CXCL13在结节性胃炎患儿胃黏膜中的表达及意义

陈 颖 张明荣 练 敏 潘 健 刘志峰 李 玫 林 谦 林 琼

1.南京医科大学附属儿童医院消化科（江苏南京 210000）；2.兰州大学第一医院儿科

（甘肃兰州 730000）；3.南京医科大学附属无锡市儿童医院消化科（江苏南京 214000）

CXCL13在结节性胃炎患儿胃黏膜中的表达及意义

陈 颖1张明荣2练 敏1潘 健1刘志峰1李 玫1林 谦1林 琼3

1.南京医科大学附属儿童医院消化科（江苏南京 210000）；2.兰州大学第一医院儿科

（甘肃兰州 730000）；3.南京医科大学附属无锡市儿童医院消化科（江苏南京 214000）

目的 探讨超化因子CXCL13在结节性胃炎患儿胃黏膜中的表达及意义。方法 选择临床诊断胃炎并行胃镜检查的216例患儿为研究对象，根据其内镜下是否存在结节性改变分为结节组和非结节组，评估研究对象胃黏膜组织病理学特点及CXCL13/CXCR5在胃黏膜中表达情况。结果 结节组（n=102）与非结节组（n=114）胃黏膜中幽门螺杆菌（HP）感染率分别为70.59%和42.11%，中重度单核细胞浸润比例为74.51%和22.81%，中性粒细胞浸润比例为62.75%和33.33%，淋巴滤泡发生率为64.71%和20.18%，两组间差异均有统计学意义（P＜0.001）。所有HP感染者胃黏膜中均可见CXCL13、CXCR5阳性染色。结节组胃黏膜中CXCL13、CXCR5阳性细胞百分比为（71.33±7.14）%和（73.54±7.92）%，高于非结节组的（45.88±5.92）%和（50.42±5.98）%，差异均有统计学意义（P＜0.001）。结论 儿童结节性胃炎主要与HP感染有关，CXCL13/CXCR5在Hp感染患儿胃黏膜中表达增加，尤其在结节性胃炎中，可能参与了胃黏膜中淋巴样组织形成。

结节性胃炎； 幽门螺杆菌； CXCL13； CXCR5； 儿童

结节性胃炎是一种特殊类型的慢性胃炎，主要与幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）感染有关，在儿童中更为常见[1-3]。有研究报道，结节性胃炎在组织病理学上以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润及伴有生发中心的淋巴滤泡增生为特征，这种淋巴样组织被称为异位淋巴组织[1-6]。趋化因子是一类对白细胞等多种细胞具有趋化作用的细胞因子，参与多种病理生理过程。近来研究发现，超化因子CXCL13及其受体CXCR5不仅在多种慢性感染及自身免疫性疾病患者异位淋巴组织中表达增加，同时在胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤中CXCL13表达也显著增高[4,7,8]。本研究旨在探讨儿童结节性胃炎的病理学特征及CXCL13/CXCR5在HP感染后胃黏膜异位淋巴组织形成中的可能作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2013年9月至2016年9月南京医科大学附属南京儿童医院诊断为胃炎的216例患儿为研究对象。入选标准：①年龄4～16岁；②均为首诊患儿；③所有患儿均经胃镜检查确诊为急、慢性浅表性胃炎。排除标准：已行抑酸、抗HP治疗，胃镜下表现为溃疡、息肉等非急慢性浅表性胃炎者。研究对象根据内镜下是否存在结节性改变分为结节组和非结节组。

本研究得到南京医科大学附属儿童医院医学伦理委员会批准，并经患儿家属知情同意。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集 包括研究对象的性别、年龄、临床表现、胃镜检查结果等资料。

1.2.2 胃镜检查及HP诊断标准 采用Olympus GIFXQ260型电子胃镜行常规胃镜检查，于胃窦小弯侧距幽门环5 cm内结节性改变处取活检组织3、4块，分别行组织石蜡包埋、mRNA提取。将HP组织学染色阳性加上快速尿素酶试验阳性定义为HP感染。

1.2.3 组织病理学检查 根据新悉尼法[9]对胃炎进行分类及分级评估，包括HP感染、单核细胞浸润、中性粒细胞浸润、萎缩、肠化、淋巴滤泡等组织学改变。

1.2.4 免疫组织化学检测CXCL13、CXCR5表达

将石蜡包埋组织连续切片后进行脱蜡、水化，3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，磷酸盐缓冲盐水缓冲液（PBS）冲洗，微波炉内行抗原修复，滴加山羊血清封闭液，一抗后4 ℃过夜，二抗、三抗室温各孵育30 min，正置显微镜下DAB显色2 min，复染，脱水，透明，封片镜检。采用半定量法分别判断CXCL13、CXCR5阳性结果。先于100倍光镜下选择免疫染色浓集的区域观察5个视野，然后在400倍视野下计数每个视野100个细胞，最后取5个视野中阳性细胞平均百分数作为每张切片的结果。当阳性细胞百分比＞10%时，判定为阳性，反之为阴性。

1.3 统计学分析

应用SPSS 17.0统计软件对图像分析的数据进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析；非正态分布计量资料以中位数（四分位数范围）表示，组间比较采用秩和检验。计数资料以百分比表示，组间比较采用χ2检验。单向有序计数资料组间比较采用秩和检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床资料及内镜下特征

216例患儿均以消化道症状就诊。结节组102例，男62例、女40例，年龄4～16岁，平均（10.14±2.40）岁；非结节组114例，男67例、女47例，年龄4～15岁，平均（10.08±1.97）岁。结节与非结节组性别（χ2=0.09）及年龄（t=0.11）差异均无统计学意义（P＞0.05）。

102例结节组患儿内镜下以胃窦部结节性改变为主者68例，以胃体部结节性改变为主14例，胃窦胃体均为结节性改变20例；114例非结节性胃炎中，内镜下均诊断为急、慢性浅表性胃炎。

2.2 胃黏膜组织病理学检查结果

102例结节组的胃黏膜病理检查多呈慢性非萎缩性胃炎（94/102，92.16%），其中中重度单核细胞浸润占74.51%（76/102），中性粒细胞浸润62.75%（64/102），淋巴滤泡发生率为64.71%（66/102），HP感染率为70.59%（72/102）。114例非结节组的胃黏膜病理检查呈慢性非萎缩性胃炎占68.42%（78/114），其中中重度单核细胞浸润占22.81%（26/114），中性粒细胞浸润占33.33%（38/114），淋巴滤泡发生率为20.18%（23/114），HP感染率为42.11%（48/114）。非结节组中重度单核细胞浸润、中性粒细胞浸润、淋巴滤泡发生率及HP感染率均低于结节组（χ2=17.69～57.74，P＜0.001）。

HP定植量级别、炎症程度、活动程度及滤泡检出率在结节组与非结节组间差异均有统计学意义（P＜0.05，表1）。所有患儿胃黏膜中均未发现肠化生及萎缩性胃炎改变。

HP感染患儿中结节性胃炎组重度HP定植者占50%（36/72），高于非结节性胃炎组（16/48，33.33%），但差异无统计学意义（χ2=3.26，P= 0.071）；而结节性胃炎组病理检查示中、重度单核细胞浸润者占86.11%（62/72），高于非结节性胃炎组（45.83%，22/48），差异有统计学意义（χ2=22.25，P＜0.001）；结节性胃炎组存在中性粒细胞浸润占77.78%（56/72），高于非结节性胃炎组（54.17%，26/48），差异有统计学意义（χ2=7.42，P=0.007）；结节性胃炎组淋巴滤泡发生率为77.78%（56/72），高于非结节性胃炎组（45.83%，22/48），差异有统计学意义（χ2=12.92，P＜0.001）。HP感染者中，结节组与非结节组在HP定植量级别、炎症程度、活动程度及滤泡检出率间差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 胃黏膜病理学特征与结节性胃炎关系(n)

2.3 胃黏膜中CXCL13、CXCR5蛋白表达所有HP感染者胃黏膜中均可见CXCL13、CXCR5阳性染色。非HP感染结节组患儿胃黏膜内CXCL13、CXCR染色阳性率分别为40.0%（12/30）、46.7%（14/30），而非HP感染非结节组患儿胃黏膜内均未见两者阳性染色。CXCL13阳性染色主要在淋巴滤泡内密集分布（图A），CXCR5阳性染色主要分布在淋巴滤泡外套区（图B），两者在淋巴滤泡外固有层间质中亦可见（图C、D）。

图1 胃黏膜中CXCL13、CXCR5蛋白表达（×200）

结节组HP感染患儿胃黏膜中CXCL13、CXCR5阳性细胞百分比为（71.33±7.14）%和（73.54±7.92）%，高于非结节组的（45.88±5.92）%和（50.42±5.98）%，差异均有统计学意义（F=208.84、147.93，P＜0.001）；HP感染患儿胃黏膜中CXCL13阳性细胞和CXCR5阳性细胞百分比呈显著正相关（r=0.58，P＜0.001）。

2.4 胃黏膜中CXCL13阳性细胞百分比与其组织病理特点相关性

结节组HP感染患儿胃黏膜中CXCL13阳性细胞百分比与HP定植程度、单核细胞浸润及中性粒细胞浸润程度呈显著正相关（r=0.410～0.667，P均＜0.001）。

3 讨论

结节性胃炎是胃黏膜病变内镜下的描述，主要表现为以胃窦部为主的结节样或颗粒样改变，在儿童中更为常见，据报道儿童结节性胃炎中HP检出率为30%～100%[10-15]。本研究中结节性胃炎患儿HP检出率为70.59%。目前认为结节性胃炎可以作为HP感染后内镜下指标，具有较高的特异度，但灵敏度较低[4]。部分结节性胃炎患者未发现任何HP感染指征。本研究也发现部分结节性胃炎患儿无HP感染，提示除HP感染外，部分结节性胃炎的发生可能还与其他因素相关。有研究显示，部分结节性胃炎患者HP感染率低，而其血清特异性IgE阳性率高达78.8%，考虑该部分结节性胃炎与IgE介导的食物过敏反应相关[15]。

研究表明，结节性胃炎胃黏膜中HP定植多呈轻至中度[12]，本研究支持这一观点。另有研究认为，儿童结节性胃炎胃黏膜内HP定植程度较非结节性胃炎更为严重[14]。本研究中结节性胃炎胃黏膜中重度HP定植比例高于非结节性胃炎，且中重度HP定植比例在HP感染结节性胃炎中也高于HP感染非结节性胃炎，支持上述观点。因此有学者提出，内镜下结节性胃炎可作为儿童重度HP感染及胃内定植的镜下指标。结节性胃炎组织病理学上多呈中重度单核细胞浸润。本研究显示，结节性胃炎患儿胃黏膜中中重度单核细胞浸润占74.51%，与国内报道一致[11-13]，高于非结节性胃炎，且在HP感染时，两组胃黏膜中中重度单核细胞浸润比例也存在显著差异，提示内镜下结节性胃炎胃黏膜组织学有更为严重的单核细胞浸润现象。本研究也发现，HP感染结节性胃炎胃黏膜中，中性粒细胞浸润比例高于非HP感染结节性胃炎。

表2 HP感染胃黏膜病理学特征与结节性胃炎关系(n)

本研究中，结节性胃炎胃黏膜中淋巴滤泡检出率为64.71%，与国内外报道一致[2,5,10,11,13]，显著高于非结节性胃炎。目前研究认为，淋巴滤泡形成可能是部分HP感染后结节性胃炎胃黏膜中特征性病理改变。

结节性胃炎形成与HP感染密切相关，而研究显示，HP感染可以导致胃黏膜内异位淋巴组织形成，其形成机制仍不清楚。相关研究报道，CXCL13在HP相关性胃炎及MALT淋巴瘤表达增加[16]。本研究也发现，在所有HP感染患儿胃黏膜中均可见CXCL13蛋白表达，提示HP感染可以导致局部CXCL13合成或分泌增加。另有研究发现，在CXCR5缺陷小鼠中，HP感染后胃黏膜中异位淋巴滤泡形成缺陷[17]。提示CXCL13/CXCR5有利于HP感染后胃黏膜中淋巴滤泡的形成，并促进内镜下结节性胃炎的发生。

本研究显示，HP感染结节性胃炎胃黏膜中CXCL13表达水平与HP定植、单核细胞浸润程度和中性粒细胞浸润程度呈正相关，与相关研究一致[11]。有研究发现，在CXCR5缺陷小鼠中，不仅存在胃黏膜中异位淋巴滤泡形成缺陷，而且胃黏膜局部的急、慢性炎症反应较正常小鼠均下降[16]。因此认为局部淋巴滤泡形成可促进HP感染后局部急、慢性炎症反应，然而这些淋巴滤泡的功能仍不清楚。一方面通过抗原提呈作用，抗击病原起到保护性作用；另一方面，这种淋巴滤泡的出现为胃MALT淋巴瘤的发生提供了活跃的组织学背景，部分患儿可能会发展成为胃MALT淋巴瘤。因此，对于HP感染后胃黏膜中异位淋巴组织形成需要更深入的研究，为临床治疗提供理论依据。

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The expression and significance of CXCL13 in gastric mucosa of children with nodular gastritis

CHEN Ying1,ZHANG Mingrong2, LIAN Min2, PAN Jian1, LIU Zhifeng1, LI Mei1, LIN Qian1, LIN Qiong3(1. Nanjing Children's Hospital,Nanjing 210000, Jiangsu, China; 2. The First Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu, China; 3. Wuxi Children's Hospital Aff i liated to Nanjing Medical University, Nanjing 214000, Jiangsu, China)

Objective To explore the expression and signif i cance of CXCL13 in gastric mucosa of children with nodular gastritis. Methods A total of 216 pediatric patients with clinically diagnosed gastritis under gastroscopy were randomly divided into nodular group and non-nodular group according to whether there were nodular changes under endoscopy. The pathological characteristics of gastric mucosa and the expression of CXCL13/CXCR5 in gastric mucosa of all patients were evaluated. Results The infection rates of Helicobacter pylori (HP) in gastric mucosa in nodule group (n=102) and non-nodular group (n=114) were 70.59% and 42.11%, respectively; the rate of severe mononuclear cell infiltration were 74.51% and 22.81%, respectively; the proportion of neutrophil infiltration were 62.75% and 33.33%, respectively; lymph follicles occurred in 64.71% and 20.18%,respectively; and there were statistical differences between the two groups (P＜0.001). Positive staining of CXCL13 and CXCR5 were found in the gastric mucosa of all HP infected patients. The percentages of positive cells of CXCL13 and CXCR5 in the gastric mucosa of the nodules group were (71.33±7.14)% and (73.54 ± 7.92)%, which were higher than those in the non-nodule group(45.88 ± 5.92)% and (50.42 ± 5.98)%, respectively, and there were statistical differences (P＜0.001). Conclusions Nodular gastritis in children is mainly associated with Hp infection. The expression of CXCL13/CXCR5 is increased in gastric mucosa in children with Hp infection, especially in nodular gastritis, it may be involved in the formation of lymphoid tissue in gastric mucosa.

nodular gastritis; Helicobacter pylori; CXCL13; CXCR5; child

doi∶10.3969/j.issn.1000-3606.2017.12.013

练敏 电子信箱：13337836374@163.com

2017-02-14)

蔡虹蔚)