栀子苷对乳腺炎小鼠乳腺组织及乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达的影响

赵慧朵 程旭锋 楚爱景

(河南省中医学院第一附属医院乳腺病科，河南 郑州 450000)

栀子苷对乳腺炎小鼠乳腺组织及乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达的影响

赵慧朵 程旭锋 楚爱景

(河南省中医学院第一附属医院乳腺病科，河南 郑州 450000)

目的观察栀子苷对乳腺炎小鼠乳腺组织及乳腺上皮细胞中白细胞介素(IL)-6，肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β的影响。方法36只BALB/C小鼠随机分为模型组(乳腺炎组)、栀子苷组(乳腺炎+栀子苷组)、地塞米松组(乳腺炎+地塞米松组)和对照组(假手术组)，建立脂多糖诱导乳腺炎小鼠模型HE染色观察各组乳腺炎小鼠的乳腺组织病理形态学变化，采用ELISA法测定各组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量。结果HE染色显示：模型组小鼠乳腺乳泡壁增厚，乳泡结构破坏，乳泡内有炎症细胞浸润；栀子苷组和地塞米松组乳腺乳泡壁稍增厚，乳泡结构轻度破坏，乳泡内见少量炎症细胞浸润；对照组小鼠乳腺组织未见明显异常。模型组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量均高于对照组、栀子苷组和地塞米松组(P<0.05)；栀子苷组和地塞米松组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量均高于对照组(P<0.05)，低于模型组(P<0.05)；栀子苷组和地塞米松组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论栀子苷对小鼠乳腺炎有保护作用，其机制可能与栀子苷降低乳腺炎小鼠乳腺组织及乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β水平有关。

栀子苷；乳腺炎；白细胞介素-6；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-1β

急性乳腺炎是乳房最常见的急性化脓性感染性疾病。栀子是中国传统中药材〔1〕，其成熟干燥的果实是主要中药部分，栀子具有凉血解毒、清热利尿、泻火除烦等功效，栀子苷是从干燥的栀子果实中提取出来的，具有抗炎、镇痛、抑菌等多种药理作用〔2～4〕。本文拟观察栀子苷对乳腺炎小鼠乳腺组织及乳腺上皮细胞中白细胞介素(IL)-6，肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β表达的影响。

1 材料与方法

1.1材料 选择健康BALB/C小鼠36只，购自吉林修正药业新药开发有限公司，小鼠许可证号：SYXK(吉)2015-0005。根据随机数字法随机分为模型组(乳腺炎组)、栀子苷组(乳腺炎+栀子苷组)、地塞米松组(乳腺炎+地塞米松组)和对照组(假手术组)，每组9只小鼠。主要试剂：脂多糖(LPS)(美国Biolegend公司)，栀子苷(北京中国食品药品检验研究院)，地塞米松注射液(新乡常乐制药有限公司)，小鼠IL-6、TNF-α和IL-1β ELISA试剂盒(美国Sigma公司)，DMEM培养液(美国Biolegend公司)等。

1.2建立乳腺炎小鼠模型 将雌鼠配对成功后分笼喂养，雌鼠分娩后1 w隔离母鼠和幼鼠，待母鼠情绪稳定后，每组取2只小鼠处死分离乳腺上皮细胞，每组剩余7只小鼠称重，进行麻醉，麻醉成功后，栀子苷组母鼠腹腔注射栀子苷(50 mg/kg)、地塞米松组母鼠腹腔注射地塞米松(5 mg/ml)；模型组和对照组母鼠腹腔注射等量生理盐水。1 h后，将各组小鼠固定到手术台上，酒精消毒第4对乳头，将乳头前端剪开一小口，模型组、栀子苷组、地塞米松组乳头内注射50 μl脂多糖(2 mg/ml)，对照组注射等量生理盐水。12 h后，栀子苷组母鼠腹腔注射栀子苷(50 mg/kg)、地塞米松组母鼠腹腔注射地塞米松(5 mg/ml)；模型组和对照组母鼠腹腔注射等量生理盐水。建模后24 h处死小鼠，取出第4对乳腺组织进行实验。

1.3乳腺组织的HE染色 将各组小鼠乳腺组织进行常规固定、脱水、透明、浸蜡及包埋，将包埋的石蜡切片切成厚0.5 μm的切片，进行常规HE染色，显微镜下观察各组小鼠乳腺组织的病理形态学变化。

1.4测定各组小鼠乳腺组织中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量 在碎冰上将各组小鼠乳腺组织和磷酸盐缓冲液进行粉碎，离心后弃去上层脂肪部分，取中间层上清液，采用ELISA法测定各组小鼠乳腺组织中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量。

1.5分离培养乳腺上皮细胞 将每组分娩后1 w处死的2只小鼠浸入酒精消毒，分离乳腺组织，在含双抗的青霉素瓶中洗涤，加入消化液消化，然后剪碎乳腺组织，将乳腺组织移到细胞培养瓶中培养5 h，离心，弃去上清液，重悬细胞后滤网过滤，加入细胞培养箱中培养4 h，离心，弃去上清液，接种到含鼠尾胶原的细胞板中培养36 h。

1.6测定各组小鼠乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量 将各组分离的乳腺上皮细胞接种到24孔板中，每组7复孔栀子苷组加入100 μl栀子苷(100 μg/ml)，地塞米松组加入100 μl地塞米松(20 μg/ml)，1 h后模型组、栀子苷组、地塞米松组加入50 μl LPS(4 μg/ml)，培养24 h，收集细胞液，离心后取上清液，采用ELISA法测定各组小鼠乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量。

1.7统计学方法 采用SPSS20.0软件，多组均数比较采用方差分析，组内两两均数比较采用LSD检验。

2 结 果

2.1乳腺炎小鼠模型的建立 模型组小鼠腹部乳腺部位发红，乳腺组织出现红肿热痛等炎症改变，对照组小鼠腹部乳腺部位和乳腺组织无明显异常。表明乳腺炎小鼠造模成功。

2.2各组小鼠乳腺组织形态学变化 模型组小鼠乳腺乳泡壁增厚，乳泡结构破坏，乳泡内有炎症细胞浸润；栀子苷组和地塞米松组乳腺乳泡壁稍增厚，乳泡结构轻度破坏，乳泡内见少量炎症细胞浸润；对照组小鼠乳腺组织未见明显异常。见图1。

图1 各组小鼠乳腺组织病理形态学变化(HE，×100)

2.3各组小鼠乳腺组织中和乳腺上皮细胞IL-6，TNF-α和IL-1β表达量 模型组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量均高于对照组、栀子苷组和地塞米松组(P<0.05)；栀子苷组和地塞米松组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量均高于对照组(P<0.05)，低于模型组(P<0.05)；栀子苷组和地塞米松组小鼠乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1，表2。

表1 各组小鼠乳腺组织中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量

与模型组比较：1)P<0.05；与对照组比较：2)P<0.05，下表同

表2 各组小鼠乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β表达量

3 讨 论

急性乳腺炎发病的主要原因为乳汁淤积，细菌经过乳头皲裂或者乳头破损处浸入乳房组织内。急性乳腺炎主要的致病菌为金黄色葡萄球菌，其次为链球菌等。小鼠乳腺炎模型可通过LPS诱导、金黄色葡萄球菌诱导、内毒素诱导等方法建立〔5～7〕。LPS是比较常用的诱导建立小鼠乳腺炎模型的方法，LPS是细菌死亡破坏后释放出来的，是革兰阴性菌内毒素的组成部分，LPS可引起微循环障碍、发热等，进入人体后增加血液中中性粒细胞数量，引起内毒素血症的发生，LPS诱导建立小鼠乳腺炎模型可产生IL-6，TNF-α和IL-1β等炎性细胞因子，介导多种免疫反应，引起乳腺组织损伤。本研究也显示LPS诱导建立的小鼠乳腺炎模型乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β水平明显增加。

栀子苷在多种疾病中具有重要作用〔8～13〕，对呼吸系统具有抗哮喘、抗肺损伤作用；对消化系统具有保肝利胆、降血糖、保护胰腺组织等作用；对神经系统具有抗神经细胞凋亡、改善学习功能障碍等作用；栀子苷也具有明显的抗炎、镇痛、抗微生物作用。有研究发现栀子苷对乳腺炎有一定的保护作用〔14，15〕。本研究结果发现，栀子苷对乳腺炎有一定的保护作用，可以减轻乳腺炎炎症，减轻乳腺组织的破坏程度，降低乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β水平；考虑栀子苷对乳腺炎的保护作用可能和栀子苷降低乳腺组织和乳腺上皮细胞中IL-6，TNF-α和IL-1β水平有关。

1廖夫生.中药栀子研究进展〔J〕.广州化工，2013；1：12-3，21.

2Ma TT，Li XF，Li WX，etal.Geniposide alleviates inflammation by suppressing MeCP2 in mice with carbon tetrachloride-induced acute liver injury and LPS-treated THP-1 cells〔J〕.Int Immunopharmacol,2015；29(2)：739-47.

3宋晓静，孙 勇，付云鹤，等.栀子苷药理作用的研究进展〔J〕.黑龙江畜牧兽医，2015；7：78-80.

4Cai L，Li R，Tang WJ，etal.Antidepressant-like effect of geniposide on chronic unpredictable mild stress-induced depressive rats by regulating the hypothalamus-pituitary-adrenal axis〔J〕.Eur Neuropsychopharmacol.2015；25(8)：1332-41.

5Zhao Y，Zhou M，Gao Y，etal.Shifted T helper cell polarization in a murine staphylococcus aureus mastitis model〔J〕.PLoS One,2015；10(7)：e0134797.

6Gao XJ，Guo MY，Zhang ZC，etal.Bergenin plays an anti-inflammatory role via the modulation of MAPK and NF-κB signaling pathways in a mouse model of LPS-induced mastitis〔J〕.Inflammation,2015；38(3)：1142-50.

7王 亨，余光涛，顾铭杰，等.金黄色葡萄球菌诱导大鼠乳腺炎模型的建立〔J〕.中国兽医杂志，2015；6：7-9，13.

8Wang J，Hou J，Lei H，etal.Synergistic neuroprotective effect of microglial conditioned media treated with geniposide and ginsenoside Rg1 on hypoxia injured neurons〔J〕.Mol Med Rep,2015；12(4)：5328-34.

9王恩力，董 方，姚景春.栀子苷药理学和毒理学研究进展〔J〕.中国药房，2015；19：2730-3.

10Chen JY，Wu H，Li H，etal.Anti-inflammatory effects and pharmacokinetics study of geniposide on rats with adjuvant arthritis〔J〕.Int Immunopharmacol,2015；24(1)：102-9.

11Zhang Y，Yin F，Liu J，etal.Geniposide protects pancreatic INS-1E β cells from hIAPP-induced cell damage：potential involvement of insulin degrading-enzyme〔J〕.Cell Biol Int,2015；39(4)：373-8.

12Shi Q，Cao J，Fang L，etal.Geniposide suppresses LPS-induced nitric oxide，PGE2 and inflammatory cytokine by downregulating NF-κB，MAPK and AP-1 signaling pathways in macrophages〔J〕.Int Immunopharmacol,2014；20(2)：298-306.

13张文娟，李茂星，张泉龙，等.栀子苷的快速提取分离及其镇痛抗炎作用研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012；21：170-4.

14Song X，Guo M，Wang T，etal.Geniposide inhibited lipopolysaccharide-induced apoptosis by modulating TLR4 and apoptosis-related factors in mouse mammary glands〔J〕.Life Sci,2014；119(1-2)：9-17.

15Song X，Zhang W，Wang T，etal.Geniposide plays an anti-inflammatory role via regulating TLR4 and downstream signaling pathways in lipopolysaccharide-induced mastitis in mice〔J〕.Inflammation,2014，37(5)：1588-98.

〔2017-02-11修回〕

(编辑 徐 杰)

R655.8

A

1005-9202(2017)19-4712-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.19.010

河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A320892)

赵慧朵(1981-)，女，主治医师，硕士，主要从事乳腺疾病相关研究。