乌洛托品中甲醛的定量分析

李雪慧 丁现帅

(陕西汉江药业集团股份有限公司，陕西 汉中 723000)

乌洛托品，一种治疗细菌性尿路感染用的药物。乌洛托品本身无抗菌作用。口服吸收后经肾排出，在酸性尿液中会分解为氨和甲醛，后者能有效地抑制G-细菌，特别是对大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)有强大的抗菌作用。乌洛托品的合成过程，甲醛(37%水溶液)和过量的氨水，在38 ℃反应3 h。反应结束后，经澄清，过滤，膜式蒸发(压力9.806～9.866 kPa)两次，浓缩液冷却结晶，过滤，在150 ℃下干燥得成品。其中合成乌洛托品的主要原料甲醛为基因毒性物质和致癌物。依据欧洲药物管理局(EMA)和美国食品药品管理局(FDA)相继颁布了基因毒性物质研究相关技术指导原则，要求单个结构不相关的基因毒性杂质TTC为1.5 μg/d，乌洛托品最大日服用剂量为1 g，按照TTC和最大服用剂量计算出氯化苄限度应为≤1.5×10-6。

图1 乌洛托品反应路线图Fig 1 Synthetic route of Urotropine

1研究方案

参考HJ 601-2011《甲醛的测定，乙酰丙酮分光光度法》，配制一系列不同浓度的甲醛标准溶液，测定其吸光度，建立吸光度和甲醛浓度的标准曲线。

准确称取10 g乌洛托品加入115 mL的纯化水，然后常压蒸馏，蒸馏至100mL停止蒸馏，测定蒸馏出的水样的吸光度，然后把吸光度的值带入标准曲线方程，得到样品中甲醛的浓度，依据公式计算样品中甲醛的含量。

2实验部分

2.1 仪器

EV300 UV-Visible Spectrophotometer

2.2 溶液的配制

2.2.1甲醛标准溶液的配制

甲醛标准储备液S配制：吸取2.8 mL甲醛溶液(内含甲醛36%～38%)，用水稀释至1000 mL，摇匀。此溶液每毫升含1mg甲醛。

甲醛标准储备液S1配制：精密吸取1.0 mL甲醛标准 储备液S1至100 mL容量瓶中，并用水稀释至刻度(浓度10μg/mL)。

甲醛空白溶液：吸取甲醛标准储备液S1 0 mL用水稀释至25 mL；

甲醛标准溶液1：吸取甲醛标准储备液S1 0.5 mL至100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。(浓度为0.05μg/mL)

甲醛标准溶液2：吸取甲醛标准储备液S1 0.5 mL至25 mL容量瓶中,用水稀释至刻度。(浓度为0.2μg/mL)；

甲醛标准溶液3：吸取甲醛标准储备液S1 1 mL至25 mL容量瓶中,用水稀释至刻度。(浓度为0.4μg/mL)；

甲醛标准溶液4：吸取甲醛标准储备液S1 3 mL至25 mL容量瓶中,用水稀释至刻度。(浓度为1.2μg/mL)；

甲醛标准溶液5：吸取甲醛标准储备液S1 5 mL至25 mL容量瓶中,用水稀释至刻度。(浓度为2.0μg/mL)；

甲醛标准溶液6：吸取甲醛标准储备液S1 8 mL至25 mL容量瓶中,用水稀释至刻度。(浓度为3.2μg/mL)；

2.2.2乙酰丙酮溶液配制

将50 g乙酸铵、6 mL 冰乙酸及0.5 mL 乙酰丙酮试剂溶于100 mL 水中。

2.2.3测试溶液配制

准确称取乌洛托品样品10 g于蒸馏瓶中，加入115 mL纯化水，常压蒸馏，蒸馏出100 mL溶液后停止蒸馏。

2.3 标准曲线的建立

溶液显色：上述溶液分别加入2.5 mL乙酰丙酮溶液，摇匀。于60 ℃水浴中加热15 min，取出放置至常温。用紫外分光光度计在414 nm处，以甲醛空白溶液为参比测量吸光度。

以测得扣除空白溶液的标准溶液的吸光度为纵坐标，以标准液溶液的甲醛浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。

y=ax+b

式中：

y---标准溶液的校正吸光度；

x---标准溶液的甲醛浓度，μg/mL；

2.4 样品溶液的吸光度测定

同法测定样品溶液的吸光度。

2.5 样品溶液中甲醛含量的计算

式中： X—样品中甲醛含量，×10-6；

C—标准曲线上计算的甲醛对应浓度，μg/mL；

V—蒸馏液总体积， mL；

m—样品称样量， g；

3研究数据

3.1 甲醛标准曲线

表1 甲醛浓度和吸光度关系Table 1 Formaldehyde concentration and absorbance

图2 标准曲线Fig 2 Standard curve

3.2 乌洛托品样品中甲醛的检测结果

表2 样品吸光度和甲醛含量Tab.2 Sample absorbance and formaldehyde content

4研究结论

通过以上研究，6批乌洛托品样品中甲醛均小于0.5×10-6。应用本方法测定药品或化工原料中的甲醛含量需要满足以下2个条件：(1)被测物品沸点高于150 ℃；(2)被测物品的悬浊液在100 ℃蒸馏时，被测物不与水、甲醛反应，不会衍生化。

[1] HJ 601-2011 水质 甲醛的测定 乙酰丙酮分光光度法