以水杨苷和CCP为参照的蜂胶中杨树胶检测方法分析

□ 马 巍 长春市食品药品检验中心

蜂胶有润肤生肌、消炎止痛的功效，可治疗胃溃疡、口腔溃疡、烧烫伤、皮肤裂痛及防辐射等病症[1]。在我国，杨树和其杂交属的芽苞分泌物是蜂胶的主要植物来源。杨树胶与杨树型蜂胶提取物在感官和理化指标上非常相似，而杨树胶的价格却只是蜂胶的1/3。在利益驱使下，蜂胶市场上以杨树胶冒充蜂胶或在蜂胶中掺杂杨树胶（杨树芽提取物）的现象肆意横行。目前，我国尚无严格鉴别蜂胶与杨树胶的行业或产品标准，使得质量监管部门及蜂产品企业无法通过有效监管及控制来确保蜂胶的生产与流通。因此，目前我国蜂胶业最急迫的任务就是高效、准确鉴别蜂胶质量及真伪。

1 方法原理

在采集并加工蜂胶时，蜂蜜中的腺体分泌物可能导致某些原始树脂中的成分发生改变，致使蜂胶与植物源分泌的树脂的成分有所不同[2]。有研究发现，蜂胶中含有β-葡萄糖苷酶活力，且蜜蜂在采集蜂胶、蜂巢内传递蜂胶时能够水解酚苷[3]。酚苷的基本结构单元是更高级的水杨酸盐类衍生物的主要降解产物之一的水杨苷[4]。水杨苷稳定存在于杨树胶中，因此可作为蜂胶与杨树胶的鉴别指标。此外，CCP作为特征性成分仅存在于杨树胶中而蜂胶中不含有。因此，蜂胶中杨树胶的确定可通过是否含有水杨苷或CCP来进行判定。

2 分析条件的优化

2.1 优化提取条件

通过正交实验来优化杨树芽中水杨苷提取条件，优化程度包括乙醇浓度、超声提取时间、料液比、提取次数等4个因素。正交实验下超声提取2g杨树芽，合并、蒸干滤液，与甲醇混合至50mL溶液，过0.45 μm滤膜，进行HPLC分析。

2.2 样本制备

因蜂胶中内含50%左右树脂，也就是说，蜂胶中提取的树脂部分就相当于杨树胶。按照2.1的优化条件，反复3次用75%乙醇超声将2g杨树芽、2g杨树叶、2g蜂胶按照15∶1进行30min提取。挥去多余乙醇至溶液达50mL，过0.45 μm滤膜，进行HPLC分析。

2.3 色谱条件的可行性

2.3.1 考察线性范围

以10mg水杨苷作对照，与甲醇混合成10mL溶液后，再用甲醇稀释6个不同浓度的溶液作为对照，采取线性回归，纵坐标为峰面积，横坐标为对照品质量浓度（mg/mL）。

2.3.2 检测限（LOD）和定量限（LOQ）

连续稀释制备好的水杨苷标准溶液至所需浓度后，进行HPLC分析，记录峰面积，计算检测限（LOD）和定量限（LOQ），确定LOD为1.3 μg/mL，LOQ为5.4 μg/mL。LOD、LOQ值都不高，说明本方法可定性、定量检测水杨苷。

2.3.3 稳定性试验

在0、3、6、9、12、24h时，对同一杨树芽样品溶液进样后，测得水杨苷色谱峰的相对保留时间的RSD为0.97%，确定样品24h相对稳定。在1、2、3d内，重复测定同一份杨树芽样品溶液，测得水杨苷色谱峰的相对保留时间的RSD为2.94%，说明样品日间相对稳定。

2.3.4 回收率试验

选取9份杨树芽样品，精准测取容量，按高、中、低浓度水平3份为一组，加入水杨苷对照溶液，吹干，提取，测定，计算出回收率大于90%。

2.3.5 重复性试验

以同一批杨树芽为对象，选取其中5份，称量后，通过优化条件制备及测量样品后，得出水杨苷的峰面积为 684.76±10.498，RSD=1.531；保 留 时 间（12.608±0.008）min，RSD=0.070%，说明本方法重复性好。

3 验证结果

第一，不同树种、不同组织部位的杨树中的水杨苷含量存在差异；同一种杨树芽中水杨苷含量显著高于叶子中的含量。第二，杨树胶样本中均可检测到水杨苷，但样本件水杨苷含量差异较大。第三，不同地点、不同时间采集的蜂胶样本中均未检测到水杨苷。

4 结果判定

本检测的水杨苷、CCP是杨树胶中含有而蜂胶中不含有的物质。所以，若待测样品未测到水杨苷、CCP色谱峰，该样品则不为杨树胶样品。按照我国情况，定性依据为水杨苷定量限，若待测样品中水杨苷检测浓度在0.25mg/g以下，则表明未检出杨树胶。若待测样品中未检测到水杨苷而检测到CCP，经质谱法验证后确定为CCP的则为杨树胶样品。