反相高效液相色谱法测定利伐沙班原料药的含量

黄艳 陈雪云 杨雪峰 符乃光 刘侠

[摘要] 目的 建立反相高效液相色谱法测定利伐沙班的含量。方法 色谱柱为ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）；以乙腈-水（40：60）为流动相；流速1.0 mL/min，检测波长为250 nm。结果 利伐沙班在浓度为10.15～30.45 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好（r=0.999 9，n=5），平均回收率为99.64%（RSD为0.16%，n=9）。 结论 方法准确度、精密度良好，适用于利伐沙班的含量测定。

[关键词] 高效液相色谱法；利伐沙班；含量

[中图分类号] R7 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）06（b）-0041-02

[Abstract] Objective To establish the reversed phase high-performance liquid chromatography in measuring the content of rivastopharan raw drug. Methods Chromatographic column was ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）， and acetonitrile/water（40：60）was the mobile phase and the velocity was 1.0 mL/min，and the test wavelength was 250 nm. Results The concentration of rivastopharan had a good liner correlation with peak area in 10.15～0.45 μg/mL，（r=0.999 9，n=5）， and the average recycle rate was 99.64%（RSD，0.16%，n=9）. Conclusion The accuracy of the method is good with good precision， which is suitable for the content measurement of rivastopharan.

[Key words] High-performance liquid chromatography； Rivastopharan； Content

抗凝藥物在预防血栓中发挥重要作用，但传统的抗凝药物如肝素需胃肠道外给药，院外使用不便。口服抗凝药如华法林治疗窗窄，需经常监测凝血酶原时间，给患者使用带来不便。新型口服抗凝剂利伐沙班（rivaroxaban）是直接Xa因子抑制剂，具有使用方便、无需监测的优点[1]。利伐沙班对Xa因子具有高度的选择性，用于髋或膝关节置换术后静脉血栓栓塞症的预防，体内活性和生物利用度极好，具有良好的应用前景[2-3]。为了保证药品的有效性，现对自制的利伐沙班原料药的含量测定方法进行研究，建立了高效液相色谱法（HPLC）测定利伐沙班的含量。方法简便、快速，准确度、精密度良好，适用于利伐沙班的质量控制。

1 仪器与试药

岛津LC-2010AHT色谱仪，安捷伦1260Bin Pump VLb泵，安捷伦1260DVD VL检测器，Agilent色谱工作站，乙腈为色谱纯，水为双蒸水，利伐沙班（自制，批号为20140801、20140901、20140902），利伐沙班对照品（MedChem Express，批号为03201）。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

取利伐沙班供试品适量，精密称定，加乙腈超声溶解并稀释制成约含利伐沙班20 μg/mL的溶液，作为供试品溶液；另取利伐沙班对照品适量，精密称定，加乙腈超声溶解并稀释制成约含利伐沙班20 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

2.2 色譜条件与系统适用性试验

色谱柱为ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）；以乙腈-水（40：60）为流动相；检测波长为250 nm；柱温：30℃；流速1.0 mL/min。精密量取2.1项下供试品溶液、对照品溶液及空白溶剂各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。理论塔板数按利伐沙班主峰计算为2 800，利伐沙班主峰的拖尾因子为1.02，空白溶剂不干扰利伐沙班的含量测定，色谱条件满足系统适用性试验要求。

2.3 进样精密度

取2.1项下的对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，连续进样6次测定，结果各色谱峰面积的RSD为0.69%。表明方法的进样精密度良好。

2.4 线性关系考察

取利伐沙班对照品适量，精密称定，加乙腈稀释制成每1 mL中约含利伐沙班对照125 μg的对照品储备液，分别精密量取该溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，分别量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度C（μg/mL）对峰面积A作标准曲线，线性回归方程为：A=34089C+769.4，相关系数r=0.999 9，利伐沙班在浓度为10.15～30.45 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好。

2.5 回收率试验

取供试品（批号为20140801，含量为99.86） 8、10、12 mg各3份，精密称定，分别加入对照品适量，用乙腈配制成约相当于供试液浓度的80%、100%、120%的溶液，分别进样测定，计算回收率。结果见表1，平均回收率为99.64%，RSD为0.16%（n=9）。表明方法准确度良好。

2.6 重复性试验

取批号为20140801的样品6份及对照品适量，精密称定，照2.1项下的方法制备溶液。分别取20 μL注入液相色谱仪测定含量，RSD为0.10%。表明方法的重复性良好。

2.7 溶液稳定性试验

取批号为20140801的供试品溶液，分别在放置0、2、4、6、8、12后测定，结果主峰峰面积的RSD为1.24%，表明供试品溶液12 h内稳定。

2.8 样品含量测定

取3个批次的样品及对照品，照2.1项下的方法制备溶液并依法测定，以外标法按峰面积计算含量，结果3批供试品含量分别为99.86%、99.83%、99.79%。

3 讨论

精密称取利伐沙班对照品适量，分别加溶剂溶解并稀释制成中约含各对照品10 μg/mL的溶液，照分光光度法[4]，于190～400 nm波长范围内扫描，利伐沙班在250 nm波长处有最大吸收，参照国家食品药品监督管理局利伐沙班片JX20080077，将利伐沙班含量测定检测波长确定为250 nm。

调整柱温（25～35℃）、流速（0.8～1.2）mL/min、乙腈-水比例[（38：62）～（42：58）]及色谱柱[ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm，5 um）；inertsil ODS-3（4.6×150 mm，5 um）； Symmetry Shield RP18（4.6×250 mm，5 um）]进行试验，色谱条件仍然满足系统适用性要求，说明方法耐用性良好。

[参考文献]

[1] 柯永胜.新型抗凝药物直接Xa因子抑制剂利伐沙班[J].中国临床药理学与治疗学，2009，14（4）：361-367.

[2] 袁静，黄长江，张俊伟，等.利伐沙班的合成[J].中国新药杂志，2010，19（23）：2185-2187.

[3] 高娜娜，孙宏斌.利伐沙班衍生物的合成及Xa因子抑制活性[J].中国药科大学学报，2011，42（5）：392-399.

[4] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典（4部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

（收稿日期：2017-03-11）