纸片法快速检测生活饮用水中总大肠菌群的探讨

许晶

纸片法快速检测生活饮用水中总大肠菌群的探讨

许晶

目的探讨使用纸片法快速检测生活饮用水中大肠菌群的可行性。方法使用纸片法与多管发酵法同时检测本地区收集的水样106份，对两种方法对大肠菌群的检出率进行比较。结果在106份生活饮用水水样中，多管发酵法和纸片法均检出总大肠菌群阳性2份，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论纸片法可以达到快速、准确、简便地检测总大肠菌群的目的，可以用于快速、便捷的检测生活饮用水。

纸片法；快速检测；生活饮用水；大肠菌群

作者单位：430100 武汉，武汉市蔡甸区疾病预防控制中心

生活饮用水与居民的身体健康密切相关，大肠菌群是我国生活饮用水中最为常见的细菌[1]。根据我国现行的《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006中明确规定总大肠菌群不得检出，菌落总数不得高于100 CFU/mL[2]。纸片法检测细菌（如大肠菌群等）在餐饮行业中已经较为常用，与传统的发酵法相比，纸片法具有快速、便捷的特点[3]。但在纸片法对大肠菌群检出的灵敏度上仍有争议。我单位采集来自本地区（包括下属乡镇）的生活饮用水，分别用纸片法及多管发酵法进行检测，对比两种方式检出的总大肠菌群数。现将结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本单位从本区所属的各个街道、乡镇采集不同的饮用水水样106份，其中来自本区各街道的水样74份，各乡镇水样32份。将每份水样平均分为两份，分别使用纸片法与多管发酵法检测。

1.2 检测方法

1.2.1 纸片法 本次试验选用水质大肠菌群检验纸片（十五管法）（生产厂家：广州绿洲生化科技股份有限公司；产品编号：BD104）。（1）接种：用10 mL灭菌吸管吸取10 mL水样插入装有大纸片的塑料薄膜袋中，均匀涂布，共加5个大纸片（浓度为10）；用1 mL灭菌吸管分别吸取1 mL水样加到小纸片中，共加5个小纸片（浓度为1）；另取1 mL水样加到9 mL灭菌生理盐水中混匀，用1 mL灭菌吸管分别吸取1 mL（即0.1 mL水样），加到最后5片小纸片中（浓度为0.1）。（2）培养：将接种好的纸片（每一份水样共计15张）放于培养箱中，恒温37oC培养24 h。

1.2.2 多管发酵法 发酵法按照《生活饮用水卫生检验方法 微生物指标》GB/T5750.12-2006[4]以及《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006规定执行。大体分为3步：（1）乳糖发酵试验：接种管内装有乳糖蛋白胨培养液并倒置一小套管，取10 mL水样接种到10 mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1 mL水样接种到10 mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1 mL水样注入到9 mL灭菌生理盐水中，混匀，用1 mL灭菌吸管分别吸取1 mL（即0.1 mL水样）接种到10 mL单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。将接种管置于37oC培养24 h，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸的报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，继续以下步骤。（2）分离培养：将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于37oC培养18 h-24 h，观察菌落形态，挑取有金属光泽的深紫黑色菌落；不带或略带金属光泽的紫黑色菌落；中心较深的淡紫红色菌落做革兰氏染色、镜检和证实试验。（3）证实试验：经上述涂片染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌者，同时接种乳糖蛋白胨培养液，经37oC培养24 h产酸又产气者，即证实为总大肠菌群阳性。

1.3 结果判读和报告

1.3.1 纸片法 观察每片试纸的颜色变化，若试纸纸片变黄或在黄色上呈现红色斑点表现为大肠菌群阳性，若试纸纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色上呈现红色斑点，但周围没有黄色出现均表现为大肠菌群阴性。根据阳性反应纸片数，查MPN表可得出水样中大肠菌群的MPN值。

1.3.2 多管发酵法 根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100 mL水样中的总大肠菌群MPN值

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0进行数据分析，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 两种检验方式结果比较

2 结果

本次检测生活饮用水中总大肠菌群，共计采集水样106份，检验106份。其中纸片法检验水质达标104份，水质不达标2份，达标率为98.11%，阳性率为1.89%；发酵法水质达标104份，水质不达标2份，达标率为98.11%，阳性率为1.89%。两种检验方式结果相同，无统计学差异（P＞0.05）。两种方式检测总大肠菌群的MPN值见表1。

本次的水质检测过程中发现本区大部分地区生活饮用水水质符合国家要求，仍有部分地区生活饮用水水质不符合国家的卫生安全标准，这部分卫生安全隐患主要集中于较偏远的乡镇。

3 讨论

生活饮用水关系到居民们的身体健康，严格按照国家标准对生活饮用水进行检测，分析饮用水是否安全卫生是本单位的工作之一[5-7]。探求快速、有效的检测方法，是我们的目标。

纸片法与传统多管发酵法检测生活饮用水中的总大肠菌群阳性比率经统计学分析无明显差异，纸片法对大肠菌群的检验灵敏度不弱于多管发酵法，两者相比检验出来的水质MPN值也相差不大。以上结果说明纸片法与传统的发酵法对于总大肠菌群的检出率基本一致。但是与多管发酵法相比，纸片法检测总大肠菌群的测定周期更短，所用材料更容易得到，对于环境及操作的要求也更简单。更适用于快速、大批量水样的检验，及周围环境复杂、不能完全达到无菌条件时的检验。

总之，纸片法可以达到快速、准确、简便的检测总大肠菌群的目的，而且检测的灵敏度，与传统的发酵法相比无明显差异。

1 焦勇霞.大肠菌群快速检测方法探讨.山西化工,2016(1):51-53.

2 谢雪钦.两种方法测定菌落总数和大肠菌群的比较研究.食品工业,2015(10): 283-285.

3 蔡尽忠.大肠菌群快速检测方法研究进展.生命科学仪器,2015(2): 14-18.

4 王琳.生活饮用水大肠菌群快速纸片法和多管发酵法检测结果比较.临床合理用药杂志,2015(8): 166.

5 李俭峰.大肠菌群纸片法与发酵法检测食具的结果比较.中国城乡企业卫生,2012(3): 117-118.

6 王正革.生活饮用水大肠菌群检测纸片法快速检测与发酵法的结果对比.医学信息,2012,25(5): 361.

7 赵红,苏静,梁炜,等.纸片培养法与平板培养法监测牙科水路细菌污染的比较研究.中国消毒学杂志,2015,32(5):489-490.

Study on rapid detection of total coliform bacteria in drinking water by paper strip method

Jing XU
Disease Prevention and Control Center of Caidian District,Wuhan 430100,China

ObjectiveTo investigate the feasibility of rapid detection of coliform bacteria in drinking water using paper strip method.MethodsSimultaneous detection of 106 samples of water collected in the region by using paper strip and multiple-tube fermentation.The detection rate of coliform bacteria by two methods were compared.ResultsIn 106 drinking water samples,2 samples with total coliform bacteria positive detected by the multiple-tube fermentation and the paper strip method,and there was no statistically significant difference between the two groups.ConclusionThe paper strip method can quickly,accurately and conveniently detect the total coliform bacteria,and can be used to detect drinking water quickly and conveniently.

Paper strip method; Rapid detection; Drinking water; Fecal coliform