单次大量饮酒和ALDH2基因多态性与OSAHS病情的相关性研究

汪斌如+张艳+梁耕田

[摘要]目的 探討单次大量饮酒后不同时间段内阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）男性患者的病情变化。方法 选取2014年1月～2016年12月武汉市第三医院耳鼻咽喉科就诊武汉地区汉族男性42例健康成人（对照组）和50例OSAHS患者（OSAHS组），即刻大量饮酒前后进行多导睡眠呼吸监测，并检测其外周血ALDH2基因多态性。结果 OSAHS组的BMI高于对照组（P<0.01）。OSAHS组即刻饮酒后3～5 h内的AHI指数和LA/HT较饮酒前明显增加，饮酒后5 h内LSaO2较饮酒前明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。OSAHS组和对照组的野生型纯合子、突变型杂合子和突变型纯合子三种ALDH2基因型出现频率分别为76.0%（38/50）、22.0%（11/50）、2.0%（1/50）以及57.1%（24/42）、38.1%（16/42）、4.8%（2/42）。两组间三种突变基因型及其等位基因分布无明显差异（P>0.05）。OSAHS组不同ALDH2基因型之间AHI指数、最低血氧饱和度在饮酒前后差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 单次饮大量酒后3～5 h内会加重OSAHS患者的病情，其与ALDH2基因多态性无显著相关性。

[关键词]阻塞性睡眠呼吸暂停；饮酒；乙醛脱氢酶2；基因多态性

[中图分类号] R766.49 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）09（b）-0019-05

Association analysis between single massive drinking and polymorphism of ALDH2 gene and OSAHS disease

WANG Bin-ru1 ZHANG Yan2 LIANG Geng-tian1

1.Department of Otorhinolaryngology，Tongren Hospital of Wuhan University The Third Hospital of Wuhan City，Hubei Province，Wuhan 430060，China；2.Department of Pharmacy，Tongren Hospital of Wuhan University The Third Hospital of Wuhan City，Hubei Province，Wuhan 430060，China

[Abstract]Objective To explore the change of condition of obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome （OSAHS） in male patients after different time periods of single massive drinking.Methods 42 healthy males with Han nationality in Wuhan area （the control group） and 50 patients with OSAHS （the OSAHS group） in the otolaryngology department of the Third Hospital of Wuhan City from January 2014 to December 2016 were selected.Polysomnography （PSG） monitoring was performed immediately before and after massive drinking，and the peripheral blood of aldehyde dehydrogenase-2 was detected.Results The BMI in the OSAHS group was higher than that of the control group （P<0.01）.The apnea-hypopnea index （AHI） and LA/HT of in the OSAHS group increased significantly in 3-5 hours after drinking，and the lowest oxygen saturation （LSaO2） decreased significantly in 5 hours after drinking，both comparisons showed statistical differences（P<0.05）.The frequencies of ALDH2 genotypes of the wild type，the mutant heterozygous type and the mutant homozygous type in the OSAHS group and the control group were respectively 76.0% （38/50），22.0% （11/50），2.0% （1/50），and 57.1% （24/42），38.1% （16/42），4.8% （2/42）.The distribution of the 3 genotypes and their respective alleles in the 2 groups was not significantly different （P>0.05）.The index of AHI and LSaO2 of different ALDH2 genotypes in the OSAHS group showed no statistical differences before and after drinking （P>0.05）.Conclusion In 3-5 hours，single massive drinking can aggravate OSAHS patients′ condition，which is not significantly associated with ALDH2 gene polymorphism.endprint

[Key words]Obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome；Drinking；Aldehyde dehydrogenase-2；Gene polymorphism

饮酒与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome，OSAHS）关系密切[1-2]，即刻大量饮酒可加重OSAHS患者睡眠呼吸暂停的频率和时程以及低氧血症的程度[2-3]。乙醛脱氢酶2（ALDH2）是人体进行酒精代谢的关键酶之一，具有高度遗传多态性，与ALDH2基因G1951A多态性密切相关[4-5]。目前有关即刻大量饮酒后不同时间段内OSAHS病情变化的研究较少。本研究通过多导睡眠图（PSG）监测即刻大量饮酒后1～8 h内OSAHS患者缺氧和低氧血症的变化，同时检测饮酒前后OSAHS与 ALDH2基因型间病情的差异，旨在探讨OSAHS与饮酒和ALDH2基因型的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

筛选2014年7月～2016年1月在武汉市第三医院耳鼻咽喉科就诊的OSAHS患者作为OSAHS组，共50例，年龄（40.15±16.45）岁，饮酒年限（7.56±10.09）年。纳入标准：成年男性，汉族，出生地为武汉市及周边，符合OSAHS诊断标准，能接受实验白酒饮酒量，排除中枢性或混合性OSAHS。同时选择武汉市及周边的汉族、男性、有饮酒史、无OSAHS疾病、未饮酒而行夜间PSG的成年健康人作为对照组，共42例，年龄（42.92±13.52）岁，饮酒年限（6.11±11.47）年。所有入选者均排除心、脑、肺及神经肌肉等疾病。研究方案经我院医学伦理学委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 OSAHS诊断标准

依据2011年中华医学会呼吸病学分会睡眠呼吸障碍学组制订的“阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征诊治指南（2011年修订版）”[7]对本病进行诊断。

1.3饮酒因素控制

大量饮酒标准：酒精在血液中的峰值浓度为酒精/体重（1 g/kg），推算出该浓度的白酒体积，所饮酒精体积（ml）=体重（kg）×酒精血中预期峰值浓度（1 g/kg）/白酒纯度×酒精密度（0.789 g/ml）[6]。所有研究对象均于晚餐后即刻饮用42°统一类型的白酒，酒后1 h开始PSG监测。

1.4 PSG监测

采用伟康公司Alice5的64导睡眠仪进行7 h PSG，观察指标为睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI指数）、最低SaO2（LSaO2）和最长呼吸暂停/低通气时间（LA/HT）。

1.5 ALDH2基因多態性检测

1.5.1脱氧核糖核酸（DNA）提取 抗凝处理后新鲜血液2 ml，TIANGEN DP318-02试剂盒通过吸附柱CB3提取基因组DNA。

1.5.2采用适时荧光定量PCR法 ALDH2多态性位点设计特异性外围上下游引物、FAM标记探针及VIC标记探针，上游引物序列为5′-TCGGGGAGTGGCCGGGAG-3′，下游引物序列为5′-ATCAAGCCCCAACAGGC-3′，引物由Invitrogen合成，FAM标记探针序列为5′-CATACACTGAAGTGA-3′，VIC标记探针序列为5′-CATACACTAAAGTGA-3′，探针由ABI合成，按照PCR反应体系：2×PCR缓冲液（购自大连宝生物有限公司）10 μl、上游引物（10 μM）0.5 μl、下游引物（10 μM）0.5 μl、FAM标记探针（10 μM）0.5 μl、VIC标记探针（10 μM） 0.5 μl、ddH2O 6 μl、DNA 2 μl配制20 μl反应体系，根据反应条件：95℃ 5 min，1个循环；95℃ 15 s，60℃ 1 min，40个循环设置荧光定量PCR仪，进行荧光定量PCR扩增，荧光定量PCR仪采用Strategene Mx3000P。

1.6统计学分析

采用SPSS 19.0统计学软件对采集数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，方差齐时两组间样本均数比较采用t检验，方差不齐采用t′检验，基因型和等位基因频率比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组一般临床资料的比较

两组的年龄、吸烟史、饮酒年限比较，差异无统计学意义（P>0.05）。OSAHS组的体重指数（BMI）高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）（表1）。

2.2单次饮酒对OSAHS的影响

将饮酒后不同时段的AHI指数和LSaO2均值与饮酒前进行比较，结果提示，OSAHS患者AHI指数在饮酒后3 h内（7 h睡眠呼吸监测时间内前2 h）低于酒前；酒后5 h的LSaO2低于酒前；酒后4 h的LA/HT高于酒前；酒后平均AHI指数高于酒前，酒后平均LSaO2低于酒前，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

2.3 OSAHS的ALDH2基因多态性检测

人类ALDH2基因突变的三种亚型基因（野生型纯合子GG、突变型杂合子GA、突变型纯合子AA）扩增曲线有较大差异（图1）。OSAHS组三种基因频率分别为76.0%（GG）、22.0%（GA）、2.0%（AA），对照组对应三种基因频率分别为57.1%、38.1%、4.8%。两组间上述突变基因型比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表3）。

C

A.野生型纯合子GG；B.突变型杂合子GA；C.突变型纯合子AA；三角形曲线示多态位点野生型（GAA）序列，方形曲线示多态位点突变型（AAA）序列，点状曲线为弱阳性内标基因曲线endprint

2.4 ADHL2不同基因型与AHI指数及LSaO2的相关性分析

ALDH2基因突变型包括杂合子和纯合子（包括GA+AA型），野生型和突变型饮酒前后AHI指数、LSaO2和LA/HT比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表4）。

3讨论

饮酒是OSAHS重要危险因素之一，酒精可能通过对神经系统的双重抑制作用参与OSAHS的发生发展[8-9]。酒精通过降低舌下神经及喉神经的活性而降低环杓后肌、肌-颏舌肌的张力，导致气道狭窄甚至闭塞；酒精还可以将中枢神经对低氧、高气道阻力的唤醒作用钝化，使阻塞性呼吸暂停持续时间延长[3，10]。酒精可导致呼吸道黏膜上皮细胞肿大，大量饮酒还可使患者睡眠呼吸暂停频率、时程加重，夜间低氧血症加重[11]。国外部分学者认为，饮酒是OSAHS重要的危险因素，而非性别、年龄及肥胖[1]。本研究结果可知，OSAHS患者即刻大量饮酒后可增加AHI指数和LA/HT，降低LSaO2，饮酒3 h内AHI指数明显升高，LSaO2下降则延迟至酒后5 h，这可能与睡眠在凌晨1～3时饮酒对机体影响程度较深，易出现缺氧和呼吸暂停有关。待饮酒后3～5 h后体内酒精储存量减小，OSAHS症状就会减轻。

人体肝脏中的乙醇脱氢酶和ALDH可将酒精最终氧化生成H2O和CO2。ALDH包括ALDH1和ALDH2两种形式，ALDH2是酒精代谢过程中的关键酶。ALDH2基因具有高度遗传多态性，可影响ALDH2的功能活性。ALDH2基因的G1951A位点包含纯合野生型ALDH2*1/2*1（GG）、杂合突变型ALDH2*1/2*2（GA）及纯合突变型ALDH2*2/2*2（AA）三种基因型。GG编码的ALDH具有正常的催化活性；GA编码的ALDH活性仅是正常酶的6.25%，导致该基因型携带者饮酒后体内乙醛不易被消除，乙醛水平高达野生型的6倍，而GG编码的ALDH催化能力完全丧失[12-13]。ALDH2基因型的分布存在种族、地域差异性，该基因突变型在亚洲人群中比较普遍，在欧美白种人中少见。本研究结果显示武汉地区汉族男性OSAHS患者中突变型基因的比例（24.0%）低于对照组（42.9%），但差异无统计学意义，可能与样本量较少有关。

GG型患者酒后血液中的乙醛浓度是GA型和AA型患者的19倍和3倍，乙醛在血液中蓄积，饮酒后易出现脸红、恶心、心动过速等神经系统症状，一定程度上限制了ALDH2型饮酒量[14]。国内有学者报道OSAHS患者ALDH2不同基因型之间AHI、LSaO2、最长呼吸暂停时间均无统计学差异[15-16]。本研究结果显示，ALDH2基因G1951A多态性可能与男性OSAHS饮酒者的AHI、LSaO2无相關。推测可能原因为：①研究对象地区较局限，样本量较小，影响结果。② 乙醇脱氢酶和ALDH是目前仅有确定饮酒行为相关的基因[9]，需研究多基因的交互作用与OSAHS的相关性。③即刻大量饮酒后患者耐受性不同导致不易暴露ALDH2突变基因对OSAHS的影响，需研究饮酒频率与基因多态性的关系。以上疑问课题组将继续进行后续研究。

本研究显示，单次大量饮酒后3～5 h内对OSAHS患者的呼吸暂停和缺氧都有显著影响。OSAHS的发病机制及并发症的形成与氧化应激关系密切[17]。课题组前期研究显示，OSAHS通过氧化应激造成患者海马和脑皮质代谢紊乱而影响认知功能[15，18]，故对于饮酒的OSAHS患者，在饮酒后的5 h内保持上呼吸道通畅尤为重要，不仅会避免误吸，还会减轻OSAHS对患者心脑血管等多器官功能的损害。

[参考文献]

[1]Malia D，Sanchez-Gascon F，Ros JA，et al.Factors with influence on sleep apnea/hypopnea syndrome[J].Med CIin（barc），2005， 125（18）：681-684.

[2]Tanigawa T，Taehibana N，Yamagishi K，et al.Usual alcohol consumption and arterial oxygen desaturation during sleep[J].JAMA，2004，292（8）：1923-1925.

[3]刘建红，雷志坚，王武，等.饮酒对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的影响[J].中华保健医学杂志，2011，13（2）：92-94.

[4]Masaki T，Mochizuki H，Matsushita S，et al.Association of aldehyde dehydrogenase-2 polymorphism with alcoholic polyneuropathy in humans[J].Neurosci Lett，2004，363（3）：288-290.

[5]张庆，吴瑞芹，何权瀛，等.饮酒在睡眠呼吸暂停低通气综合征患病率流行病学研究中的意义[J].医学与哲学，2006， 27（8）：56-57.

[6]Berry RB，Bonnett MH，Light RW.Effect if alcohol on the arousal response to airway occlusion during sleep[J].Am Rev Respir Dis，1992，145（2 Pt 1）：445-452.

[7]中华医学会呼吸病学分会睡眠呼吸障碍学组.阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征诊治指南（2011年修订版）[J].中华结核和呼吸杂志，2012，35（1）：9-12.

[8]许海波，曾黎，骆剑伟，等.肥胖与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的关系研究[J].中国当代医药，2012，19（30）：29-30.endprint

[9]Stradling JR，Crosby JH.Predictors and prevalence of obstmetive sleep apnoea and snoring in 1001 middle aged men[J].Thorax，1991，46（2）：85-90.

[10]羅怀容，张亚平.乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因研究进展及其与饮酒行为的关系[J].遗传，2004，26（2）：263-266.

[11]Herzog M，Riemann R.Alcohol ingestion influences the nocturnal cardio-respiratory activity in snoring and non-snoring males[J].Eur Arch Otorhinolaryngol，2004，261（8）：459-462.

[12]韩京军，高新跃，吴志华，等.ALDH2基因多态性对乙醇相关性DNA氧化损伤中影响的研究[J].中华肿瘤防治杂志，2010，17（9）：648-650.

[13]刘燕，李兴祥，王朝才，等.青海藏族人群ADH3、ALDH2基因多态性及其与饮酒行为的关系[J].卫生研究，2011， 40（6）：784-786.

[14]李克明，唐汉庆，赵玉峰，等.右江流域壮族人群酒精依赖程度与ADH和ALDH基因多态性的关联性研究[J].右江医学，2017，45（1）：29-31.

[15]杨静，李南方，李涛，等.乙醛脱氢酶基因G1951A多态性及饮酒量与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的相关性[J].中华结核和呼吸杂志，2008，31（6）：463-465.

[16]李南方，杨静，祖菲亚，等.男性高血压病患者长期饮酒与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征[J].中华高血压杂志，2007， 15（10）：817-822.

[17]付发样，毛俊文.阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与氧化应激的研究[J].中国当代医药，2011，18（25）：21-22.

[18]汪斌如，徐先荣，梁耕田，等.中重度OSAHS患者海马及脑皮质代谢紊乱与认知功能障碍的相关性研究[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2015，29（7）：607-611.

（收稿日期：2017-06-19 本文编辑：祁海文）endprint