两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比分析

邓 婷梁漪莲骆 琼黄慧清

（1广西桂林市自来水公司，广西桂林541001） （2广东食品药品职业学院，广东广州510520）

两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比分析

邓 婷1梁漪莲1骆 琼1黄慧清2

（1广西桂林市自来水公司，广西桂林541001） （2广东食品药品职业学院，广东广州510520）

利用多管发酵法和酶底物法检测水中的总大肠菌群与大肠埃希氏菌，对比两种方法的适用性、灵敏度等，对比分析多管发酵法和酶底物法2种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测情况。结果表明，2种方法对适用性菌株存在差异；在1 MPN/100mL浓度下，酶底物法更加灵敏；在加标样和平行样检测中，酶底物法表现更为稳定。由此可得，在水中检测总大肠菌群与大肠埃希氏菌可应用多管发酵法和酶底物法，但与多管发酵法相比，酶底物法优势显著，用时较短、操作简单、便于观察，值得推广。

多管发酵法；酶底物法；总大肠菌群；大肠埃希氏菌；检测结果

随着人们生活水平的提高，人们对自来水水质提出了更高的要求。目前，自来水微生物污染问题严峻，相关问题得到了社会各界的高度关注。近几年，我国学者报道了因自来水传播传染性疾病的诊治与预等。为了改善水质，为广大群众提供安全与健康的自来水，我国实行《生活饮用水卫生标准》，其中微生物指标有：菌落总数、总大肠菌群、大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群。《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》中提供了几种不同的检测方法，总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测方法有滤膜法、多管发酵法、酶底物法，各方法均以发酵乳糖为基础。为了明确不同方法的应用价值，本文对自来水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的2种检测方法展开了对比分析，以期为自来水中微生物检测方法的选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

MMO-MUG培养基，美国DEXX公司；乳糖蛋白胨培养基、EC-MUG培养基，青岛海博生物技术有限公司；培养箱，36℃±1℃、44.5℃±0.5℃；紫外灯，波长为366nm。

1.2 方法

1.2.1 试验前准备

选用培养基：总大肠菌群检测利用乳糖蛋白胨培养基和MMO-MUG培养基，大肠埃希氏菌检测利用EC-MUG培养基与MMO-MUG培养基。

准备：适用性菌株，EIEC培养物，加标水样，普通含菌水样，MMO-MUG培养基粉末（2.7±0.4）g；根据配制要求制备的EC-MUG培养基与乳糖蛋白胨培养液。

1.2.2 方法原理

总大肠菌群可利用MMO-MUG培养基进行检测，其可产生β-半乳糖苷酶，其可分解培养基的ONPG，此后培养基便会出现颜色变化；而大肠埃希氏菌则借助EC-MUG培养基与MMO-MUG培养基检测，其可产生β-葡萄糖醛酸酶，待其分解后可使MUG荧光底物释放出荧光产物，再经紫外灯光照射，可出现特征性荧光。

1.2.3 试验方法

1.2.3.1 适用性试验

取分装灭菌好的MMO-MUG培养液、EC-MUG培养液、乳糖蛋白胨培养液（10mL/管），向各管中分别加入试验菌混悬液，其中EC-MUG培养液于44.5℃±0.5℃的培养箱内培养，MMO-MUG培养液和乳糖蛋白胨培养液放置在36℃±1℃的培养箱内，24 h后观察结果。

1.2.3.2 灵敏度试验

取经24 h培养后的侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）培养物，将其制成0.5麦氏度菌液，10倍梯度稀释，至菌量为1500 MPN/100mL～1 MPN/100mL进行试验，每个菌液浓度做2个平行试验，对比不同细菌浓度下，多管发酵法和酶底物法的灵敏度。

1.2.3.3 稳定性试验

以10份加入EIEC的加标水样及62份水样品为研究对象，对比2种检测方法，分析其总大肠菌群结果。

2 结果与分析

2.1 适用性试验

适用性试验结果表明，多管发酵法与酶底物法用于检测宋内氏志贺氏菌、绿脓杆菌与金黄色葡萄球菌时，测定结果存在差异。适用性试验结果见表1。

表1 适用性试验结果

2.2 灵敏度试验

灵敏度试验结果表明，在1 MPN/100mL浓度下，酶底物法可见黄色与蓝色荧光；而多管发酵法未见荧光。灵敏度试验结果见表2。

表2 灵敏度试验结果

2.3 稳定性试验

以10份加标水样为研究对象进行检测，结果见表3。

表3 加标试验结果

由表3可知，酶底物法和多管发酵法结果均落在置信区间内，且2种方法之间不存在显著性差异，酶底物法结果方差较小，说明酶底物法结果的偏离度小。以62份含菌水样为研究对象进行检测，结果见表4。

表4 含菌水样试验结果

由表4可知，2种方法不存在显著性差异，根据结果分析，酶底物法在均一性方面优于多管发酵法。

3 讨 论

总大肠菌群来源于动物肠道、自然环境，具体包括柠檬酸菌属、埃希氏菌属、克雷伯氏菌属及肠肝菌属等；而大肠埃希氏菌又称大肠杆菌，其作为优势菌群，广泛分布在肠道内，在其作用下，有效保证了宿主健康及其生理功能的发挥，但如果宿主免疫力、抵抗力下降，其组织器官受细菌侵入，则会诱发肠外感染，随之便形成了致病性大肠埃希氏菌，常出现腹泻等肠道疾病。我国在相关标准中增设了关于大肠埃希氏菌的检验要求，经调查发现，常见的污染指标有3种，分别为大肠埃希氏菌、总大肠菌群及粪大肠菌群，在水、食品加工方面，为了明确其卫生状况，常选用总大肠菌群为指标；而在粪便污染、卫生处理方面，常选用大肠埃希氏菌为指标。

目前，在全球范围内，酶底物法的应用较为广泛与普遍，经不断探索与实践，此方法日渐成熟，国家与相关组织大多推荐应用酶底物法，同时也使用多管发酵法与滤膜法等，上述方法均收录于《生活饮用水标准检验方法微生物指标》。我国检测部门以多管发酵法为主，在检测实践中，需要稀释样品、记录阳性管数、检索查找等，试验开始到得出结果所需时间约为48 h，与其相比，酶底物法操作简便、耗时较少，不仅提高了工作效率，也保证了检测质量。

为了了解2种检测方法的应用价值，本文选用多管发酵法与酶底物法进行了对比研究。适用性试验结果表明，2种方法对试验采用的适用性菌株的测定结果存在差异；经灵敏度试验可知，与多管发酵法相比，酶底物法更加灵敏，在1 MPN/100mL浓度下仍可稳定检出。

稳定性试验结果表明，2种方法没有表现出显著性差异，但与多管发酵法相比，酶底物法的时间较短，其在24 h内便可完成，且操作简单。

综上所述，与多管发酵法相比，应用酶底物法检测自来水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌，更加有效、便捷，值得推广。

［1］杨静.致泌尿道感染的菌群分布、大肠埃希菌耐药性分析及其基因型初步研究［D］.安徽：安徽医科大学，2012：8-12.

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振兴民族工业的人民科学家微生物学奠基人方心芳院士诞辰110周年纪念活动在太原举行

2017年3月16日，纪念《山西醋》作者方心芳院士诞辰110周年纪念活动在太原召开。大会由中国微生物学会、中国生物工程学会发起主办，山西省食品科学技术学会、山西省食品工业研究所协办，山西老陈醋集团有限公司承办。来自海内外的专家学者、酿醋同行以及方老的家人等参加此次纪念会。中国微生物学会常务副秘书长杨海花，中国生物工程学会常务副秘书长张宏翔，山西老陈醋集团有限公司董事长、国家级非物质遗产代表性传承人郭俊陆，中国科学院微生物所研究员、方心芳研究专家程光胜，中国微生物学先驱、开拓者方心芳之子方定一，台湾中华酒业发展协进会秘书长欧阳港生，国家文化部原副部长、国家图书馆名誉馆长周和平等发表了主题演讲。会后，方心芳院士家属及各级领导等共同为方心芳院士雕塑揭幕。

（山西老陈醋集团有限公司）

Two methods'comparative analysis of detecting total coliform bacteria and E.colibacteria in water

DENG Ting1*LIANG Yilian1LUO Qiong1HUANG Huiqing2

1（Guangxi guilin water company，Guangxi Guilin 541001，China）

2（Guangdongfood and drugvocational college,Guangdong Guangzhou510520，China）

By using the multiple tube fermentation and enzyme substrate method to detect total coliform bacteria and E.coli bacteria in water,compared the applicability,sensitivity of the two methods.The results show that the two methods of applicability strains is different；Under 1 MPN/100mL concentration,enzyme substrate method is more sensitive.In the prototype and parallel sample tests,enzyme substrate performance is more stable.Multiple tube fermentation and enzyme substrates can be used in water detection of total coliforms and e.coli,but compared with the multiple tube fermentation,enzyme substrate has advantage significantly,short and simple operation,easy to observe,and is worth promoting.

multi-tube fermentation；enzyme substrate；total coliformbacteria；E.coli bacteria；test results

TS207.4

A

1673-6044（2017）01-0052-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.01.015

*邓婷，女，1984年出生，2009年毕业于中山大学生物化学与分子生物学专业，工程师。

2016-12-01