负性调控因子IRAKM在系统性红斑狼疮免疫调节异常中的作用①

武延格 邱劲军 刘宏霞 张 波 龚宇锋

(深圳市坪山区人民医院病理科，深圳 518000)

负性调控因子IRAKM在系统性红斑狼疮免疫调节异常中的作用①

武延格 邱劲军②刘宏霞 张 波 龚宇锋

(深圳市坪山区人民医院病理科，深圳 518000)

目的研究白介素-1受体相关激酶-M(IRAKM)在系统性红斑狼疮(SLE)中的表达及其与免疫调节的关系。方法将103例SLE患者根据其疾病活动度评分(SLEDAI)分为活动期组(55例)和稳定期组(48例)，另选40名体检健康者作为对照组；采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测3组外周血单核细胞中IRAKM mRNA的表达量，酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体水平，免疫散射比浊法测定血清补体C3、C4水平；应用单因素方差分析法分析3组各观察指标的差异，Pearson或Spearman分析IRAKM与SLE自身抗体及补体的相关性。结果活动期组和稳定期组SLE患者的IRAKM mRNA表达量均明显低于对照组(P<0.05)，且活动期组比稳定期组更低，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组比，活动期组和稳定期组血清抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平均明显升高(P<0.05)，补体C3、C4的水平均明显降低(P<0.05)，且活动期组血清自身抗体和补体水平变化较稳定期组更显著(P<0.05)；SLE患者的IRAKM mRNA表达量与抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平呈负相关(P<0.05)，与补体C3、C4水平呈正相关(P<0.05)。结论IRAKM负性调控参与SLE的免疫调节过程，其表达水平与SLE病情活动程度密切相关。

系统性红斑狼疮；白介素-1受体相关激酶-M；免疫调节

系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus，SLE)是一种多发于青年女性的自身免疫性炎症性结缔组织疾病，病变累及多系统、多脏器。迄今为止，SLE的病因及确切的发病机制仍尚未完全清楚。研究多认为该病的发生主要与遗传、环境、激素水平、病毒感染及免疫失调等因素有关，其中免疫系统功能异常被认为是SLE发病的重要因素[1，2]。白介素-1受体相关激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinase-M，IRAKM)是Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)介导的信号转导通路中一个重要的负性调控因子，参与TLRs信号通路的负调控机制，对维持机体免疫平衡具有重要作用[3，4]。本研究通过对SLE患者外周血单核细胞中的IRAKM mRNA表达量进行检测，并分析其与SLE自身抗体及补体的相关性，探讨IRAKM在SLE免疫调节异常中的作用。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1一般资料 收集2015年6月至2017年3月我院收治的SLE患者103例，均为初发患者，诊断符合1997年美国风湿病学会(ACR)修订的SLE诊断标准，全部患者入组前均未使用糖皮质激素及免疫抑制剂治疗。将103例患者根据治疗前SLE疾病活动度评分(SLEDAI)(≥10分为活动期，<10分为稳定期)分为活动期组(55例)和稳定期组(48例)。活动期组中男8例，女47例；年龄16～64岁，平均年龄(37.5±12.6)岁；稳定期组中男5例，女43例；年龄15～61岁，平均年龄(36.6±12.1)岁。另选同期在本院体检健康者40例作为对照组，其中男5例，女35例；年龄18～65岁，平均年龄(37.7±11.9)岁。各组性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.1.2仪器与试剂 PCR仪(美国ABI公司)；全自动生化分析仪(瑞士罗氏公司)；Ficoll paque plus单核细胞分离液(美国GE公司)；RNA提取试剂盒(美国Omega公司)；抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体检测试剂盒(ELISA法)均为德国欧蒙公司产品；补体C3、C4检测试剂盒(免疫比浊法)均购自上海信裕生物科技有限公司。

1.2实验方法 采用肝素抗凝采血管和普通采血管分别采集每名受试对象的空腹静脉血，将肝素抗凝管中的全血采用Ficoll分层液法分离外周血单核细胞(PBMC)并进行常规培养，离心收集细胞冰冻存于-80℃冰箱，备用。普通采血管中的血室温下放置2 h，采用低温高速离心机3 000 r/min离心10 min，分离上层血清。Trizol法提取三组PBMC总RNA，采用RT-PCR法检测PBMC中IRAKM mRNA表达量；ELISA检测三组血清中抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平；免疫散射比浊法测定血清补体C3、C4水平。

2 结果

2.1各组IRAKM mRNA表达量比较 活动期组和稳定期组SLE患者的IRAKM mRNA表达量均明显低于对照组(P<0.05)，且活动期组比稳定期组更低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2各组血清中SLE自身抗体水平比较 与对照组比，活动期组和稳定期组血清抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平均显著升高(P<0.05)，且活动期组血清抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体水平较稳定期组更高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

GroupsnIRAKMmRNAActivestagegroup552.77±0.541)2)Stablestagegroup483.04±0.401)Controlgroup403.52±0.37F31.576P<0.001

Note：Compared with the control group,1)P<0.05;compared with the stable stage group,2)P<0.05.

GroupsnAntids-DNAantibodyAntiSmantibodyActivestagegroup55 328.08±110.191)2)155.99±71.58Stablestagegroup48217.65±80.251)103.29±45.07Controlgroup4013.27±4.63 8.83±3.52F168.63794.734P<0.001<0.001

Note：Compared with the control group,1)P<0.05;compared with the stable stage group,2)P<0.05.

GroupsnC3C4Activestagegroup550.59±0.281)2)0.15±0.041)2)Stablestagegroup480.90±0.311)0.28±0.071)Controlgroup401.27±0.140.33±0.05F96.242164.549P<0.001<0.001

Note：Compared with the control group,1)P<0.05;compared with the stable stage group,2)P<0.05.

表4IRAKM与抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体及补体C3、C4的相关性

Tab.4Correlationofantids-DNAantibody,antiSmantibody,C3andC4withIRAKM

IndexesrPAntids-DNAantibody-0.638<0.001AntiSmantibody-0.606<0.001C30.614<0.001C40.825<0.001

2.3各组血清中补体水平比较 与对照组比，活动期组和稳定期组血清补体C3、C4的水平均显著降低(P<0.05)，且活动期组血清补体水平较稳定期组更低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4IRAKM与SLE自身抗体及补体的相关性 SLE患者的IRAKM mRNA表达量与抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平呈负相关(P<0.05)，与补体C3、C4水平呈正相关(P<0.05)。见表4。

3 讨论

SLE是一种复杂的、由多种因素相互作用引起的自身免疫性疾病，免疫功能紊乱是贯穿SLE整个发病过程的重要因素，免疫系统中几乎所有的关键成分都参与了SLE的发生和发展[5，6]。因此，SLE长期以来都是免疫学领域的研究热点。

Toll 样受体(Toll-like receptors，TLRs)介导的信号转导通路是诱导强烈免疫应答、参与机体防御反应的重要途径，在机体抵抗病原微生物感染中具有重要作用[7]。但TLRs信号通路的过度活化可导致炎性因子过表达，引起内毒素休克、自身免疫性疾病及炎症相关性肿瘤的发生和恶化[8，9]。因此TLRs信号通路的活化需要受相应的负调控机制的调节以维持稳态。IRAKM是TLRs信号通路中重要的负性调控因子，能够通过抑制IRAK4诱发IRAK1磷酸化，阻止免疫复合物的形成或分离，使TLRs信号转导减弱或直接中断，从而避免强烈的免疫反应损伤机体[10，11]。本研究中，IRAKM mRNA在SLE患者外周血PBMC中的表达量明显低于健康者，且活动期SLE患者的IRAKM mRNA表达量比稳定期更低，说明IRAKM的表达与SLE的发生及其疾病活动性有关。细胞中IRAKM表达过低减弱了对TLRs信号通路的负调控作用，造成自身免疫过强，进而引发SLE。

在自身免疫性疾病中，血清自身抗体的产生是导致患者机体免疫调节异常的重要原因[12]。SLE患者血清中可出现多种自身抗体，包括抗核抗体(ANA)、抗核小体抗体(AnuA)、抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体等，其中抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体是SLE血清学诊断的特异性标志性抗体。本研究结果显示，活动期和稳定期SLE患者的血清抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体水平均明显高于健康者，且SLE活动期患者血清自身抗体的水平较稳定期患者更高，提示自身抗体介导的免疫调节异常与SLE的发生、发展密切相关。本研究中，SLE患者外周血PBMC中的IRAKM表达水平与其血清抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平呈明显的负相关性，提示IRAKM可能与自身抗体在SLE免疫调节异常中发挥拮抗作用。

补体是体内一组具有抗感染和免疫调节作用的血清蛋白，由补体激活所产生的级联反应是一种重要的先天性免疫反应[13]。以往研究对补体系统涉及的自身免疫性疾病存在争议，但近年来研究表明补体C3、C4对SLE的诊断和疾病活性监测也具有重要价值[14，15]。本研究发现，无论是活动期还是稳定期SLE患者，其血清C3、C4水平均明显低于健康者，但SLE稳定期患者血清C3、C4水平高于活动期患者，说明补体系统功能缺陷与SLE的发生及病情活动度有关。同时本研究发现，SLE患者外周血PBMC中IRAKM的表达水平与其血清补体C3、C4水平呈明显的正相关性，推测IRAKM可能与补体系统协同作用参与SLE的免疫调节。

由以上研究结果可知，负性调控因子IRAKM与SLE的发生密切相关，其表达水平对SLE疾病活动性的判断也具有重要的参考价值。且IRAKM与自身抗体、补体的相关性进一步说明了其参与SLE免疫调节异常的病理反应过程，但其具体的调控机制仍有待进一步深入研究。

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RoleofnegativeregulatoryfactorIRAKMinimmunedysregulationofsystemiclupuserythematosus

WUYan-Ge,QIUJin-Jun,LIUHong-Xia,ZHANGBo,GONGYu-Feng.

DepartmentofPathology,ShenzhenPingshanPeople′sHospital,Shenzhen518000,China

Objective:To investigate the expression of interleukin-1 receptor associated kinase-M(IRAKM)in systemic lupus erythematosus(SLE) and its relationship with immunoregulation.Methods103 patients with SLE were divided into active stage group(n=55) and stable stage group(n=48) according to their disease activity score(SLEDAI),and 40 healthy persons were chosen as control group.Real-time quantitative PCR(RT-PCR) was used to detect the expression of IRAKM mRNA in peripheral blood monouclear cells of the three groups.The levels of anti ds-DNA antibody and anti Sm antibody in serum were detected by Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).The levels of serum complement C3 and C4 were measured by immune scattering turbidimetry.Factor analysis of variance was performed to analyze the differences of all the observed indicators in the three groups.The correlation between IRAKM and autoantibodies and complements of SLE was analyzed by Pearson or Spearman.ResultsThe expression level of IRAKM mRNA of SLE patients in the active stage group and stable stage group were significantly lower than that in the control group(P<0.05).Moreover,the expression level of IRAKM mRNA in the active stage group was lower than that in the stable stage group,and the difference was statistically significant(P<0.05).Compared with the control group,the levels of anti ds-DNA antibody and anti Sm antibody in the active stage group and stable stage group were significantly increased(P<0.05),and the levels of complement C3 and C4 were obviously lower(P<0.05).The changes of serum levels of autoantibodies and complements in the active stage group were more remarkable than those in the stable stage group(P<0.05).The expression level of IRAKM mRNA in the SLE patients was negatively correlated with the levels of anti ds-DNA antibody and anti Sm antibody(P<0.05).However,it was positively correlated with the levels of complement C3 and C4(P<0.05).ConclusionIRAKM participates in the immune regulation process of SLE through negative regulation,and its expression level is closely related to the degree of SLE disease activity.

Systemic lupus erythematosus;Interleukin-1 receptor associated kinase-M;Immune regulation

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.12.021

R363

A

1000-484X(2017)12-1858-04

①本文为广东省省级科技计划项目(2017A020215097)和深圳市科技创新委项目(JCYJ20150403093323885)。

②深圳市坪山区人民医院中心实验室，深圳 518000。

武延格(1981年-)，女，硕士，主治医师，主要从事肿瘤病理学研究,E-mail：wuyange398@163.com。

及指导教师：邱劲军(1974年-)，男，硕士，主任医师，主要从事系统性红斑狼疮基因组学研究。

[收稿2017-08-03 修回2017-08-11]

(编辑 张晓舟)