T淋巴细胞亚群及维生素D水平与衰老的关系

宁 芳 陈发秀 梅 洵 邱元芝 胡 坚

(江西省人民医院一部，江西 南昌 330006)

T淋巴细胞亚群及维生素D水平与衰老的关系

宁 芳 陈发秀 梅 洵 邱元芝 胡 坚

(江西省人民医院一部，江西 南昌 330006)

目的探讨随年龄增长T淋巴细胞表型、血清25-羟维生素D〔25-(OH)D〕水平变化的规律。方法将216例健康体检对象按年龄分成3组，组1为非老年组(18～60岁)85例，组2为非高龄老年组(61～80岁)76例，组3为高龄组(>80岁)55例；均采用四色免疫荧光标记流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群、化学发光分析仪测定血25-(OH)D水平。结果①各年龄组外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+都在正常范围内，组间无统计学差异(P>0.05)。组1 CD3+明显高于组2和组3(P<0.05)。②组1CD95阳性明显高于组2和组3(P<0.05)。③组2血清25-(OH)D水平明显低于组1和组3(P<0.05)。④血清25-(OH)D水平与年龄呈负相关(r=-0.021，P<0.05)，与T细胞亚群CD95呈正相关(r=0.17，P<0.05)。结论随着年龄增长T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+变化不明显，CD3+明显下降，CD95表达水平逐渐增高，而血清25-(OH)D逐渐降低，提示D95、25-(OH)D有可能成为评价免疫衰老潜在的生物学标志物。

T淋巴细胞亚群；维生素D；免疫；衰老

衰老是指随着年龄增长而产生的一系列生理和解剖学方面的变化，也是人体对内、外环境适应能力逐渐下降的表现，是机体代谢过程的必然阶段。研究表明，机体免疫系统功能随衰老而不断下降〔1〕。近年研究发现维生素 D 不仅是钙、磷代谢的重要生物调节因子，也是重要的免疫功能调节剂。维生素D缺乏与临床多种疾病有关，尤其与老年病密切相关，而维生素D缺乏随着年龄增长发生率增加。本文分析不同年龄阶段人群的T淋巴细胞总T细胞(CD3+)、辅助T细胞(CD4+)、细胞毒T细胞(CD8+)、CD95(Fas/Apo-1)的分布及血清25-羟维生素D〔25-(OH)D〕水平，探讨T淋巴细胞亚群和血清25-(OH)D水平与衰老之间的关系。

1 资料与方法

1.1研究对象 2010年1月至2013年12月到江西省人民医院体检中心体检的人员216例，年龄18～93〔平均(60.4±34.6)〕岁，并据年龄分为：组1为非老年组(18～60岁)85例，男61例，女24例，平均年龄(42±15.8)岁；组2为非高龄老年组(61～80岁)76例，男53例，女23例，平均年龄(70.7±10.3)岁；组3为高龄老年组(>80岁)55例，男40例，女15例，平均年龄(85.7±5.6)岁。排除标准：严重器质性内分泌疾病，如甲状腺疾病、甲状旁腺功能亢进等；继发性高血压、恶性高血压；严重肝、肾功能异常；心脏瓣膜病、心肌病；重度贫血、骨髓瘤等影响骨代谢疾病；急性感染、恶性肿瘤；肾切除或维持透析患者；半年内曾服用活性维生素D药物、长期卧床、营养不良、半年内有骨折史、长期服用激素、免疫抑制剂等药物者。

1.2一般资料收集 包括病史(高血压、糖尿病、冠心病、恶性肿瘤、骨折等)，血常规，肝肾功能，血脂。

1.3T淋巴细胞亚群测定 抽取空腹静脉血2 ml，采用三色或四色直接免疫荧光染色法染色，然后采用Becton Dickinson公司的流式细胞仪FACSCalibur和软件CellQuest进行三色或四色荧光参数获取及分析。所有测定都在相同的仪器设定下进行，每个样品收集10 000个细胞的参数。表面分子的相对密度以平均荧光强度(MFI)表示。试剂购自Exalpha公司(美国)的CD4/CD8/CD3四色试剂，抗人Fas(CD95)-藻红蛋白(PE)购自晶美生物工程有限公司，由专人严格按照说明书操作。

1.4血清25-(OH)D水平测定 抽取空腹静脉血5 ml，采用罗氏Cobase601全自动化学发光分析仪测定，其试剂盒购自罗氏公司，由专人严格按照说明书操作。

1.5统计学方法 采用SPSS19.0软件进行非配对t检验、两变量间相关性采用直线相关分析。

2 结 果

2.1各组外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平比较 各组外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+百分比都在正常范围内，但组间无统计学差异(P>0.05)。组1 CD3+百分比明显高于组2和组3(P<0.05)，随年龄增长外周血T淋巴细胞亚群CD3+百分比呈下降趋势，见表1。

2.2各组外周血T淋巴细胞亚群CD95表达水平比较 组2 CD3+、CD4+、CD8+细胞的CD95阳性率明显高于组1且明显低于组3(P<0.05)，随年龄增长外周血T淋巴细胞亚群CD95表达率上调，见表2。

表1 各组外周血T细胞亚群水平比较

与组1比较：1)P<0.05

表2 各组外周血T淋巴细胞亚群CD95表达水平比较

与组2比较：1)P<0.05

2.3各组血清25-(OH)D水平比较 组2血清25-(OH)D水平〔(49.2±24.3)nmol/L〕明显低于组1〔(80.5±27.9)nmol/L〕(P<0.05)，且明显高于组3〔(32.6±22.7)nmol/L,P<0.05〕，随年龄增长血清25-(OH)D水平降低。

2.4血清25-(OH)D水平与T淋巴细胞亚群CD95、年龄的相关性 所有研究对象中，血清25-(OH)D水平与年龄呈负相关(r=-0.021，P<0.05)，与T淋巴细胞亚群CD95呈正相关(r=0.17，P<0.05)。

3 讨 论

随着机体衰老，免疫系统表现出对抗原应答的逐渐衰退，目前研究发现T淋巴细胞在衰老过程中的改变最为明显〔2〕。T淋巴细胞介导的细胞免疫在机体免疫方面起着核心作用。正常人机体中各 T 淋巴细胞亚群之间相互作用、比例均衡，维持着机体的正常免疫功能，CD4是辅助T(Th)细胞和效应T细胞的表面标志，Th细胞通过释放多种细胞因子辅助B细胞和效应T细胞活化，上调机体的免疫功能；CD8抗原是细胞毒T细胞和抑制T细胞的表面标志。本文结果显示，老年人外周血中T淋巴细胞总数下降。但国内外研究相关结果不一致〔3，4〕。随着年龄的增长，老年人CD3+T淋巴细胞明显低于年轻人，提示老年人免疫功能的下降也可能与此相关。

CD95为神经生长因子/肿瘤坏死(TNF)受体超家族成员，主要表达于活化T淋巴细胞表面，与其配体结合可导致敏感细胞凋亡。CD95的作用表现在参与中枢免疫器官中淋巴细胞的阳性与阴性的选择及对外周血淋巴细胞的清除。研究表明，随着机体衰老CD95+表达上调，其介导T淋巴细胞凋亡增加，T淋巴细胞数目减少，导致老年人免疫功能下降〔5〕。本研究显示随年龄增长外周血T淋巴细胞亚群CD95表达率上调。CD95+表达上调，促细胞凋亡作用增强，造成淋巴细胞凋亡增加，进而淋巴细胞数目减少，同时细胞功能随增龄而降低，引起免疫功能变化。CD95可能是评价免疫衰老较好的生物学标志之一。

维生素D是维持人体生命所必需的营养素之一，主要是在日光照射下由皮肤的7-脱氢胆固醇转变而来的内源性维生素D(也被称为维生素 D3)，也可以从富含维生素D3的膳食或者富含维生素D2的蔬菜中获得。维生素D进入血液后与维生素D结合蛋白结合，并先后运送至肝脏和肾脏，分别在25-羟化酶和1α羟化酶的作用下生成25-(OH)D和活性形式的1，25-羟维生素D3〔1，25-(OH)2D3〕，经血液循环输送到各个靶器官与维生素D受体(VDR)结合而发挥作用。维生素D可作用于固有免疫细胞，可抑制其炎性反应并促进其直接的抗菌活性。T淋巴细胞可以通过CYP27B1酶影响维生素D的合成，而维生素D可以提高T淋巴细胞免疫应答〔6〕。1，25-(OH)2D3可影响Th细胞的分化，抑制Th1细胞分泌白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、核转录因子(NF)-κB，介导细胞免疫，减少免疫排斥；促进Th2细胞分泌IL-6、IL-4、IL-5、IL-10，介导体液免疫，诱导免疫耐受。1，25-(OH)2D3通过阻止IL-2转录因子活化T细胞核因子(NF-AT)复合体的形成，抑制IL-2的分泌；同时1，25-(OH)2D3-VDR复合体能与IFN-γ启动子区的VDRE结合，直接抑制IFN-γ的表达〔7〕。分泌IL-17的Th17细胞是辅助性T细胞的另一亚群，1，25-(OH)2D3通过抑制IL-17基因的直接转录抑制IL-17分泌〔8〕。而且调节性T细胞是免疫抑制细胞，维生素D3可促进调节性T细胞的发育，抑制过度的免疫反应和自身免疫反应〔9～12〕。当25-(OH)D缺乏时，外周血T淋巴细胞总数及辅助性T细胞百分比明显下降，由于辅助性T细胞减少导致CD4+/CD8+比值下降，影响机体免疫功能。目前全球范围内维生素D缺乏普遍存在。本研究结果提示血清25-(OH)D水平与免疫衰老有关。免疫衰老是机体代谢过程中的一个必然阶段，本研究提示T淋巴细胞亚群CD95、维生素D水平可能是评价免疫衰老较好的生物学标志物，联合检查以更好地评价机体的免疫功能。

1Djukic M，Nau R，Sieber C，The ageing immune system〔J〕.Dtsch Med Wochenschr，2014；139(40)：1987-90.

2van der Geest KS，Abdulahad WH，Tete SM，etal.Aging disturbs the balance between effector and regulatory CD4+T cells〔J〕.Exp Gerontol，2014；60：190-6.

3Tavares SM，Junior Wde L，Lopes E Silva MR.Normal lymphocyte immunophenotype in an elderly population〔J〕.Rev Bras Hematol Hemoter，2014；36(3)：180-3.

4Kalokerinos EK，von Hippel W，Henry JD，etal.The aging positivity effect and immune function：positivity in recall predicts higher CD4 counts and lower CD4 activation〔J〕.Psychol Aging,2014；29(3)：636-41.

5Sawhney M，Mathew M，Alarmathi MT，etal.Agerelated changes in Fas and Fas ligand gene expressionand cytokine profiles in healthy Indians〔J〕.J Asian Pac Allerg Immunol，2006；24：47-56.

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7Pichler J，Gerstmayr M，Szépfalusi Z，etal.1 alpha，25(OH)2D3 inhibits not only Th1 but also Th2 differentiation in human cord blood T cells〔J〕.Pediatr Res，2002；52(1)：12-8.

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10Prietl B，Treiber G，Pieber TR，etal.Vitamin D and immune function〔J〕.Nutrients,2013；5(7)：2502-21.

11Chambers ES，Hawrylowicz CM.The impact of vitamin D on regulatory T cells〔J〕.Curr Allerg Asthma Rep，2011；11(1)：29-36.

12Chun RF，Liu PT，Modlin RL，etal.Impact of vitamin D on immune function：lessons learned from genome-wide analysis〔J〕.Front Physiol，2014；5：151.

〔2016-03-19修回〕

(编辑 曹梦园)

C913.6

A

1005-9202(2017)19-4889-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.091

江西省科技厅科技计划项目(20060140)

陈发秀(1980-)，女，硕士，副主任医师，硕士生导师，主要从事老年心血管病研究。

宁 芳(1968-)，女，副主任医师，主要从事老年心血管病研究。