上海市金山区奶牛传染性鼻气管炎血清学调查

2017-11-13张晓锋翁永刚李守富叶结平范红结陈鸿军

中国动物传染病学报 2017年5期

张晓锋，翁永刚，李守富，郭海，陈冈，叶结平，范红结，陈鸿军

（1.南京农业大学动物医学院，南京210095；2.上海市金山区农业委员会，上海200540；3.上海市金山区动物疫病预防控制中心，上海201500；4.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

张晓锋1,2，翁永刚3，李守富3，郭海3，陈冈3，叶结平3，范红结1，陈鸿军4

2016年在上海市金山区10个奶牛场共采集460份牛血清，利用商品化牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV）gE特异性抗体检测试剂盒对其进行血清学调查。结果发现，金山区奶牛存在36.67%～97.37%的抗体阳性率，IBRV感染普遍，建议采取综合管理措施，有效控制该病造成的损失。

传染性鼻气管炎；血清学调查；奶牛；金山区

牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinortracheitis，IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinortracheitis virus，IBRV）引起的一种急性热性接触性传染病，又称牛疱疹病毒1型感染、“牛传染性坏死性鼻炎”或“红鼻病”。IBRV主要通过空气、媒介物或者与病牛直接接触而传播，传染性强，可导致机体细胞免疫功能降低和免疫抑制，易引起继发感染，对产奶、繁育及使役均有较大影响[1,2]。

1950年IBRV首次被分离鉴定[2]。1980年，我国从新西兰引进的种牛体内首次发现IBRV，目前已呈全国流行[3,4]。近年来，由于国内牛只流动愈发频繁，淘汰患病牛无害化处置不到位，IBR流行严重威胁着养牛业的发展，曾有报道上海市规模化养殖场中荷斯坦奶牛IBR抗体阳性率高达41.86%[5]。同时，IBRV感染引起牛继发性细菌性肺炎等疾病的现象也较为严重。本研究2016年在上海市金山区采集460份牛血清进行血清学调查，旨在明确该地区牛IBR感染及血清抗体水平，了解其发病影响因素，在此基础上制定针对IBR的免疫预防措施，促进养牛业的健康发展。

1 材料与方法

1.1 待检血清 2016年6月在上海市金山区10家未免疫IBR疫苗的规模化牧场，对牛进行尾静脉或颈静脉采血，共采集460份血清。自然凝集析出血清，离心去除红细胞，分装备用。

1.2 抗体检测方法牛传染性鼻气管炎抗体检测试剂盒为法国ID-Vet公司生产的ID Screen IBR gE Competition ELISA试剂盒（IBRGBC-6P）。使用之前将试剂盒内所有组分恢复到室温，用振荡器充分混合。待检血清按1:2稀释，分别加于ELISA板对应孔中，4℃过夜；用洗涤液充分洗涤后，加入竞争抗体，充分洗涤后加入100 μL酶标二抗，室温作用30 min；洗涤液充分洗涤后加入100 μL TMB底物溶液，室温作用15 min左右后，加入100 μL终止液终止反应，在450 nm波测定OD值。每板分别设2个阳性和2个阴性对照孔。结果判定：阴性对照平均值（NCx）与阳性对照的平均值（PCx）之差≥0.3，表明试验有效；血清样品gE抗体OD值（S）与阴性对照平均值（NCx）比值≤0.6，判定为阳性；若比值在0.6～0.7，则为可疑；若比值大于0.7，则判定为阴性。

2 结果和讨论

本次血清学调查共涉及10个未免疫IBR疫苗的规模化奶牛场，检测血清样品共计460份，阴性对照OD平均值（NCx）为1.713，阴性与阳性OD差值均在0.3以上。根据待检血清OD（S值）与NCx的比值，按材料和方法中的判定原则，共检出阳性血清309份，阳性率达67.17%，可疑的阳性血清数共42份，比例为9.13%，其余109份血清样品的检测值低于检测限，判定为阴性，占23.70%。具体结果见表1。

表1 上海市金山区IBR血清学检测结果Table 1 Serological investigation of IBR in Jinshan district of Shanghai

IBR在世界范围内广泛存在，尤其在养牛业比较发达的地区，并且随着养殖规模不断扩大，流行趋势愈发严重。IBRV侵入牛体后，以潜伏感染和持续性感染为主要特点，病牛可终生带毒。该病目前缺乏特效药物，病牛死亡率较高，给养殖业造成巨大的经济损失[4]。近年来我国从国外引进种牛后，各地陆续检出IBRV抗体阳性牛[6,7]。鉴于IBR危害较为严重，且分布较广，因而对该病的发生与流行情况进行普查工作显得十分必要。

IBRV可导致持续性感染，免疫并不能有效阻止野毒入侵和繁殖，防治IBR的关键措施是对牛群进行定期检疫，控制传染源。家畜传染病的诊断方法有多种，如血清中和试验、琼脂扩散试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验以及核酸探针检测技术等。其中，酶联免疫吸附试验具有敏感性高、简便、易于标准化的特点，在疾病检测中被广泛应用[8,9]。本研究利用ELISA方法对金山区460份牛血清进行IBR抗体检查，结果显示，被检10个奶牛场IBR抗体阳性，最低为36.67%（BZ场），最高阳性率达97.37%（NS场）。这些奶牛场均未进行全病毒或gE缺失病毒疫苗免疫，说明金山区奶牛存在IBRV广泛感染的现象。

近几年上海市金山区从外区甚至外省购入廉价牛的现象普遍存在，人员流动较为频繁；另外，金山区大部分牧场的饲料原料如苜蓿草、羊草、玉米等均从美国、内蒙等国家和地区购入，来源地疫情不明，运输车辆和人员复杂，这极有可能是导致感染严重的主要因素。与此同时，部分牧场思想上不够重视，管理制度比较混乱，缺乏完善的检疫、隔离、消毒等综合性防控措施；个别牛场牛舍内环境潮湿且通风不良，牛床污染物不及时清理，牛只营养不良，生存环境较为恶劣，也是引发严重感染的不可忽略的诱发因素。

[1] Biswas S, Bandyopadhyay S, Dimri U, et al. Bovine herpesvirus-1 (BHV-1) - a re-emerging concern in livestock: a revisit to its biology, epidemiology, diagnosis,and prophylaxis[J]. Vet Q, 2013, 33(2): 68-81.

[2] Madin S H, Mckercher D G, York C J. Isolation of the infectious bovine rhinotracheitis virus[J]. Science,1956,124 (3225): 721-722.

[3] 仰惠芬, 李昌琳, 封启民, 等. 牛传染性鼻气管炎病毒的分离[J]. 动物检疫, 1982: 13-16.

[4] Studdert M J. A brief review of studies of bovine and equine herpesviruses [J]. Aust Vet J, 1989, 66(12): 401-402.

[5] 林梅, 缪德年, 黄克和, 等. 上海地区规模牧场荷斯坦奶牛IBRV感染情况调查[C]//第五届中国奶业大会论文集,2014.

[6] 张芳, 刘瑞宁, 陈颖钰, 等. 牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展[J]. 动物医学进展, 2017, 38(4): 93-97.

[7] 冷雪, 武华. 牛传染性鼻气管炎研究进展[J]. 安徽农业科学, 2011, 39(1): 284-285.

[8] Graham D A, Mawhinney K A, McShane J, et al.Standardization of enzyme-linked immunosorbent assays(ELISAs) for quantitative estimation of antibodies specific for infectious bovine rhinotracheitis virus, respiratory syncytial virus, parainfluenza-3 virus, and bovine viral diarrhea virus [J]. J Vet Diagn Invest, 1997, 9(1): 24-31.

[9] Florent G, de Marneffe C. Enzyme linked immunosorbent assay used to monitor serum antibodies to bovine respiratory disease viruses [J]. Vet Microbiol, 1986,11(4): 309-317.

SEROLOGICAL INVESTIGATION OF INFECTIOUS BOVINE RHINOTRACHEITIS ON DAIRY FARMS IN JINSHAN DISTRICT, SHANGHAI

ZHANG Xiao-feng1,2, WENG Yong-gang3, LI Shou-fu3, GUO Hai3, CHEN Gang3, YE Jie-ping3,FAN Hong-jie1, CHEN Hong-jun4

(1. Animal Medicine School, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. Jinshan Municipal Agricultural Commission,Shanghai 200540, China; 3. Jinshan Municipal Center for Disease Control and Prevention, Shanghai 201500, China; 4. Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241, China)

In this study, 460 serum samples were collected in 2016 from dairy cows on 10 farms in Jinshan district, Shanghai. A serological investigation of infectious bovine rhinotracheitis was performed using a commercial gE ELISA kit. The results showed that the positive rate ranged from 36.67% to 97.37% among dairy farms, indicating wide spread of IBRV infection necessary strategies for the disease control.

Infectious bovine rhinotracheitis; serological investigation; dairy cow; Jinshan district

S852.659.1

1674-6422（2017）05-0073-03

2017-07-11

张晓锋，男，博士研究生，高级兽医师，主要从事农产品质量安全、农业科技推广和重大动物疫病防控应急管理

陈鸿军，E-mail：vetchj@shvri.ac.cn；范红结，E-mail：fhj@njau.edu.cn