肝细胞癌中性肽链内切酶和二肽基肽酶IV表达水平对手术切除术后患者预后的影响

牛福勇，李福荣

肝细胞癌中性肽链内切酶和二肽基肽酶IV表达水平对手术切除术后患者预后的影响

牛福勇，李福荣

目的探讨肝癌组织中性肽链内切酶（NEP）和二肽基肽酶IV（DPPⅣ）表达水平对肝细胞癌（HCC）患者肝癌切除术后预后的影响。方法选择2008年1月～2013年7月北京第301医院肝胆外科行肝癌切除治疗的HCC患者42例，选择同时期检查的42例肝良性肿瘤患者肝组织作为对照。采用免疫组化法检测NEP和DPPⅣ。采用 Kaplan-Meier法进行无复发生存（RFS）曲线和总生存（OS）曲线绘制，采用 Cox比例风险回归模型进行多因素分析，确定影响RFS和OS的因素。结果NEP和DPPⅣ蛋白均定位于HCC细胞胞浆；HCC组织NEP蛋白阳性率为78.6%（33/42），DPP Ⅳ蛋白阳性率为71.4%（30/42），NEP和PP Ⅳ蛋白双阳性率为54.8%（23/42），均显著高于正常组织【2.4%（1/42）、4.8%（2/42）和 0.0%（0/42），P＜0.05】；经单因素和多因素分析显示，肿瘤分化、NEP 表达、DPPⅣ表达、NEP和DPPⅣ共表达、复发、癌细胞远处转移是影响HCC患者RFS和OS的独立危险因素；生存曲线显示，HCC组织NEP阳性、DPPⅣ阳性和NEP/DPPⅣ均阳性表达者RFS和OS显著缩短，预后差。结论NEP和DPPⅣ表达水平是HCC患者预后不良的危险因素。

肝细胞癌；中性肽链内切酶；二肽基肽酶IV；免疫组化；预后

作者单位：719000 陕西省榆林市第一医院肝胆外科

中性肽链内切酶（Neutral endopeptidase，NEP）是存在于细胞膜表面的II型膜蛋白，是含锌金属肽酶M13家族中重要一员[1～3]。有研究指出，NEP在不同组织中的表达及活性变化与某些疾病的发生和预后存在一定的关联[4～6]。二肽基肽酶IV（Dipeptidyl peptidase IV，DPPⅣ）是一种膜结合蛋白，其活性酶是一种具有二肽肽酶活性的同源二聚体[7]。有文献报道，DPPⅣ在甲状腺癌、乳腺癌和胃癌等的侵袭和转移中发挥着重要作用[8，9]。本研究采用免疫组化染色法检测了HCC组织NEP和DPPⅣ表达水平，以探讨其对HCC切除术患者无复发生存（Recurrence-free survival，RFS） 和总生存（Overall survival，OS）的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2008年1月～2013年12月本作者在北京301医院肝胆外科进修期间诊治的行手术切除治疗的HCC患者42例，男23例，女19例；年龄32～76岁，平均年龄（57.3±18.2）岁。HCC诊断按照世界卫生组织《HCC诊断标准》[10]，肿瘤分化参照Edmondson分级标准[11]，肿瘤分期参照美国癌症联合会第七版标准[12]。切除标准符合外科肿瘤完整切除、边缘未发现癌组织、局部受侵犯淋巴结清扫的标准，手术边缘＞1cm。选择同时期检查的42例肝良性肿瘤患者作为对照。本研究获得北京第301医院和我院医学伦理学委员会批准，所有研究对象签署知情同意书。

1.2 检测方法 采用免疫组化SP法检测HCC肿瘤组织NEP和DPPⅣ表达（上海通蔚科技有限公司）。

1.3 统计学方法 应用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料采用x2检验。采用 Kaplan-Meier法进行无复发生存曲线和总生存曲线绘制，采用 Cox比例风险回归模型进行多因素分析，确定影响RFS和OS的因素。检验水准为α=0.05，即P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC组织和正常肝组织NEP和DPPⅣ表达情况 癌组织NEP和DPPⅣ蛋白呈棕黄色阳性表达，均定位于HCC细胞胞浆（图1）。在42例HCC癌组织中，NEP蛋白阳性33例（78.6%），DPPⅣ蛋白阳性30例（71.4%），NEP和PPⅣ蛋白双阳性23例（54.8%），而在正常肝组织则分别为1例（2.4%、2例（4.8%）和0例（0%，P＜0.05）。

2.2 不同肿瘤特征HCC组织NEP和DPPⅣ表达情况比较 不同肿瘤分化、肝门淋巴结侵犯、癌细胞远处转移、复发组织NEP表达阳性率存在差异（P＜0.05）；肿瘤分化、癌细胞远处转移组织DPPⅣ表达阳性率存在差异（P＜0.05）；肿瘤分化、肝门淋巴结侵犯、癌细胞远处转移、复发组织NEP和DPPⅣ表达阳性率存在差异（P＜0.05，表1）。

表1 不同特征癌组织NEP和DPPⅣ表达（%）比较

图1 HCC组织NEP和DPPⅣ表达情况（SP，200×）a：HCC组织NEP呈强阳性表达；b：HCC组织DPPⅣ呈强阳性表达；c：HCC组织NEP呈弱阳性表达；d：HCC组织DPPⅣ呈弱阳性表达；e：HCC组织NEP呈阴性表达；f：HCC组织DPPⅣ呈阴性表达

2.3 HCC肿瘤组织NEP和DPPⅣ表达与患者预后的关系 42例 HCC患者 1 a、3 a、5 a的 OS和RFS 分别为 57.1%（24/42）和 52.4%（22/42）、42.9%（18/42）和 38.1%（16/42）及 28.6%（12/42）和 23.8%（10/42）。经多因素分析，结果显示肿瘤分化程度、NEP和DPPⅣ表达强度、NEP和DPPⅣ双表达、复发和癌细胞远处转移是影响HCC患者OS和RFS的危险因素（表2）。生存曲线显示，HCC组织NEP和DPPⅣ阳性及NEP和DPPⅣ双阳性患者OS和RFS显著缩短，与NEP和DPPⅣ阴性的HCC患者比，OS和RFS差异显著（P＜0.05，图2）。

图2 HCC肿瘤组织抗原不同表达患者OS和RFS比较a：NEP高表达与低表达患者OS曲线；b：NEP高表达与低表达患者RFS曲线；c：DPP IV高表达与低表达患者OS曲线；d：DPP IV高表达与低表达患者RFS曲线；e：NEP和DPP IV高表达与低表达患者OS曲线；f：NEP和DPP IV高表达与低表达患者RFS曲线

表2 影响HCC患者预后的多因素分析

3 讨论

本组42例HCC患者临床特征显示，不同肿瘤分化、肝门淋巴结侵犯、癌细胞远处转移、复发患者癌组织NEP表达阳性率存在差异（P＜0.05），不同肿瘤分化、癌细胞远处转移组织DPPⅣ表达阳性率存在差异（P＜0.05），不同肿瘤分化、肝门淋巴结侵犯、癌细胞远处转移、复发组织NEP和DPPⅣ表达阳性率存在差异（P＜0.05）。研究结果显示，NEP和DPPⅣ蛋白在HCC组织的表达与上述因素相关，或许凸显出NEP和DPPⅣ阳性表达在肿瘤分子调控及鉴别诊断方面的重要性。

NEP的组织定位及作用底物较为广泛，该蛋白可通过裂解生物活性肽，间接调节蛋白质的代谢作用，在细胞生长、分化、增殖和凋亡过程中发挥重要作用。既往，该蛋白主要用于恶性淋巴瘤和急性白血病等血液系统肿瘤的鉴别及诊断，并在非造血系统肿瘤的诊断方面有一定的指导意义[13，14]。DPPⅣ作为一种重要的基质蛋白降解酶，在肿瘤的侵袭、转移等过程中发挥重要作用。先前文献报道显示，该蛋白在乳腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌均有高表达。已有大量文献报道NEP或DPPⅣ在肿瘤患者预后方面的预测价值[15]。张发政等研究结果显示NEP蛋白在肺癌阳性表达与肺癌的临床分期、组织分化程度及有无淋巴结转移有关，是影响患者预后的危险因素[16]。张梦真等研究结果显示DPPⅣ蛋白高表达预示着卵巢上皮性癌患者预后不良[17]。也有研究提示NEP和DPPⅣ蛋白高表达预示着HCC患者预后不良[15]。NEP同样存在于消化道上皮表面，如肝内胆管细胞膜表面[18，19]。此外，Kim的研究指出肝硬化患者血清NEP活性与血清胆红素和碱性磷酸酶等呈正相关，提示检测NEP对疾病的严重程度有提示作用[20]。目前，有关NEP和DPPⅣ蛋白对HCC患者预后价值的报道较少。本研究结果显示，NEP和DPPⅣ蛋白均定位于HCC细胞胞浆。NEP蛋白在HCC的阳性表达率为78.6%，DPPⅣ蛋白为71.4%，与正常组织NEP和DPPⅣ阳性表达率相比差异显著（P＜0.05）。研究结果说明NEP和DPPⅣ蛋白在癌组织中高表达。此外，42例HCC患者1 a、3 a、5a的 OS 和 RFS 分别为 57.1%（24/42）和52.4%（22/42）、42.9%（18/42） 和 38.1%（16/42）、28.6%（12/42）和 23.8%（10/42）。研究结果还显示肿瘤分化、NEP表达、DPPⅣ表达、NEP和DPPⅣ均表达、复发、癌细胞远处转移是影响HCC患者OS和RFS的预后因素。

综上所述，NEP和DPPⅣ表达水平与HCC患者预后相关，NEP阳性、DPPⅣ阳性和NEP和DPPⅣ均阳性表达HCC患者OS和RFS显著缩短，预后较差。

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（收稿：2016-10-25）

（本文编辑：陈从新）

Implication of neutral endopeptidase and dipeptidyl peptidaseⅣexpression in hepatocellular carcinoma tissues

Niu Fuyong，LiFurong.DepartmentofHepatobiliary Surgery，FirstHospital，Yulin 719000，Shaanxi Province，China

Objective To investigate the implication of neutral endopeptidase （NEP） and dipeptidyl peptidase（DPP） Ⅳ in hepatocellular carcinoma tissues.Methods Cancerous tissues were obtained from 42 patients with hepatocellular carcinoma （HCC） after hepatectomy，and 42 benign liver tissues at the same time were also obtained for control in the Department of Hepatobiliary Surgery，Beijing 301st Hospital between January 2008andJuly2013.TheexpressionofNEPandDPPⅣincanceroustissuesweredetectedby immunohistochemical staining.Patients were checked-up every 3 months after operation.Kaplan-Meier method was used to draw the recurrence-free survival（RFS） curves and overall survival（OS） curves.Cox proportional hazards regression multivariate analysis was performed to determine the influencing factors of RFS and OS.Results NEP and DPP Ⅳ proteins were both located in the cytoplasm of hepatocellular carcinoma cells；The positive rates of NEP protein，DPP Ⅳ protein and double NEP and DPP Ⅳ protein in patients with hepatocellular carcinoma were 78.6%（33/42），71.4%（30/42） and 54.8%（23/42），respectively，all significantly higher than in normal liver tissues[2.4%（1/42），4.8%（2/42） and 0.0%（0/42），P＜0.05]；Multivariate analysis demonstrated that tumor differentiation，NEP expression，DPP Ⅳ expression，NEP and DPPⅣ co-expression，recurrence and metastasis of cancer were the prognostic factors of RFS and OS in patients with HCC；The survival curves showed that RFS and OS were significantly shortened and the prognosis was poorerin patients with NEP or DPPⅣor both of them positive in cancerous tissues.Conclusion The expression of NEP and DPPⅣmight be the risk factors for the poor prognosis in patients with HCC.

Hepatocellular caicinoma；Neutral endopeptidase；Dipeptidyl peptidase Ⅳ；Immunohistochemical staining；Prognosis

10.3969/j.issn.1672-5069.2017.05.013

牛福勇，男，33岁，大学本科，主治医师。主要从事腹腔镜下胆道疾病和肝癌的治疗学研究。E-mail:niufuyong1983@163.com