hCMV肝炎婴儿尿hCMVgH基因型分析

李 云，宁怀军，何筱胤

hCMV肝炎婴儿尿hCMVgH基因型分析

李 云，宁怀军，何筱胤

目的探讨人巨细胞病毒（hCMV）肝炎婴儿尿hCMV包膜糖蛋白H（gH）基因型分型情况。方法2014年5月～2016年5月我科收治的80例hCMV肝炎患儿，采用荧光定量法检测尿hCMVDNA，采用直接测序法鉴定hCMVgH基因分型。结果在80例患者中，鉴定出gH1型40例（50.0%），gH2型32例(40.0%)，gH1/gH2型8例(10.0%)；gH1型hCMV肝炎组尿hCMV DNA水平为（2.55±0.32）×105copies/ml，显著高于gH1/gH2型hCMV肝炎组的（3.05±0.50）×103copies/ml，或gH2型hCMV肝炎组的（3.62±0.48）×103copies/ml（P＜0.05）；gH1型患儿血清ALT水平显著高于其他两型患儿（P＜0.05）。结论hCMV感染患儿以gH1型和gH2型为主，其基因型检测的意义还有待于进一步研究。

人巨细胞病毒肝炎；包膜糖蛋白H；婴儿

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，hCMV）是疱疹病毒中最大的一种DNA病毒，在世界范围内感染非常普遍。据有关资料显示，我国是hCMV感染的高发地区，儿童血清抗hCMV阳性率为83.2%～87.3%，成人高达95%[1]。虽然hCMV是一种弱致病病毒，但是在一定条件下能侵袭免疫功能低下的人群，进而导致严重疾病。近年来，随着人们生活水平的提高以及艾滋患者等免疫功能低下人群的增多，人们越来越重视hCMV感染。婴儿是hCMV的易感人群，并且肝脏成为其机体内重要的靶器官[2]。hCMV包膜糖蛋白H（gH）基因在病毒识别宿主细胞膜受体、侵犯细胞、诱导宿主免疫反应等方面发挥着重要作用。本文分析了hCMV肝炎婴儿hCMVgH基因型的变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年5月～2016年5月我科收治的hCMV肝炎患儿80例，男52例，女28例；年龄3d～9个月，平均（3.6±2.0）个月。符合hCMV感染诊断标准，并经检查明确诊断为hCMV肝炎。患者血清ALT轻中度升高，轻中度肝脾肿大。排除药物性肝损伤和代谢性肝病。本研究通过我院医学伦理委员会批准，征得患儿家属同意，并签署知情同意书。

1.2 尿hCMVDNA检测和hCMVgH基因分型采集患儿晨尿，离心2次后保留沉淀，在沉淀中加入DNA提取液，沸水浴10min，离心取上清液。使用hCMV AD培养液（北京乐博生物科技有限公司）进行DNA抽提[3]。采用荧光定量法检测hCMVDNA（日本Takara公司）。采取传统多重PCR联合酶切法行hCMVgH基因分型，使用RsaⅠ、HinfⅠ限制性内切酶进行酶切，然后将酶切产物加入样孔，使用电泳仪电泳30 min，在紫外灯下观察条带大小，并使用全自动测序仪测序[4]。

1.3 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件进行处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同hCMV感染患者尿hCMVDNA水平比较 在80例患者中，鉴定出gH1型40例（50.0%），gH2型 32例（40.0%），gH1/gH2型8例（10.0%）；gH1型hCMV肝炎组尿hCMV DNA水平为（2.55±0.32）×105copies/ml，显著高于gH1/gH2型 hCMV 肝炎组的（3.05±0.50）×103copies/ml，或gH2型hCMV肝炎组的（3.62±0.48）×103copies/ml（P＜0.05）。

2.2 不同hCMV感染患者血生化指标的比较见表1。

表1 不同gH 型hCMV感染患者血生化指标（±s）比较

表1 不同gH 型hCMV感染患者血生化指标（±s）比较

与其他两组比，①P＜0.05

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3 讨论

胎儿及婴儿的免疫力低下，是hCMV肝炎的高危人群。hCMV在多数免疫正常个体中呈非显性的亚临床感染，但在胎儿、婴儿及免疫功能低下个体却常表现出明显的临床病症。人体在感染hCMV后，宿主的很多组织细胞中都会有病毒潜伏，通常无法将其彻底清除，这种情况下在宿主免疫系统受损后往往会激活潜伏病毒而引发相关疾病[5]。

作者单位：530003南宁市 广西壮族自治区妇幼保健院儿科

hCMV基因组DNA能够编码两百余种蛋白，其中gH、gB、gcll是最重要的几种膜糖蛋白，pp150、pp65、非毒力蛋白IE1是最重要的几种结构蛋白[6]。gH是hCMV薄膜上分布较多的糖蛋白，也是hCMV肝炎发生、发展过程中诱导机体免疫应答的重要抗原物质，其能诱导机体产生特异性gH抗体，从而发挥保护作用[7，8]。有学者对血清hCMV阳性患者进行了gH特异性Th细胞增殖反应，结果显示Th细胞与gH的作用位点均在 15～510位氨基酸之间，34～51表位与AD169株特异性B细胞抗原表位接近[9，10]。还有动物实验研究显示，CMV gH基因复制缺陷型腺病毒鼻内感染小鼠血清检测到特异性抗hCMV gH抗体，说明gH抗体可对hCMV感染发挥保护作用[11，12]。目前，国内关于hCMV gH基因型的研究较少，且多针对器官移植患者，较少以婴儿hCMV感染病例为对象[13-16]。

gH基因可分为gH1、gH2、gH1+gH2型，gH1型已经成为婴儿CMV肝炎的优势基因型[17，18]。因gH1型糖蛋白复合物具有一些特征，相对于gH2或gH1+gH2型，容易导致组织损伤。加之gH1型gH和gL介导的病毒会进入成纤维细胞，而不是进入gH、gL、gO复合体，从而造成了gH1型hCMV肝炎患儿肝损伤更为严重[19]。

本研究将hCMVgH基因型分为 gH1型、gH2型、gH1+gH2型三种，其中gH1型hCMV肝炎患儿40例（50%），gH2型hCMV肝炎患儿32例（40%），gH1+gH2型hCMV肝炎患儿8例（10%），与现有研究结果基本吻合，且进一步验证了gH1型为婴儿hCMV肝炎的优势基因型。gH1型hCMV肝炎患儿尿hCMVDNA水平为（2.55±0.32）×105copies/ml，gH2型 hCMV 肝炎为（3.62±0.48）×103copies/ml，gH1+gH2 型为（3.05±0.50）×103copies/ml，三者相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。此外，gH1型hCMV肝炎患儿血清ALT水平为（108.57±2.47）U/L，显著高于其他两型患儿。由此，可推测不同hCMV gH基因型可能与hCMV肝炎不同的临床表现有关，并且gH1基因型hCMV更容易引起肝损害[20]。

综上所述，hCMV gH基因型以gH1型和gH2型为主，其可能与婴儿hCMV肝炎临床特征有关，值得继续深入研究。

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（收稿：2016-10-17）

（本文编辑：陈宗炳）

Urine hCMV gH genotype in hCMV-infectedinfants

Li Yun，Ning Huaijun，He Xiaoyin.Department of Pediatrics，Maternal and Child Health Care Hospital，Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530003

Human cytomegalovirus hepatitis；Envelope glycoprotein H；Infant

10.3969/j.issn.1672-5069.2017.05.022

李云，女，35岁，硕士研究生，主治医师。主要从事儿童消化与感染性疾病研究。E-mail-xiehuixhw@163.com