红毛七的抗炎、镇痛作用研究

2017-10-27李晓春王莉芳徐长根

中国医药导报 2017年25期

李晓春+王莉芳+徐长根

[摘要] 目的考察红毛七的抗炎、镇痛作用。方法将小鼠按體重随机分为模型对照组（CMC-Na），阳性对照组，红毛七水提取物低、中、高剂量组（3、9、27 g/kg，以生药计），每组各10只，灌胃给药，每天1次，连续7 d。采用二甲苯致小鼠耳肿胀法测定小鼠耳肿胀度；采用纸片致肉芽增生模型，测定小鼠肉芽肿抑制率，以考察红毛七水提取物的抗炎作用；采用乙酸扭体法测定小鼠扭体反应潜伏期及15 min内扭体次数；采用热板法测定小鼠给药前及给药30、60、90、120 min后痛阈值，以考察红毛七水提取物的镇痛作用。结果与模型对照组比较，红毛七水提取物中、高剂量组可减轻小鼠耳肿胀度（P < 0.05或P < 0.01），高剂量组可以减轻肉芽组织干重（P < 0.05），红毛七水提取物中、高剂量组可延长小鼠扭体反应潜伏期并减少扭体次数（P < 0.05或P < 0.01），提高给药30、60 min后的痛阈值（P < 0.05或P < 0.01），且高剂量组可以提高给药90、120 min后的痛阈值（P < 0.05或P < 0.01）。结论红毛七水提取物有一定的抗炎、镇痛作用。

[关键词] 红毛七；水提取物；抗炎；镇痛；动物药效学

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）09（a）-0026-04

[Abstract] Objective To investigate the anti-inflammatory and analgesic effects of Caulopyhllum robustum water extract. Methods The mice were randomly by weight divided into model group （CMC-Na）， positive control group， Caulopyhllum robustum water extract low-dose， medium-dose and high-dose groups （3， 9， 27 g/kg， calculated by crude drug）， each group had 10 mice. They were given relevant medicine intragastrically， once a day， for consecutive 7 d. The xylene-induced ear edema method was used to determine the degree of ear edema. Paper-induced granuloma model was used to determine the inhibition ratio of granulation tissue hyperplasia， the anti-inflammatory activity of Caulopyhllum robustum water extract was investigated. The pain incubation period and the number of writhing within 15 minutes were determined by acetic acid writhing method. Pain thresholds of mice were determined by hot-plate test before and after medication 30， 60， 90， 120 minutes， the analgesic effect of Caulopyhllum robustum water extract was investigated. Results Compared with model group， Caulopyhllum robustum water extract medium-dose and high-dose groups could restrain the degree of ear edema of mice （P < 0.05 or P < 0.01）； the high-dose group could decrease the dry weight of granulation tissue （P < 0.05）. Caulopyhllum robustum water extract medium-dose and high-dose groups could prolong the pain incubation period， decrease the number of writhing in mice within 15 minutes （P < 0.05 or P < 0.01）， and extended pain thresholds of mice 30， 60 minutes after medication （P < 0.05 or P < 0.01）， the high-dose group could also extend pain thresholds of mice 90， 120 minutes after medication （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion Caulopyhllum robustum water extract possesses anti-inflammatory and analgesic effects.

[Key words] Caulopyhllum robustum； Water extract； Anti-inflammatory； Analgesic； Animal pharmacodynamicsendprint

红毛七，“太白七药”之一，为小檗科植物类叶牡丹（Caulophyllum robustum Maxim.）的根和根茎[1]，味苦，微甘，性平，具活血散瘀、祛风除湿、行气止痛等功效，民间常以其煎汤口服亦可浸酒或研末，用于月经不调、经期少腹结痛、跌打损伤、关节炎、劳伤等的治疗[2-3]。目前，关于红毛七的研究多集中在化学成分分析方面[4-8]。据《陕西中草药》记载，“红毛七具活血散瘀，祛风止痛等作用”。《陕甘宁青中草药选》记载，“红毛七可以治疗关节炎、跌打损伤”。但迄今未见相关实验性报道。基于此，本研究以二甲苯致小鼠耳肿胀、纸片致小鼠肉芽增生、乙酸扭体法和热板法等经典的药理学方法，考察红毛七的抗炎、镇痛作用，以期为红毛七的进一步开发和临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

昆明种小鼠，雌雄兼用，1.5月龄，体重18～22 g，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，实验动物质量合格证号：SCXK（陕）2012-003。飼养环境：温度22～26℃，相对湿度40%～70%。

1.1.2 实验药材、药品、试剂

红毛七，采自太白山，由陕西省食品药品监督检验研究院樊宝娟副主任药师鉴定为红毛七的干燥根和根茎。阿司匹林肠溶片，批号：BJ32774，拜耳医药保健有限公司；吲哚美辛肠溶片，批号：G160402，山西云鹏制药有限公司；二甲苯，分析纯，批号：20120208，国药集团化学试剂有限公司；乙酸，分析纯，批号：20120831，国药集团化学试剂有限公司；水为纯净水；羧甲基纤维素钠（CMC-Na），化学纯，批号：20120330，国药集团化学试剂有限公司。

1.1.3 实验仪器

ZH-YLS智能热板仪，安徽正华生物仪器设备有限公司；BS2202S电子天平，塞多利斯仪器有限公司；DZ-18C真空干燥箱，天津泰斯特仪器有限公司；LABORTA4001旋转薄膜蒸发仪，德国Heidoph；YLS-25A电动耳肿打耳器，济南益延科技发展有限公司。

1.2 方法

1.2.1 红毛七水提取物的制备

取红毛七药材100 g，加1000 mL冷水，大火煮沸后改为小火煎煮3 h，滤出药汁，留渣重新加入1000 mL冷水，方法同上煎煮3 h，滤出药汁，留渣再加入1000 mL冷水，方法同上煎煮2 h，合并三次煎液，过滤，滤液用旋转蒸发仪于60℃浓缩成浸膏，真空干燥箱中干燥，粉碎成粉末，得到17.4 g红毛七水提取物，使用前用0.5%CMC-Na研匀，混悬均匀。

1.2.2 红毛七抗炎作用的考察

1.2.2.1 分组红毛七水提取物的给药剂量参考《陕西中草药》每日用量15～25 g，取其高量25 g，按照体表面积折算为小鼠的等效剂量约为生药3 g/kg[9]，结合本实验室前期研究结果，以该等效剂量（3 g/kg）为低剂量，低、中、高剂量组按照1∶3∶9的剂量比例设置。取健康昆明种小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组各10只。模型对照组灌胃给予0.5%CMC-Na；阳性对照组灌胃给予阳性药；红毛七水提取物低剂量组给予红毛七水提取物0.52 g/kg，相当于红毛七生药3 g/kg；红毛七水提取物中剂量组给予红毛七水提取物1.56 g/kg，相当于红毛七生药9 g/kg；红毛七水提取物高剂量组给予红毛七水提取物4.68 g/kg，相当于红毛七生药27 g/kg。各组给药体积均为0.2 mL/10 g，每天给药1次，连续7 d。

1.2.2.2 小鼠耳肿胀法[10] 动物分组及给药方法、剂量同“1.2.2.1”项下，阳性对照组灌胃给予阳性药阿司匹林（500 mg/kg）。末次给药1 h后小鼠左耳廓两面均匀涂抹致炎剂二甲苯20 μL/只，右耳不做任何处理为正常耳。1 h后小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下双耳用7 mm直径打孔器分别在双耳同一部位打下圆形耳片并称质量，计算耳肿胀度和耳肿胀抑制率。耳肿胀度=左耳片质量（mg）-右耳片质量（mg）。耳肿胀抑制率（%）=（模型对照组耳肿胀度-给药组耳肿胀度）/模型对照组耳肿胀度×100%。

1.2.2.3 小鼠肉芽增生法[11-13] 动物分组及给药方法、剂量同“1.2.2.1”项下，阳性对照组给予吲哚美辛（20 mg/kg）。小鼠乙醚麻醉后，无菌条件下将一个经高压灭菌并称重的滤纸片植入左侧鼠蹊部，随即缝合。于次日各组小鼠给予相应药物，每天1次，连续7 d，末次给药后1 h，脱颈椎处死小鼠，打开原切口取出纸片及周围包裹的肉芽组织，剔除脂肪组织，60℃烘干24 h，称其质量，计算肉芽肿抑制率。肉芽肿抑制率=（模型对照组肉芽肿质量-给药组肉芽肿质量）/模型对照组肉芽肿质量×100%。

1.2.3 红毛七镇痛作用的考察

1.2.3.1 小鼠乙酸扭体法[10] 动物分组及给药方法、剂量同“1.2.2.1”项下，阳性药为吲哚美辛（20 mg/kg）。末次给药1 h后，各组小鼠均ip 0.6%乙酸（临用前配制，0.1 mL/10g）致痛。观察各组小鼠开始出现扭体反应（扭体表现为躯干伸张、腹部内凹、臀部抬高）的时间（即扭体潜伏期）及15 min内出现扭体反应的次数，计算疼痛抑制率[14-16]。疼痛抑制率=（模型对照组扭体反应次数-给药组扭体反应次数）/模型对照组扭体反应次数×100%。

1.2.3.2 小鼠热板法[10] 取健康昆明种雌性小鼠，置于（55±0.5）℃热板测痛仪中，以舔后足作为疼痛反应指标，记录小鼠从放入测痛仪至出现疼痛反应所需时间（痛阈值），<5 s或>30 s或跳跃者弃去不用。将初筛合格的小鼠各测2次痛阈值，每次间隔10分钟，取其平均值作为给药前正常痛阈值。筛选合格的小鼠分组及给药方法、剂量同“1.2.2.1”项下，阳性药为吲哚美辛（20 mg/kg）。分别于末次给药后30、60、90、120 min测定小鼠痛阈值，若60 s内无疼痛反应，立即取出小鼠，痛阈值按60 s计[15-16]。endprint

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 红毛七抗炎作用的考察结果

2.1.1 红毛七水提取物对小鼠耳肿胀的影响

阳性对照组和红毛七水提取物中、高剂量组小鼠耳肿胀度均小于模型对照组，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01），红毛七水提取物低剂量组小鼠耳肿胀度小于模型对照组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.1.2 红毛七水提取物对小鼠肉芽增生的影响

阳性对照组肉芽组织湿重和干重均低于模型对照组，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。红毛七水提取物高剂量组肉芽组织干重低于模型对照组（P < 0.05），其肉芽组织湿重与模型对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。红毛七水提取物低、中剂量组可以减轻肉芽组织湿重和干重，但与模型对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.2 红毛七镇痛作用考察结果

2.2.1 红毛七水提取物对乙酸致小鼠扭体反应的影响

阳性对照组和红毛七水提取物中、高剂量组小鼠扭体反应潜伏期较模型对照组延长（P < 0.05或P < 0.01），红毛七水提取物低剂量组小鼠扭体反应潜伏期较模型组有所延长，但差异无统计学意义（P > 0.05）。阳性对照组和红毛七水提取物中、高剂量组小鼠扭体反应次数少于模型对照组（P < 0.01），红毛七水提取物低剂量组小鼠扭体反应次数与模型对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

2.2.2 红毛七水提取物对热板法小鼠痛阈值的影响

给药前，各组小鼠的痛阈值差异均无统计学意义（P > 0.05）。阳性对照组和红毛七水提取物高剂量组在给药30、60、90、120 min后，均能提高小鼠痛阈值，与模型对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）；红毛七水提取物低剂量组小鼠痛阈值高于模型对照组，但差异无统计学意义（P > 0.05）；红毛七水提取物中剂量组小鼠在给药30、60 min后，痛阈值较模型对照组提高（P < 0.05），但在给药90、120 min后，痛阈值与模型对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表4。

3 讨论

炎性反应可概括为早、中、晚三期，即血管反应、细胞反应及组织增生三个阶段。早期炎症的主要表现是毛细血管扩张、通透性亢进、渗出和水肿，中期炎症主要是白细胞向炎灶聚集，晚期炎症则以炎灶屏障形成和组织增生为特点[17]。热板法系利用一定强度的温热刺激动物躯体某一部位以产生痛反应，以刺激开始至出现反应的潜伏期为测痛指标，是一种高位中枢参与的反应[18-23]。雄性小鼠可因阴囊下垂而受到刺激及损伤，所以选择雌性小鼠。本实验应尤为注意控制室温恒定，维持在（18±1）℃，可通过增加筛选次数挑选出对痛反应时间波动小的动物。扭体法为筛选非麻醉性镇痛药物的常用方法，系应用化学刺激物注入小鼠腹腔内，引起深部、大面积且较持久的疼痛刺激，致使小鼠产生扭体反应。本法是筛选弱镇痛药的敏感、简便方法。

红毛七盛产于陕西，尤其在秦岭南北坡广泛分布，民间应用历史比较悠久。本研究通过建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型考察红毛七水提取物对炎性反应早期炎性水肿的影响，建立纸片致小鼠肉芽增生模型考察红毛七水提取物对炎性反应晚期增生性病变的作用，结果表明，红毛七水提取物能够减轻小鼠的耳肿胀度，减少纸片所致肉芽增生，表现出一定的抗炎作用。同时，采用乙酸扭体法考察红毛七水提取物的外周镇痛作用，热板法考察红毛七水提取物的中枢镇痛作用，结果表明，红毛七水提取物能延长痛反应潜伏期，减少扭体次数，提高小鼠的痛阈值，表现出一定的镇痛作用。有研究证实，红毛七含有生物碱和三萜皂苷类成分[19]，它们是否为其发挥抗炎镇痛作用的物质基础，还有待进一步研究证实。同时，对于红毛七抗炎镇痛作用的相关机制也将成为下一步研究的重点，相信这对进一步了解红毛七将会是有益的探索。

[参考文献]

[1] 宋小妹，刘海静.太白七药研究与应用[M].北京：人民卫生出版社，2011.

[2] 陕西省革命委员会卫生局、商业局.陕西中草药[M].北京：科学出版社，1971.

[3] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海人民出版社，1977.

[4] 樊宝娟，吴芳，柳小秦，等.红毛七质量标准研究[J].西北药学杂志，2013，28（6）：575-577.

[5] 王倩，陆云阳，邱瑞桂，等.太白产红毛七生物碱成分的研究[J].中南药学，2016，14（2）：134-137.

[6] 马养民，邢华，刘建军，等.太白七药红毛七化学成分研究[J].安徽农业科学，2012，40（2）：745-747.

[7] 王玉梅，王倩，张倩，等.红毛七的皂苷成分研究[J].中南药学，2016，14（1）：12-15.

[8] 但飞君，蔡正军，田瑛，等.红毛七化学成分的研究[J].中成药，2011，33（6）：1011-1014.

[9] 王四旺，施新猷，黄传贵，等.中药药效学研究与评价[M].西安：陕西科学技术出版社，2005.

[10] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，1991.

[11] 李呈华，王珍.金花消痤胶囊抗炎镇痛作用的实验研究[J].安徽中医临床杂志，2000，12（4）：298-299.