高效液相色谱法测定诺氟沙星滴眼液中羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯含量

张艳，杨颖

（江苏省连云港市药品检验所，江苏连云港222006）

·检验检测·

高效液相色谱法测定诺氟沙星滴眼液中羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯含量

张艳，杨颖

（江苏省连云港市药品检验所，江苏连云港222006）

目的建立同时测定诺氟沙星滴眼液中羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱采用Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为1%冰醋酸溶液－甲醇（50∶50），流速为1.0 mL/min，检测波长为255 nm，进样量为20 L，柱温为20℃。结果羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯的质量浓度线性范围分别为0.99～44.50 g/mL，5.02～52.70 g/mL，1.05～41.64 g/mL，加样回收率分别为98.37%，97.19%，99.34%，RSD分别为1.34%，1.43%，0.80%(n＝9)。结论该方法准确，专属性强，稳定，无干扰，可用于诺氟沙星滴眼液中抑菌剂的含量分析。

诺氟沙星滴眼液；高效液相色谱法；羟苯甲酯；羟苯乙酯；羟苯丙酯

诺氟沙星为第2代氟喹诺酮类抗菌药物，对体外多重耐药菌具有较好的抗菌活性。诺氟沙星滴眼液主要用于治疗细菌性结膜炎、角膜炎、眼睑炎及传染性出血性结膜炎等，效果良好，价格低廉[1]。根据2015年版《中国药典(二部)》规定，可加入适宜浓度的抑菌剂，且明确规定了如使用羟苯甲酯、羟苯丙酯为抑菌剂时，需测定2种抑菌剂含量[2]。但并非所有生产企业均使用相同的抑菌剂，部分生产企业也未在说明书明确标示抑菌剂的含量。为了更好地控制滴眼液的质量，在文献[3－6]基础上，本研究中建立了同时测定诺氟沙星滴眼液中常用抑菌剂羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯含量的高效液相色谱（HPLC）法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Aglient1260型高效液相色谱仪；Sartorius BP211D型电子天平；Milli－Q型超纯水仪（美国密理博公司）。

1.2 试药

羟苯甲酯（批号为100278－201404，纯度100%），羟苯乙酯（批号为100847－201203，纯度100%），羟苯丙酯（批号为100444－204103，纯度99.6%），均为对照品，由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯，冰醋酸为化学纯，水为超纯水；样品为6个批次市售诺氟沙星滴眼液（规格为每支8 L∶24 mg），分别来自4家药品生产企业。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

对照品溶液：分别称取羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯对照品适量，精密称定，加流动相溶解，并制成每1 mL各约含1 mg的对照品溶液，作为对照品贮备液。分别取对照品贮备液适量，加流动相制成每1 mL约含羟苯甲酯30 mg、羟苯乙酯30 μg、羟苯丙酯30 μg的混合溶液，作为混合对照品溶液。

供试品溶液：精密量取样品3 mL，置25 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流动相：1%冰醋酸溶液－甲醇（50∶50）；流速：1.0 mL/min；检测波长：255 nm；进样量：20 μL；柱温：20℃。诺氟沙星峰与羟苯甲酯峰间的分离度为3.7，其余各组分峰间的分离度均大于1.5。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系与检测限考察：分别精密量取2.1项下3种对照品贮备液各0.1，0.2，1.0，2.0，3.0，5.0 mL，分别置同一100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，制得系列浓度的对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，记录峰面积。以对照品质量浓度（μg/mL）为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线。取线性溶液继续稀释，取信噪比(S/N)约为3∶1的溶液浓度作为各成分的最低检测限。结果见表1。

精密度试验：精密吸取对照品混合溶液20 μL，重复进样6次，按拟订色谱条件测定峰面积。结果羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯峰面积的RSD分别为0.73%，0.55%，0.70%（n＝6），表明仪器精密度良好。

表1 线性关系及检测限考察结果(n＝6)

稳定性试验：精密吸取抑菌剂为羟苯甲酯、羟苯丙酯的供试品溶液Ⅰ（批号为16091401）、抑菌剂为羟苯乙酯供试品溶液Ⅱ（批号为1610153101），分别于0，2，4，6，8，12 h时进样20 μL，记录色谱图。结果羟苯甲酯、羟苯丙酯、羟苯乙酯峰面积的RSD分别为0.9%，0.9%，1.0%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：分别取诺氟沙星滴眼液供试品Ⅰ（批号为16091401）、供试品Ⅱ（批号为16091401），平行制备供试品溶液并测定含量6次，供试品Ⅰ中羟苯甲酯、羟苯丙酯平均含量的RSD分别为1.5%，1.2%（n＝6），供试品Ⅱ中羟苯乙酯平均含量的RSD为1.2%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：在空白样品（企业4的无抑菌剂添加样品）中，定量加入3个浓度水平的对照品溶液，按拟定色谱条件测定，采用标准曲线法计算防腐剂含量，计算回收率和RSD，考察方法的平均回收率。详见表2。

表2 加样回收试验结果（n＝9）

2.4 样品含量测定

按拟订色谱条件，对6批诺氟沙星滴眼液样品进行了含量测定，结果见表3。

表3 6批样品含量测定结果

3 讨论

眼用制剂在使用过程中要求保持无菌，抑菌剂的加入是必要且重要的。诺氟沙星滴眼液可加入适宜浓度的抑菌剂，2010年版《中国药典·第二增补本》中标明，如使用羟苯甲酯、羟苯丙酯或硫柳汞的一种或多种为防腐剂，需测定其含量，而2015年版《中国药典(二部)》对羟苯甲酯、羟苯丙酯的含量有限定，均规定其含量为标示量的±20%。

查阅市售样品的药品说明书，发现其处方中的抑菌剂为羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、硫柳汞钠中的一种或多种，或并未添加抑菌剂。收集的市售6批样品中，并未发现使用硫柳汞为抑菌剂的样品，使用上述3种防腐剂的含量为标示量的92%～114%，另有1家生产企业并未添加防腐剂，均在《中国药典》规定的限度范围内。

该方法可在20 min内快速检测诺氟沙星滴眼液添加的抑菌剂成分及其含量，可有效控制抑菌剂的加入量，方法灵敏、准确、重复性好，为其含量分析提供了相应的方法。

[1] 孙加伟，张雷，张存举，等.诺氟沙星滴眼液用于急性细菌性结膜炎治疗的疗效观察[J].中国实用医药，2014，9(8):175－176.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1199－1200.

[3] 赵敬丹，秦峰，杨燕，等.滴眼液中抑菌剂的快速高通量测定及抑菌效力的研究初探[J].中国药学杂志，2017，52(4):308－313.

[4] 许梦佳，杨伟峰，石云峰.HPLC测定苄达赖氨酸滴眼液中3种抑菌剂含量[J].中国现代应用药学，2015，32(11):1370－1373.

[5] 吴春敏，朱精英，池文杰，等.HPLC法快速检测苦参素注射液中8个抑菌剂及苯甲醛[J].药物分析杂志，2012，32(7):1200－1204.

[6] 易大为，马琳，张亚杰.高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液中硫柳汞和苯基汞的含量[J].中国药学杂志，2014，49(11):1004－1008.

Content Determination of Methylparaben,Ethylparaben,Propylparaben in Norfloxacin Eye Drops by HPLC

Zhang Yan,Yang Ying
(Lianyungang Institute for Drug Control,Lianyungang,Jiangsu,China222006)

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of methylparaben,ethylparaben and propylparaben in Norfloxacin Eye Drops.MethodsThe Phenomenex Gemini C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was adopted,the mobile phase was 1%acetic acid－methanol(50∶50),the flow rate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 255 nm,the injection volume was 20 μL and the column temperature was 20℃.ResultsMethylparaben,ethylparaben and propylparaben showed good linear relationship in the range of 0.99－44.50 μg/mL,5.02－52.70 μg/mL,1.05－41.64 μg/mL.The average recovery rates were 98.37%,97.19%,99.34%,respectively，the RSDs were 1.34%,1.43%,0.80%(n＝9).ConclusionThe method is accurate,reproducible and stable without interference,which can be used for the determination of bacteriostatic agent in Norfloxacin Eye Drops.

Norfloxacin Eye Drops;HPLC;methylparaben;ethylparaben;propylparaben

R927.2；R917

R927.2；R917

1006－4931(2017)21－0020－03

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.21.008

张艳，大学本科，副主任中药师，研究方向为药物分析，(电子信箱)306377461＠qq.com。

2017－06－02)