对VITEK 2-Compact肺炎链球菌GP68药敏卡的性能评估

熊安英， 黄 鹂， 马 莉， 黄 梅

对VITEK 2-Compact肺炎链球菌GP68药敏卡的性能评估

熊安英， 黄 鹂， 马 莉， 黄 梅

目的评估VITEK 2-Compact肺炎链球菌GP68药敏卡的性能，以E试验为参比方法。方法收集2015年1－12月98株肺炎链球菌，采用VITEK 2-Compact AST-GP68药敏卡进行药敏测定，结果与E试验结果进行对照。结果按CLSI标准，98株肺炎链球菌中青霉素的分类符合率（CA）为80.6%、严重错误（VME）为0、重大错误（ME）为12.2%、微小错误（mE）为7.1%；头孢曲松CA为90.8%、VME为0、ME为4.1%、mE为5.1%；头孢噻肟CA为91.8%、VME为0、ME为5.1%、mE为3.1%；美罗培南CA为85.7%、VME为0、ME为2.0%、mE为12.2%；阿莫西林、厄他培南、红霉素、四环素、氯霉素、泰利霉素、利奈唑胺、万古霉素、喹诺酮类（莫西沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星）、甲氧苄啶-磺胺甲唑CA为100%。结论VITEK 2-Compact AST-GP68由于检测原理缺陷使其对某些抗菌药物如青霉素、头孢曲松、头孢噻圬、美罗培南等的药敏试验结果出现假耐药现象，临床在遇到此类现象时，需采用其他方法进行复核确认。

VITEK 2-Compact； 肺炎链球菌； 性能评估

Abstract: ObjectiveTo evaluate the performance of GP68 Antibiotic Susceptibility Testing card in testing the susceptibility ofStreptococcus pneumoniaeon VITEK 2-Compact system, taking E-test as reference.MethodsA total of 98 strains ofS.pneumoniaewere collected and subjected to susceptibility testing using E-test and VITEK 2-Compact (AST-GP68) in Luzhou People’s Hospital form January 1 to December 31, 2015.ResultsAccording to the breakpoints of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), category agreement (CA) of penicillin was 80.6%. Very major error (VME) was 0. Major error (ME) was 12.2%, minor error (mE) was 7.1%. CA of ceftriaxone was 90.8%, VME 0, ME 4.1%, mE 5.1%. CA of cefotaxime was 91.8%, VME 0,mE 5.1%, mE 3.1%. CA of meropenem was 85.7%, VME 0, ME 2.0%, mE 12.2%. CA of other antibiotics (amoxicillin, ertapenem,erythromycin, tetracycline, chloramphenicol, telithromycin, linezolid, vancomycin, moxi fl oxacin, o fl oxacin, levo fl oxacin) was 100%.ConclusionsAST-GP68 on VITEK 2-Compact system may have false results of antimicrobial resistance to some antibiotics such as penicillin, ceftriaxone, cefepime, meropenem due to the defects of the underlying principle. Such false results should be veri fi ed by other methods in clinical practice.

Key words:VITEK 2-Compact;Streptococcus pneumoniae; performance evaluation

肺炎链球菌是引发社区获得性肺炎、急性中耳炎、鼻窦炎、血流感染、支气管炎以及侵袭性感染的重要病原菌之一[1-2]。在儿童和老年人以及免疫力低下者中有极高发病率和死亡率[3]。据报道，由于抗菌药物的广泛使用，近年来肺炎链球菌对青霉素类、红霉素、碳青霉烯类、喹诺酮等抗菌药物耐药率居高不下，呈现逐年增加的趋势[4]，使治疗面临困难，因此合理选用抗菌药物已成为临床医师亟需解决的问题，而准确、快速的药物敏感性测试能极大地满足临床治疗的需要。因此本课题就自动化的微生物鉴定药敏分析仪对肺炎链球菌药敏测定卡GP68的灵敏度和准确度进行评估，为临床合理用药提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 菌株

收集泸州市人民医院2015年1－12月临床送检标本中的肺炎链球菌共98株，质控菌株ATCC49619来源于四川省临床检验中心。

1.2 主要试剂与仪器

试验VITEK 2-Compact全自动微生物鉴定药敏分析仪（生物梅里埃公司），E试验条购自生物梅里埃诊断产品公司，肺炎链球菌的鉴定与药敏用生物梅里埃的VITEK 2-Compact仪及其配套鉴定卡和药敏卡，细菌分离培养用哥伦比亚琼脂平皿。

1.3 检测流程

所有肺炎链球菌均接种于哥伦比亚琼脂，35 ℃，5% CO2中培养20～24 h后并挑取单个菌落传代1次，于35 ℃ CO2培养18～24 h。以0.45%NaCl 3 mL无菌液制备0.50～0.63麦氏菌悬液。以配套加样器吸取肺炎链球菌菌悬液，加入另一含有3 mL无菌盐水的试管中，混匀。其余步骤按说明书操作进行。同时以E试验法为参比方法，测定肺炎链球菌对抗菌药物的敏感性。对出现严重错误（VME）或重大错误（ME）者进行重复测定。

1.4 结果分析

2种方法所测结果均按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）所提供的折点判读为敏感、中介和耐药。①分类符合率（CA）：2种方法分类结果一致者；② VME：参比方法结果为耐药，测试方法结果为敏感，即假敏感；③ME：参比方法结果为敏感，测试方法结果为耐药，即假耐药；④微小错误（mE）：参比方法结果为中介，测试方法结果为敏感或耐药，或参比方法结果为敏感或耐药，而测试方法结果为中介。

2 结果

2.1 药敏结果

以E试验法结果为参比，VITEK 2-Compact药敏卡对红霉素、氯霉素、万古霉素、四环素、甲氧苄啶-磺胺甲唑、厄他培南、泰利霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、莫西沙星、利奈唑胺的CA为100%，青霉素（以非脑膜炎折点计算）的CA为77.6%，头孢曲松、头孢噻肟、阿莫西林和美罗培南的CA分别为90.8%、91.8%、92.9%和85.7%，见表1。

2.2 GP68药敏卡所测青霉素与E试验药敏结果比较。

在98株肺炎链球菌菌株中，GP68所测青霉素的MIC在0.06～1 mg/L58株，用E试验复核后结果全部≤1 mg/L，其CA为100%；而GP68测的青霉素MIC≥2 mg/L 40株，用E试验复核后结果有一半以上为敏感或者中介，使其CA只有45.0%、ME达37.5%、mE达17.5%。

3 讨论

肺炎链球菌是上呼吸道的正常寄生菌，当机体防御机制发生改变就有可能引起严重感染如肺炎、脑膜炎、血流感染。近年来，肺炎链球菌对青霉素等多种抗菌药物的耐药程度呈逐年增加趋势，加重了临床治疗的难度，引起国内外学者的密切关注。当前全球有15%～30%的肺炎链球菌为多重耐药（MDR）菌株，即对3类及3类以上抗菌药物耐药[5]。有研究报道，肺炎链球菌的高耐药率与大量使用抗菌药物和抗菌药物使用剂量不足有关[6]。因此正确的药敏结果可以帮助临床医师合理选用抗菌药物，减缓细菌耐药性产生。

药敏试验方法有纸片扩散法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和E试验法。E试验法作为一种检测细菌或真菌对抗菌药物敏感性试验的方法，其结果可与微量肉汤稀释法具有良好的一致性[7]。在98株肺炎链球菌-抗菌药物组合中，青霉素CA为80.6%，ME为12.2%，mE为7.1%。本实验结果显示，当GP68测得青霉素的MIC在0.06～1 mg/ L，用E试验复核后结果全部≤1 mg/ L，其标准符合率为100%；当测得青霉素MIC≥2mg/ L以后，用E试验复核后结果有一半以上为敏感或者中介，使其标准符合率只有45.0%，而ME高达37.5%，mE达17.5%。出现此现象的原因可能与VITEK 2-Compact系统检测原理有关，一般只检测3～4个抗生素浓度，就可以推算出6种独立的生长模式，从而报告出6种不同的MIC值。因此药敏卡中3～4个抗生素浓度并不是传统意义上的折点浓度，在GP68卡中青霉素有0.03、0.06、0.25、0.5 （mg/ L）4个药敏浓度，但结果却能通过推测覆盖到2 mg/ L，正如前文所示，由GP68所得到的MIC并不是真正意义上的MIC，是通过其检测原理推测出来的。按照CLSI的折点标准，中介为4 mg/ L，耐药为≥8 mg/L，应用自动药敏系统报告的耐青霉素肺炎链球菌中就包括了敏感菌株、中介菌株以及耐药菌株，因此就出现了肺炎链球菌对青霉素耐药率增加，这与龚松迪等[5]描述的结果相符。当出现较多的ME 和 mE时就会导致青霉素的中介和耐药率假性升高，这可能与卡片上抗生素浓度覆盖不够导致药敏结果出现漂移，从而导致对青霉素有10.2%假耐药。目前全国范围肺炎链球菌对青霉素的耐药率大约为4.0%[5]，本研究中用E试验法复核后耐药率大约为2.0%，与全国肺炎链球菌对青霉素耐药率符合。同样出现 ME 和 mE还有美罗培南、头孢曲松和头孢噻肟。龚迪松等[5]指出，头孢曲松和头孢噻肟的敏感率有较大幅度下降与第三代头孢菌素折点值的调整和药敏方式从纸片扩散法更改为细菌自动鉴定系统有重要关系。而GP68药敏卡中其余抗菌药物MIC与E试验相比其标准符合率都为100%。

表1 98株肺炎链球菌VITEK 2-Compact药敏结果与E试验法药敏结果比较Table 1 The results of susceptibility testing of 98 strains ofStreptococcus pneumoniaeby VITEK 2-Compact AST-GP68 and E-test

CLSI规定，当青霉素对于非脑膜炎肺炎链球菌分离株的MIC ≤ 0.06 mg/L（或苯唑西林抑菌圈直径≥ 20 mm）时，可预报下列β内酰胺类药物为敏感：氨苄西林（口服或注射的）、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、头孢克洛、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢洛林、头孢唑肟、头孢曲松、头孢呋辛、多利培南、厄他培南、亚胺培南、氯碳头孢、美罗培南和青霉素（口服的或注射的），即只要仪器法的青霉素MIC ≤ 0.06 mg/L时，对上述抗生素应为敏感。因此，当在实验中发现肺炎链球菌对青霉素的结果呈中介或耐药时，需用其他方法进行复核确认。

临床治疗细菌感染性疾病以细菌药敏报告结果作为主要依据，药敏结果的准确与否直接关系到治疗效果，由于本研究中菌株数量有限，国内尚无关于对VITEK 2-Compact AST-GP68药敏卡的性能评估报道，因此有必要对导致假耐药如青霉素、头孢曲松、头孢噻圬、美罗培南等抗菌药物结果的准确性进行进一步测定。上文提到的措施可获得较为准确的药敏结果，为临床治疗提供用药依据和减少抗菌药物的滥用，保质保量地把检验结果反馈给临床，更好地为临床服务。

[1] BOKAEIAN M， KHAZAEI HA， JAVADIMEHR M.Nasopharyngeal carriage， antibiotic resistance and serotype distribution ofStreptococcus pneumoniaeamong healthy adolescents in Zahedan[J]. Iran Red Crescent Med J， 2011，13（5）：328-333.

[2] BOGAERT D， DE GROOT R， HERMANS PW.Streptococcus pneumoniaecolonisation： the key to pneumococcal disease[J]. J Lancet Infect Dis，2004，4（3）：144-154.

[3] VASOO S， SINGH K， HSU LY， et al. Increasing antibiotic resistance inStreptococcus pneumoniaecolonizing children attending day-care centres in Singapore[J]. Respirology， 2011，16（8）：1241-1248.

[4] 姚开虎，张敬仁. 国内耐药肺炎链球菌的流行现状[J].传染病信息，2011，24（2）：120-124.

[5] 龚松迪，华春珍，李建平，等. 2006—2014年我院1109例肺炎链球菌感染及其耐药模式分析[J]. 中国抗生素杂志，2015，40（11）：859-864，880.

[6] 王偲，刘岚，谢伟，等.全自动微生物系统在临床肺炎链球菌药敏试验中的应用[J].中华检验医学杂志，2009，32（8）：931-934.

[7] 张晓冬，徐莉. E-test法和NCCLS微量法检测念珠菌对氟康唑的敏感性[J].中国皮肤性病学杂志，2006，20（4）：243-244.

Performance evaluation of the GP68 Antibiotic Susceptibility Testing card in testing the susceptibility of Streptococcus pneumoniae on VITEK 2-Compact system

XIONG Anying, HUANG Li, MA Li, HUANG Mei. （Department of Laboratory Medicine, Luzhou People's Hospital, Luzhou Sichuan 646000, China）

R378.14

A

1009-7708 ( 2017 ) 05-0558-04

10.16718/j.1009-7708.2017.05.014

2016-09-26

2017-04-24

泸州市科技局课题 [2013-S-46(2/6)]。

泸州市人民医院检验科，四川泸州 646000。

熊安英（1982—），女，硕士研究生，主要从事细菌耐药性监测。

黄梅，E-mail：326785086@qq.com。