，鉴定化合物7为异阿魏酸甲酯。