高效液相色谱法在蔬菜农药残留检测中的应用

2018-01-18周迎春姜太玲熊贤坤刘光华

农产品加工 2018年8期

周迎春，姜太玲，熊贤坤，刘光华

（云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所，云南保山 678000）

0 引言

高效液相色谱法（High pressure liquid chromatography，HPLC）是在原有的液相柱层析基础上，引入气相色谱理论，并加以改进和发展起来的。该方法不仅分离速度快、检测效率高，而且自动化程度达到了气相色谱法的水平，同时又保持了液相色谱法对试样适用范围广、流动相改变灵活性大和便于大量制备的优点。高效液相色谱法由于兼备液相和气相2种色谱分析方法的优点，近年来在食品检测上得以应用并飞速发展。

农药残留（Pesticide residue）是指在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬菜、果品、畜产品、水产品，以及土壤和水体中的现象。近年来，随着人们生活水平的提高，蔬菜消费量逐年增加，已成为一个潜在的巨大商业市场，菜农为了追求经济利益，大量使用高毒、高残留的农药等，这就造成了蔬菜中普遍存在农药残留超标的现象。目前，有机磷、有机氯农药在我国的研究已经有了很大进展，这2类农药在蔬菜中已经受到了很大程度的限制。但在蔬菜中仍然有其他农药的存在，如氨基甲酸酯类、烟碱类、氟虫腈等农药。综述了HPLC对蔬菜中以上几类农药残留的检测，以期能为以后的研究提供技术指导。

1 氨基甲酸酯类农药

氨基甲酸酯类农药自20世纪60年代以来进入高速发展时期，属于植物源杀虫剂。该类农药是以甲酸酯为前体化合物发展而来的农药，具有分解快、残留期短、低毒、高效和选择性强的特点，主要用于粮食、蔬菜和水果等农产品。近年来，随着氨基甲酸酯类农药在蔬菜栽培中的大量使用，容易导致在蔬菜中的残留，给蔬菜生产带来了新的质量问题。关于食品中氨基甲酸酯类农药残留量的分析国内外均有报道，检测方法主要有气相色谱法（GC）[1]、气相色谱-质谱法（GC-MS）[2]、高效液相色谱-质谱法（LC-MS）[3]等。这些方法各有优缺点，由于氨基甲酸酯类化合物极性强、热稳定性较差，使用GC或GC-MS检测时常需采用特殊的技术或手段以达到准确测定的目的，方法复杂[4]。HPLC检测氨基甲酸酯类农药残留具有选择性强、灵敏度高、重现性好等优点。

龚久平等人[5]在现有标准基础上，改变定容溶液和流动相溶剂梯度的时间和比例，采用带荧光检测器（FLD）和柱后衍生系统的高效液相色谱仪对蔬菜中氨基甲酸酯类农药进行测定，用外标法定量分析，标准曲线的相关系数为0.998 5～0.999 4，平均回收率为93.6%～100.9%，保留时间提前8.5 min。该方法分析快速、分离效果好、回收率与灵敏度高，是一种理想的农药残留检测方法。邵金良等人[6]建立了固相萃取-高效液相色谱柱后衍生荧光检测蔬菜中8种氨基甲酸酯类农药残留的分析方法。8种农药在0.1～1.0 mg/L的质量浓度范围内线性良好，相关系数为0.999 43～0.999 92，检出限为 0.008～0.010 mg/kg。此方法适用于大白菜、辣椒、茄子中氨基甲酸酯类农药残留的检测。胡建英等人[7]用高效液相色谱-柱后衍生、荧光光度法，采用柱温42℃，氨基甲酸酯类农药分析专用柱，以梯度淋洗流动相分离，最终得出了7种氨基甲酸酯类农药方法的定量限为0.003 mg/kg，线性范围0.005～1.000 mg/L，相关系数均在0.999以上，回收率67%～95%。该方法灵敏度高、重现性好、检测限低，完全能够满足不同品种蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留量的检测。

2 烟碱类农药

烟碱类农药是一类新型高效、低毒、内吸性强、残效期长、残留量低的广谱性杀虫剂，在市场上占有很高的份额，年销售额达到60亿欧元，居于所有杀虫剂首位，目前在世界农药市场的销售量超过了氨基甲酸酯类。烟碱类农药包括吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺及烯啶虫胺等,其中吡虫啉具有高效、低毒、广谱、内吸性强、持效期长等特点，是世界上销售量最大的杀虫剂品种。啶虫脒（Ac-etamipyrid）则是烟碱类广谱杀虫剂的代表。多种农药残留的同时测定多采用气相色谱-质谱（GC-MC）法和高效液相色谱-质谱（HPLCMC）法。而热不稳定、强极性和难挥发的农药（如吡虫啉）则不适宜用GC-MC分析。

侯如燕等人[8]将样品采用乙腈提取，经固相萃取柱净化，使用反相高效液相色谱-二极管阵列检测器检测。在黄瓜空白基质中0.1～1.0 mg/kg的加标质量浓度范围内，吡虫啉、啶虫脒2种农药的回收率为50.8%～108.9%，相对标准偏差（RSD）小于15%，该方法可满足蔬菜中烟碱类农药多残留分析的要求。兰珊珊等人[9]通过乙腈提取，LC-NH2柱净化，C18柱分离，梯度洗脱，检测波长275 nm，吡虫啉、啶虫脒2种农药的线性关系在0.2～10.0 mg/L质量浓度范围内良好，检出限在0.01～0.04 mg/kg，平均加标回收率在80.1%～103.7%，相对标准偏差（RSD）在0.17%～7.80%。该方法具有快速、灵敏、准确、重现性较好的特点，适合于日常大批量样品的测定。张雪辉等人[10]建立了一种氨基小柱固相萃取，高效液相色谱-紫外检测器检测蔬菜中吡虫啉农药残留的方法，柱温30.0℃，检测波长275 nm，流动相：甲醇∶水∶乙腈=55∶25∶20（体积比），流速0.8 mL/min，进样量10 μL。吡虫啉在0.1～1.0 mg/L的添加范围内线性良好，线性关系系数（R2）为0.992 5。

3 氟虫腈农药

氟虫腈（又名氟草烟）是一种新型苯基吡唑类高效、广谱杀虫剂，具有胃毒、触杀和一定的内吸作用，用于防治蔬菜等多种作物害虫。近年来，欧盟、日本等国家和地区对氟虫腈提出了残留检测要求，多采用GC和GC-MS法对氟虫腈进行分析。这些方法需要进行甲酯化衍生，需严格控制酯化时间和酯化温度；而采用高效液相色谱法则有简便、准确的优点。

房超等人[11]使样品以丙酮振荡提取，通过调节试液至不同pH值对目标物进行净化和分离，以石油醚去除杂质，二氯甲烷萃取浓缩后用HPLC测定。试验表明，在蔬菜样品中添加0.05～0.20 mg/kg氟虫腈回收率分别在73.8%～89.5%，相对标准偏差为1.57%～14.4%（n=5），氟虫腈在样品中的定量限为0.045 mg/kg。张云升等人[12]使用紫外检测器、Hypersil ODS2柱，以乙腈+甲醇+水为流动相（体积比为30∶40∶30），对氟虫腈的分析可取得满意的效果。该法线性范围是0.02～0.60 mg/mL，最低检测限为8.0×10-8mg/mL。

4 结语

综上所述，HPLC是吸纳了经典液相色谱法和气相色谱法的优点进行改进和发展起来的现代分析方法，以其分辨率、灵敏度及定量精度高等特点，已广泛地用于蔬菜中农药残留的检测。所有试验均表明，在农药残留检测中，高效液相色谱法是一种高效能、高灵敏度、高准确度、操作简便的分析方法。随着技术的不断完善和发展，高效液相色谱必将在食品检测与分析领域有更广阔的发展。

参考文献：

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[5]龚久平，李燕，洪云菊，等.高效液相色谱法测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留方法优化 [J].西南农业报，2009，22 （5）：1 332-1 335.

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[7]胡建英，杨绯，高贵桃，等.高效液相色谱－柱后衍生荧光光度法测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药的残留量 [J].宁夏医学杂志，2012，34（7）：623-627.

[8]侯如燕，蔡荟梅，张正竹，等.液相色谱法检测水果蔬菜中的烟碱类农药残留 [J].分析试验室，2012，29（2）：59-63.

[9]兰珊珊，刘宏程，黎其万，等.高效液相色谱法同时测定蔬菜和水果中8种农药残留 [J].分析科学学报，2011，27（2）：171-174.

[10]张雪辉，杜雨倩，徐芳，等.高效液相色谱法检测蔬菜中的吡虫啉残留 [J].现代食品技，2012，28（4）：466-468.

[11]房超，易海华，倪忠，等.高效液相色谱法测定蔬菜中氟草烟残留 [J].广州化工，2010，38（12）：194-195.