电化学发光免疫法与酶联免疫法检测乙肝病毒标志物比较研究

周新媚 李秀华 李广平 罗友军

广东省东莞三局医院检验科，广东东莞 523710

电化学发光免疫法与酶联免疫法检测乙肝病毒标志物比较研究

周新媚 李秀华 李广平 罗友军

广东省东莞三局医院检验科，广东东莞 523710

目的探讨电化学发光免疫法与酶联免疫法检测乙肝病毒标志物的临床效果。方法选择2016年1月～2017年5月在我院因疑似乙型病毒性肝炎而行乙肝病毒标志物检查的患者200例为研究对象，200例同时采用电化学发光免疫法和采用酶联免疫法进行HBsAg检测，比较两种方法的HBsAg阳性率。取不同浓度HBsAg定值参比血清，用阴性血清进行倍比稀释，同时用两种方法检测，比较两组最低检出浓度。结果电化学发光免疫法HBsAg阳性率显著高于ELISA方法，差异有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度HBsAg靶值电化学发光免疫法检测的最低浓度显著低于ELISA组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论电化学发光免疫法检测乙肝病毒标志物HBsAg比ELISA法阳性率高，最低检出浓度更低，提示灵敏度更高。

电化学发光免疫法（ECLIA）；酶联免疫法；乙肝病毒；HBsAg

乙型病毒性肝炎以肝炎性病变为主的疾病，由乙肝病毒感染导致，除了肝脏受累，还可造成多器官损害。世界各国均有乙肝流行，儿童、青壮年是主要的受感染人群，部分患者会最终发展为肝硬化或者肝癌，乙型病毒性肝炎是目前严重威胁人类健康疾病，在我国也是目前流行最广泛、危害性最严重的疾病。乙型病毒性肝炎一年四季均可发病，多为散发。目前临床上检测HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗 -HBe、抗 -HBc是筛查及确诊乙型病毒性肝炎的主要指标[1]。本研究比较电化学发光免疫法与酶联免疫法检测结果，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月～2017年5月在我院因疑似乙型病毒性肝炎而行乙肝病毒标志物检查的患者200例为研究对象， 200例同时采用电化学发光免疫法和采用酶联免疫法进行HBsAg检测。纳入标准：无严重黄疸或者脂血、溶血。患者对本次研究知情同意。200例患者中男124例，女76例，平均年龄（41.4±10.3）岁。

1.2 检测方法

1.2.1 标本采集 采集患者空腹肘静脉血2管各3mL（一管用于ELISA法，另一管用于电化学发光免疫法）。室温放置20min，3000转/min离心5min，对血清进行检测，所有操作严格按照说明书进行。

1.2.2 ELISA法 试剂盒由中山生物有限公司提供，仪器为：酶标仪（赛默飞热电）、加样枪、电热恒温培养箱。

1.2.3 电化学发光免疫法 试剂盒由罗氏公司提供，仪器为：罗氏2010全自动免疫分析仪。

1.3 结果判断[2]

ELISA法：临界值（CO值）=2.1×N（阴性对照均值），N＜0.05时按0.05计算，样本OD值＜CO值为阴性，样本OD值≥CO值为阳性。电化学发光免疫法：＜1.00为阴性， ≥1.00为阳性。比较两种检测方法的灵敏度，取不同浓度HBsAg定值参比血清，用阴性血清进行倍比稀释，同时用两种方法检测，比较两组最低检出浓度，每个浓度HBsAg靶值检测5次，计算（）用于比较。

1.4 统计学处理

采用统计学软件SPSS15.0版对数据进行统计分析，计量资料采用（）表示，采用t检验，计数资料采用百分数（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测乙肝病毒HBsAg标志物阳性率比较

电化学发光免疫法HBsAg阳性率62.0%（124/200），显著高于ELISA方法47.0%（94/200），差异有统计学意义（χ2=8.479，P＜0.05）。

2.2 两种方法检测不同浓度HBsAg靶值最低检测浓度比较

不同浓度HBsAg靶值电化学发光免疫法检测的最低浓度显著低于ELISA组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 两种方法检测不同浓度HBsAg靶值最低检测浓度比较（± s，ng/mL）

表1 两种方法检测不同浓度HBsAg靶值最低检测浓度比较（± s，ng/mL）

组别 n 0.1 0.3 0.7 ECLIA 200 0.11±0.02 0.21±0.04 0.65±0.08 ELISA 200 1.28±0.05 2.02±0.06 2.79±0.10 t 307.26 354.97 236.32 P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 讨论

乙型肝炎病毒简称乙肝病毒。是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）。乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主，并可引起多器官损害的一种疾病。我国是乙型病毒性肝炎的高发地区。全世界有20亿人感染过HBV，大约3.5亿为慢性HBV感染者，75%为亚洲人，25%～33%患肝硬化或者肝癌，每年大约100万人死于HBV感染，为人类死亡原因的第9位。乙肝病毒性感染由乙肝病毒引起，以肝脏病变为主要的传染病。患者主要表现为食欲不振、恶心、呕吐、厌油腻、腹胀、腹泻、乏力、肝区疼痛、肝脾肿大、黄疸等。HBV抗原抗体系统中，表面抗原抗体系统HBsAg有抗原性，无传染性，HBsAb为保护性抗体，但低滴度时仍可受染；核心抗原抗体系统中HBcAg有抗原性及感染性，但在血液中难以检测出，HBcAb为非保护性抗体，为病毒复制的指标，HBcAb IgM表示新近感染或慢性急性活动；e抗原抗体系统中HBeAg是病毒复制和传染性的重要指标，HBeAb是病毒复制已经减少，传染性降低。分子生物学标记物HBV-DNAP、HBV-DNA是病毒复制及传染性的指标[3-4]。

目前临床上常用的乙肝血清学检查项目包括HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗 -HBe、抗 -HBc。免疫分析法是基于抗原与抗体的特异性反应进行检测的一种手段；免疫标记技术是将一些既容易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物增强放大效应来显示反应系统中抗原或者抗体的性质与含量[5-6]。ELISA方法是在固相载体表面吸附抗原或者抗体，在固相载体表面行酶标记的抗原抗体反应，可检测大分子抗原、特异性抗体，具有灵敏、快速、操作简便等优点[7-8]。瑞典学者于1971年报道了ELISA检测方法，目前这种方法已经成为分析化学领域前言课题，是在免疫酶技术基础上发展而来的新型免疫检测技术[9-10]。ELISA方法采用抗原、抗体特异反应连接待测物与酶，酶与底物发生颜色反应，用于定性、半定量测定。ELISA检测的指标可以抗体也，也可以使抗原[11-12]。ELISA方法检测有3种试剂，免疫吸附剂（固相抗原或者抗体），标记物（酶标记的抗原或者抗体），显色剂（底物）。检测时抗原或者抗体固相载体上结合，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体或者抗原与酶结合的偶联物，即标记物，偶联物保留免疫活性以及酶活性，其与固相载体上的抗原或者抗体发生结合反应，加上酶的底物，发生催化水解或者氧化还原反应，反应后呈现的颜色深浅与待测的指标含量有关，可用肉眼、显微镜进行观察，也可用酶标仪测定，得出定性或者半定量的结果。这种检测方法操作简单，反应迅速，具有较强的特异性。ELISA又被称为酶放大体系，实现了在细胞或者亚细胞水平上示踪抗原或者抗体的位置，或者在微克，甚至是纳克水平上进行半定量检测。ELISA方法的特异性依赖的是抗体或者抗原的选择性。

电化学发光方法是来源于电化学法与化学发光法，化学发光的反应由化合物混合启动，电化学发光反应由电启动，与前者相比，更容易控制，精确度更高[13]。电化学发光免疫法是一种新技术，结合了电化学发光与免疫测定方法[14-15]。电化学发光剂是在工作电极阳极上施加电压能量，二价三氯联吡啶钌释放电子，发生反应，成为三价的三氯联吡啶钌；同时电极表面的TPA释放电子，发生氧化反应，成为阳离子自由基，迅速组发脱去一个质子，形成三丙胺自由基，整个反应体系存在具有强氧化性的三价三氯联吡啶钌与强还原性的三丙胺自由基TPA。两者发生氧化还原反应，三价的三氯联吡啶钌还原为二价的激发态，能连过来源于三价三氯联吡啶钌与三丙胺自由基TPA的电势差，激发态的三氯联吡啶钌以荧光机制衰变，释放波长为620nm光子能量，成为基态。电化学发光免疫法反应面积大，吸附率高，反应速度快，灵敏度高，操作方便，标记物可再循环利用。电化学发光免疫法的敏感度高，可达pg/mL或者pmol/mL水平，还具有特异性强，测定范围好，可重复性好，在许多国家，其已经成为首选的检测方法。在本次研究中结果提示，ECLIA方法在对HBsAg的检测阳性率显著高于ELISA方法，提示通过ECLIA方法检测能够减少漏诊率。取不同浓度HBsAg定值参比血清，进行倍比稀释，测定两种方法的最低检出浓度，结果提示，ECLIA方法的最低检测浓度均显著低于ELISA方法，说明ECLIA方法具有更高的灵敏性。

综上所述，电化学发光免疫法检测乙肝病毒标志物HBsAg比ELISA法阳性率高，最低检出浓度更低，提示灵敏度更高。

[1] 崔中锋，王雪侠.乙肝病毒标记物阳性表型血清标本HBV-DNA的检验分析[J].国际检验医学杂志，2015，36（6）：837-839.

[2] 全国卫生专业技术资格考试专家委员会.临床医学检验技术[M].北京：人民卫生出版社，2010：447.

[3] 黄华泥，张业久，徐五星.HBV-DNA定量检测结果与乙肝两对半模式相关性分析[J].现代中西医结合杂志，2010，19（31）：3459-3460.

[4] 陈瑜，钟步云，徐根云，等.低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义[J].中华检验医学杂志，2001，24（1）：39-41.

[5] 刘灿，陈静，李雯.化学发光法与ELISA法对乙肝两对半少见模式测定的比较分析[J].中国实验诊断学，2007，11（12）：1680-1681.

[6] 吴健民.临床化学自动化免疫分析[M].北京：科学出版社，2000：241-243.

[7] 陆盈.单项乙型肝炎病毒核心抗体阳性的原因及其临床意义 [J].海南医学，2013，24（11）：1636-1638.

[8] 王利杰，许东亚.电化学发光法和酶联免疫法检测低水平 HBsAg[J].中国输血杂志，2011，24（9）：767-768.

[9] 吕学琴，马雅静.电化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附、胶体金测定低浓度HBsAg的效果评价[J].国际检验医学杂志，2013，34（9）：1133-1135.

[10] 乔辉.时间分辨荧光免疫分析仪与ELISA法检测乙肝两对半的临床价值比较[J].中国实用医药，2015，10（16）：85-86.

[11] 施振岗.电化学发光免疫法和酶联免疫法检测乙肝病毒标志物结果准确性的比较[J].中国当代医药，2017，24（18）：111-113.

[12] 安静娜，李冬冬， 陈其霞，等.电化学发光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的结果分析 [J].中国输血杂志，2015， 28（4）：374-376.

[13] 陈桂兰，陆燕.光激化学发光免疫分析法测定低浓度HBsAg效果评价 [J].重庆医学，2012，41（25）：2652-2654.

[14] 马红霞，周运恒，杨蔺，等.ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析[J].检验医学，2010，25（6）：473-474.

[15] 陈明，沈群，刘宇，等.三种方法检测低浓度乙肝表面抗原的比较与分析[J].现代检验医学杂志，2014，29（6）：107-109.

Comparative study on detection of HBV markers by electrochemiluminescence immunoassay and enzyme linked immunosorbent assay

ZHOU Xinmei LI Xiuhua LI Guangping LUO Youjun
Department of clinical laboratoryDongguan three Bureau hospital, Dongguan Guangdong,China

ObjectiveTo explore the clinical effect of electrochemiluminescence immunoassay and enzyme linked immunosorbent assay in detection of hepatitis B virus markers.Methods200 patients of suspected hepatitis B with Hepatitis B virus markers test in our hospital from January 2016 to May 2017 were selected as subjects.200 cases were detected by electrochemiluminescence immunoassay and enzyme linked immunosorbent assay (HBsAg).The positive rates of HBsAg were compared between the two methods.Different concentrations of HBsAg reference serum were selected,serum dilution was performed with negative serum,and two methods were used to detect the minimum detectable concentration of the two groups.ResultsThe positive rate of HBsAg by electrochemiluminescence immunoassay was significantly higher than that by ELISA method,the difference was statistically significant(P＜0.05).The lowest concentration of HBsAg target with different concentrations of electrochemiluminescence immunoassay was significantly lower than that of ELISA group, the difference was statistically significant(P＜0.05).ConclusionThe positive rate of hepatitis B virus marker HBsAg detected by electrochemiluminescence immunoassay was higher than that by ELISA assay,the lowest detection concentration is lower,indicating higher sensitivity.

Electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA);Enzyme linked immunosorbent assay;Hepatitis B virus;HBsAg

R446.62

A

2095-0616（2017）23-116-03

2017-08-17）