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前列腺等离子电切组织α1-肾上腺素受体的分布情况研究*

2017-11-16万少平蔡先姣毛正鲍俐戎陈拓

中国现代医学杂志 2017年26期
关键词:化学法亚型切片

万少平,蔡先姣,毛正,鲍俐戎,陈拓

(湖南省岳阳市二人民医院,湖南 岳阳 414000)

前列腺等离子电切组织α1-肾上腺素受体的分布情况研究*

万少平,蔡先姣,毛正,鲍俐戎,陈拓

(湖南省岳阳市二人民医院,湖南 岳阳 414000)

目的 了解前列腺无炎症增生组织和合并炎症增生组织α1肾上腺素受体(α1-AR)的分布情况。方法 选取30例良性前列腺增生(BPH)患者,收集经尿道前列腺等离子电切术后前列腺增生组织,采用双免疫组织化学法,观察前列腺增生组织中α1-AR 3种亚型的染色光密度(OD)和切片组织炎症细胞的浸润情况。结果 12例前列腺标本切片未发现炎症细胞浸润,18例前列腺标本切片有炎症细胞浸润。前列腺无炎症增生组织α受体亚型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值与合并炎症增生组织比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 前列腺无炎症增生组织与合并炎症增生组织的α受体亚型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR含量无差异。

经尿道前列腺等离子电切术;α1肾上腺素受体;良性前列腺增生;炎症

α肾上腺素受体(alpha adrenergic receptor,α-AR)广泛分布于机体各组织器官中,介导平滑肌收缩等多种生理效应。α-AR分为α1、α2 2种亚型,人前列腺平滑肌收缩主要由α1肾上腺素受体(alpha 1 adrenergic receptor,α1-AR) 亚型调节[1]。α1-AR兴奋性增强,可引起后尿道压力增加,出现下尿路梗阻症状。前列腺疾病状态下的α1-AR分布数量变化情况是大家关注的问题。本研究收集前列腺增生电切术后的组织标本,测量前列腺组织中α1-AR的含量,比较分析炎症和非炎症状态前列腺增生组织中α1-AR的差异。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2013年7月-2014年7月湖南省岳阳市二人民医院收治的前列腺增生患者30例,年龄65~87岁。纳入标准:根据患者病史、症状、体格检查、彩超、血PSA检查等确诊为良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)。手术指征:反复尿储留;反复血尿;反复泌尿系感染;膀胱结石;继发性上尿路积水;BPH患者合并膀胱憩室、腹股沟疝、严重的痔疮或脱肛;充溢性尿失禁的BPH患者。排除标准:患有严重心力衰竭、心房颤动、肺气肿、脑梗死;前列腺癌、膀胱肿瘤;逼尿肌无力和不稳定性膀胱、严重尿路感染[2]。

入院后行尿道前列腺等离子电切术(plasmakenitic resection of prostate,PKRP)。佳乐牌等离子电切机为英国Gyrus Medical Limited公司生产,膀胱冲洗液为生理盐水。术后收集电切前列腺组织,手术切除后30 min内送液氮-80℃冷冻保存。

1.2 主要试剂及试剂盒

1.2.1 试剂 PBS(pH=7.2~7.4),柠檬酸盐缓冲液CB(pH=6.00,0.1 mol/L 1 000 ml,配制柠檬酸三钠3.0 g∶柠檬酸 0.4 g),一抗(Alpha1B-AR,ab140695/abcam,兔,稀释度 1∶100;Alpha1D-AR,ab84402/abcam,兔,稀释度 1∶40;Alpha1A-AR,ab86772/abcam,兔,稀释度1∶50)购自上海申科生物科技有限公司。

1.2.2 试剂盒 Ultra SensitiveTMSP免疫组织化学法染色试剂盒(KIT-0305,福州迈新生物技术开发有限公司)。采用生物素标记的二抗、链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶,以及底物色素混合液,测定细胞和组织中的抗原。

1.3 主要仪器与设备

组织摊片烤片机(BT-330型,孝感博太电子科技有限公司),组织包埋仪(YB-7B型,孝感亚光医用电子技术有限公司),石蜡切片机(Taiva,R135,孝感泰淮电子设备有限公司),光学显微镜(Motic,DMB5-2231P1型,厦门麦克奥迪实业集团有限公司),Image-Pro plus 4.5图像分析软件(美国Media Cybernetics公司)。

1.4 方法

1.4.1 免疫组织化学法 将收集30例标本送湘雅医学院病理教研室,行双免疫组织化学法分析,观察前列腺组织中α1-AR 3种亚型的分布。

1.4.2 光镜 光镜观察前列腺组织切片,棕黄色染色颗粒为α1-AR阳性颗粒。同时观察组织切片中炎症细胞情况,有炎症细胞浸润者为合并炎症前列腺增生切片标本。

1.4.3 图像分析 在20倍视野下,每张切片随机选择1个视野,对阳性染色区域进行图像分析定量。采用Image-Pro plus 4.5图像分析软件,测定框内阳性染色区域积分光密度(optical density,OD)[3]。

1.5 统计学方法

数据分析采用SPSS 10.0统计软件,计量资料以均数±标准差(±s)表示,用 t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 光镜结果

30例确诊为BPH患者行PKRP。光镜观察发现,12例患者组织切片无炎症细胞浸润;18例患者组织切片前列腺增生合并炎症细胞浸润。见附图。

2.2 前列腺无炎症增生组织与合并炎症增生组织的OD值比较

前列腺无炎症增生组织α受体亚型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值与合并炎症增生组织比较,经t检验,差异无统计学意义(P>0.05)。见附表。

附图 α1–AR 3种亚型炎症细胞浸润情况(免疫组织化学法×20)

附表 两组α受体亚型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值比较 (±s)

附表 两组α受体亚型α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR的OD值比较 (±s)

组别 α1A-AR α1B-AR α1D-AR合并炎症增生组(n=18) 201.528±4.357 146.867±4.232 163.750±5.907无炎症增生组(n=12) 206.103±5.181 150.654±4.848 160.461±4.817 t值 -2.612 -2.266 1.603 P值 0.511 0.471 0.479

3 讨论

α1受体分为 α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR 3种亚型,在前列腺基质平滑肌、前列腺被膜、膀胱颈部中存在。mRNA水平上的定量溶液杂交和蛋白质水平上的免疫组织化学法研究α1受体3个亚型在前列腺不同组织中的含量存在差异[4-5]。α1A-AR存在于前列腺基质和腺上皮细胞中。α1B受体主要存在于腺上皮细胞,基质中很少;α1D-AR在腺上皮细胞中存在。正常前列腺中,α1A-AR占63%,α1B-AR占6%,α1D-AR占31%。但在BPH患者前列腺组织中,随着基质比例增加,α1A-AR亚型所占比例相应增加,达85%,而α1B-AR、α1D-AR亚型只占1%和14%[6-7]。前列腺炎患者组织中,外周带α1A-AR表达水平是正常组织的0.36倍,α1DAR表达水平是正常组织的0.3倍,有差异;移行带α1A-AR表达水平是正常组织0.65倍,有差异;移行带α1D-AR表达水平是正常组织0.75倍,无差异。这说明慢性前列腺炎患者的前列腺组织中α1A-AR、α1D-AR表达呈下降趋势[8]。

本研究发现,前列腺无炎症增生组织与合并炎症增生组织的α1-AR分布无差异。这与上述单纯前列腺增生组织的α1A-AR表达升高不一致,也与单纯前列腺炎组织中α1A-AR、α1D-AR表达降低不一致。上述研究均是病变前列腺组织与正常前列腺组织中α1-AR表达水平的对照研究,本研究为前列腺无炎症增生组织与合并炎症增生组织的对照组研究,研究对象不同,因而结果也有差别。本研究结果显示,前列腺增生合并炎症患者中,炎症细胞浸润不能改变前列腺增生组织中α1-AR的分布情况。

α1-AR同时介导前列腺和膀胱颈平滑肌的收缩反应[9],影响排尿功能,阻断α1-AR可以减少排尿次数。α1-AR阻滞剂对尿道、膀胱颈部及前列腺的α1-AR有高度选择性,抑制平滑肌收缩。前列腺增生和前列腺炎症患者,口服α1-AR阻滞剂,可以改善排尿不良症状,疗效确切。α1-AR阻滞剂治疗后,患者IPSS评分、尿流率峰值改善[10-13]。根据本研究结果,对前列腺增生合并炎症和未合并炎症的患者,如果口服α1-AR阻滞剂,因其α1-AR含量相同,口服α1-AR阻滞剂的治疗效果应该相似。

综上所述,前列腺无炎症增生组织与合并炎症增生组织的α受体亚型α1A-AR、α1B-AR、α1DAR含量无差异。

[1]彭明强,郭德荣,薛兆英,等.人增生前列腺α1肾上腺素能受体亚型分析[J].中华泌尿外科杂志,1998,19(2):89-92.

[2]吴阶平,主编.良性前列腺增生概论.吴阶平泌尿外科学[M].济南:山东科学技术出版社,2004:1173-1185.

[3]FRANCISCO J S,MORAES H P,DIAS E P.Evaluation of the Image-Pro Plus 4.5 software for automatic counting of labeled nuclei by PCNA immunohistochemistry[J].Braz Oral Res,2004,18(2):100-104.

[4]YZMADA S,TANAKA C,KIMURA R,et al.Alpha 1 adrenoceptors in human prostate:characterization and binding charac teristic of alpha 1 antagonist[J].Life Sci,1994,54(24):1845-1854.

[5]JARDIN A,BENSADOUN H,DELAUCHE-CAVALLIER M C,et al.Alfuzosin for treatment of benign prostatic hypertrophy:the BPH-ALF group[J].Lancet,1991,337(8755):1457-1461.

[6]RAMARAO C S,DENKER J M K,PEREZ D M,et al.Genomic organization and expression of the human α1B adrenergic receptor[J].J biol Chem,1992,267(30):21936-21945.

[7]FAURE C,PIMOULE C,VALLANCIEN G,et al.Identification of alpha 1 adrenoceptor subtypes present in the human prostate[J].Life Sci,1994,54(21):1595-1605.

[8]SCHWINN D A,MICHELOTTI G A.α1-Adrenergic receptors in the lower urinary tract and vascular bed:potential role for the α1D subtype in filling symptoms and effects of ageing on vascular expression[J].Br J Urol,2000,85(Suppl 2):6-11.

[9]ALEXANDRE EC,KIGUTI LR,CALMASINI FB,et al.Mirabegron relaxes urethral smooth muscle by a dual mechanism involving β 3-adrenoceptor activation and α1-adrenoceptor blockade[J].Br J Pharmacol,2016,173(3):415-428.

[10]HUANG J,HE F,HUANG M,et al.Novel naftopidil-related derivatives and their biological effects as alpha 1-adrenoceptors antagonists and antiproliferative agents[J].Eur J Med Chem,2015,96(4):83-91.

[11]TANUMA Y,TANAKA Y,TAKEYAMA K,et al.Does prostate volume affect the efficacy of α1D/A:adrenoceptor antagonist naftopidil[J].Urol Ann,2016,8(1):20-25.

[12]MATSUKAWA Y,TAKAI S,ASAI K,et al.A slow stream is pathophysiologically related to a poor response to α1-adrenoceptor therapy in the treatment of storage symptoms associated with benign prostatic hyperplasia[J].Urology,2015,86(3):558-564.

[13]MATSUKAWA Y,FUNAHASHI Y,TAKAI S,et al.Comparison of silodosin and naftopidil for efficacy in the treatment of benign prostatic enlargement complicated by overactive bladder:a randomized,prospective study (SNIPER study)[J].J Urol,2017,197(2):452-458.

Study of alpha 1-AR distribution in benign prostatic hyperplasia tissues after PKRP*

Shao-ping Wan,Xian-jiao Cai,Zheng Mao,Li-rong Bao,Tuo Chen(Yueyang Second People's Hospital,Yueyang,Hunan 414000,China)

Objective To investigate the distribution of alpha 1 adrenergic receptor (α1-AR)in benign prostatic hyperplasia tissues with or without inflammation after transurethral plasmakinetic resection of prostate(PKRP).Methods The prostatic tissues of benign prostatic hyperplasia were collected from 30 patients after PKRP.The distribution of α1-AR was measured by immunohistochemistry using specific monoclonal antibodies of α1-AR subtypes.The inflammatory cell infiltration of prostatic tissues was observed at the same time.Results There were no inflammatory cells in 12 prostatic tissues.There were inflammatory cells in 18 prostatic tissues.The mean optical density (OD)of α1A-AR, α1B-AR and α1D-AR in the benign prostatic hyperplasia tissues was not statistically different between the non-inflammation group and the inflammation group (P > 0.05).Conclusions The content of α1A-AR, α1B-AR and α1D-AR in the benign prostatic hyperplasia tissues with inflammation is not significantly different from that in the benign prostatic hyperplasia tissues without inflammation.

benign prostatic hyperplasia;alpha 1 adrenergic receptor;plasmakinetic resection of prostate;inflammation

R697.32

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.26.016

1005-8982(2017)26-0079-04

2017-01-17

湖南省医药卫生科研计划(No:B2013-143)[

蔡先姣,E-mail:CXJ3128@163.com

(童颖丹 编辑)

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