核酸检测法应用于血液标本内乙肝病毒检测结果分析

田家强　杨丽萍

【摘要】 目的 对核酸检测法应用于血液标本内乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）检测的结果进行探究分析。方法 23465份无偿献血的血液标本， 实施酶联免疫吸附法（ELISA）和核酸检测法（HBV-DNA）， 筛查HBV感染情况。对两种检测方法的结果进行分析。结果 核酸检测法的特异性和敏感程度均优于酶联免疫吸附法（P<0.05）。核酸检测法漏诊情况少于酶联免疫吸附法， 差异有统计学意义（P<0.05）；核酸检测法窗口期为（20.9±4.2）d， 少于酶联免疫吸附法（35.8±6.3）d（P<0.05）。结论 将酶联免疫吸附法和核酸检测法联用可以减少漏诊情况， 减少窗口期， 此外核酸检测法的特异性和敏感程度很好， 可以很好的检测乙肝病毒使得所输血液的安全性得到保障。

【关键词】 核酸检测法；乙型肝炎病毒；检测结果；血液标本

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.023

目前检测乙肝病毒最常用的方法是酶联免疫吸附法， 利用血清进行检测[1]。但是核酸检测法更加可靠， 更为方便， 近年被广泛应用于血液筛查中[2]。本次研究利用酶联免疫吸附法和核酸检测法对献血站采集的血液进行检测， 具体情况如下所示。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 将本站收集的无偿献血的血液标本23465份， 进行酶联免疫吸附法和核酸检测法。

1. 2 方法 每份血液标本都通过正定血型的初筛以及干化学检测法检测谷丙转氨酶（ALT）， 所有献血者符合实验要求。將采集的每份血液标本分装于3个试管中， 2个试管进行酶联免疫吸附法检测， 所需器材为抗凝真空管。另一个试管进行核酸检测法， 所需器材为分离胶抗凝真空管。将每个试管上都贴唯一性条形码， 试管上的条形码与血袋标签上的条形码一致， 通过条形码能够读取其有关血液的具体信息。利用离心机将血液现场离心然后存放于4℃的冰箱内， 需要在2 d内完成检测。

1. 2. 1 仪器和相关试剂 酶联免疫吸附法需要仪器为哈美顿STAR全自动加样仪（瑞士）， FAME24/20型全自动酶免分析仪；HBV-DNA检测需要用到的仪器为上海科华核酸检测系统：Hamilton MICROLAB STAR全自动混样提取仪、ABI 7500核酸扩增检测仪；低温离心机。酶免试剂：HBV血清学标志物检测试剂盒（上海科华、北京万泰）；核酸检测试剂：乙肝病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1型）核酸检测试剂（PCR-荧光法）（上海科华）。以上所有试剂均在有效期内使用。乙肝两对半检测也用酶免试剂， 由枣庄市立三院进行检测。

1. 2. 2 检测方法 所有进行检测的血液标本依据国家《献血者健康要求》[3]按卫计委要求进行初检、复检。所有标本进行ALT速率法检测、乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-HCV、抗-HIV和梅毒的酶联法检测， 去掉所有阳性标本后， 再进行血液标本核酸检测法检测。如果核酸检测结果呈反应性再进行HBV血清标志物检测检测， HBV血清标志物：HBsAg、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）、乙肝核心抗体（HBcAb）。

1. 3 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数± 标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2 检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两种方法的特异性和敏感程度比较 核酸检测法的特异性和敏感程度均优于酶联免疫吸附法（P<0.05）。见表1。

2. 2 两种方法的漏诊情况和窗口期比较 核酸检测法漏诊情况少于酶联免疫吸附法， 差异有统计学意义（P<0.05）；核酸检测法窗口期为（20.9±4.2）少于酶联免疫吸附法（35.8±

6.3）（P<0.05）。见表2。

3 讨论

乙肝病毒传播的主要方式为血液传播， 我国是乙肝病毒感染的多发国家， 对献血人群的血液标本进行乙肝病毒检测极为重要， 对无偿献血人群的血液进行检测也可阻止乙肝病毒的传播[4-6]。酶联免疫吸附法是最为多见的检测乙肝病毒的方法， 是进行临床诊断和血液筛查的主要手段[7]。由于医学技术的发展， 近年来核酸检测法也不断被应用于血液筛查工作中， 此方法更加方便可信， 也是对酶联免疫吸附法的一种补充[8]。

由上述研究结果可以得知， 核酸检测法的特异性和敏感程度优于酶联免疫吸附法， 其漏诊情况和窗口期少于酶联免疫吸附法检测， 核酸检测法的窗口期相当于酶联免疫吸附法检测的1/2。此外两种方法的检测结果有一定的差异， 在进行研究的血液标本中有10份血液标本经过酶联免疫吸附法检测为阳性， 经过核酸检测法为阴性， 初步判断是由于乙肝患者使用药物血液中有HBsAg残留导致检测的差异；有15份血液标本经酶联免疫检测法检测为阴性， 经核酸检测法检测为阳性， 初步判断为乙肝病毒感染早期， 酶联免疫吸附法不能检测到而核酸检测可以检测到[9， 10]。

综上所述， 酶联免疫吸附法与核酸检测法在检测结果存在差异性， 但这两种方法具有互补性， 此外核酸检测法相对于酶联免疫吸附法检测更加可靠， 减少漏诊情况， 可以有效减少乙肝病毒的传播， 可以将核酸检测法广泛应用于血液标本内乙肝病毒检测。

参考文献

[1] 祝继华， 严立， 陈瀑， 等. ELISA法在检测乙肝标志物中的应用和评价. 重庆医科大学学报， 2009， 34（10）：1397-1399.

[2] 姜伟超. 650例慢性乙肝患者HBV-M、HBV-DNA同步检测分析. 胃肠病学和肝病学杂志， 2013， 22（2）：141-143.

[3] 蔡杰， 许纪玲， 陆玉婷， 等. 大容量样本病毒浓缩HCV核酸检测方案的研究. 临床和实验医学杂志， 2014（13）：1070-1073.

[4] 王志宏， 李辉. 核酸检测法对血液标本内乙肝病毒的检测价值分析. 河北医学， 2016， 22（12）：2097-2099.

[5] 周锐华. 核酸检测与酶联免疫吸附检测在无偿献血血液标本乙肝病毒筛查中的应用比较. 中国保健营养， 2017， 27（12）：231-232.

[6] 陈红， 王亚彬， 倪龙凤， 等. 核酸与ELISA检测联合应用于血液筛查的结果分析. 中国输血杂志， 2014， 27（8）：847-848.

[7] 苏俊， 骆冬云. 核酸检测与酶联免疫吸附检测在无偿献血血液标本乙肝病毒筛查中的应用价值比较. 中国乡村医药， 2015， 22（16）：58-59.

[8] 刘丹. 核酸检测应用于献血者血液筛查的临床分析. 检验医学与临床， 2015（23）：3578-3580.

[9] 张妍， 朱海峰， 孙波， 等. 核酸检测技术在血液筛查中的应用及分析. 中国输血杂志， 2012， 25（12）：1298-1300.

[10] 李莉华， 马印图. 核酸检测技术应用于血液筛查的检测效能分析. 第三军医大学学报， 2015， 37（16）：1692-1694.

[收稿日期：2017-05-15]endprint