维生素E对小鼠出血时间、凝血时间和红细胞渗透脆性的影响

谢国云+何明亮+范文凤+黄碧隆+黄丽碧+韦选雷+陆秀重+王彩冰

【摘要】目的观察维生素E（VE）对小鼠出血时间（BT）、凝血时间（CT）和红细胞渗透脆性（ROF）的影响。方法取昆明种小鼠50只，随机平均分为正常对照组（给予0.9%NaCl注射液）、酚磺乙胺组（给予酚磺乙胺40 mg/ml）、肝素组（给予肝素0.03 mg/ml）、VE低浓度组和高浓度组（分别给予VE 2.5、5.0 mg/ml）灌胃，灌胃量按小鼠体重（0.01 ml/g）计算，每天1次，连续14天。在末次灌胃后30 min用断尾法检测BT，用玻片法检测CT，用摘除眼球法取血检测ROF。结果VE高浓度组和肝素组的BT明显长于正常对照组、酚磺乙胺组（P<0.01），VE高浓度组与肝素组的BT比较无统计学意义（P>0.05）；VE高浓度组、VE低浓度组、正常对照组的CT两两比较无统计学意义（P>0.05），酚磺乙胺组的CT明显短于其余4组（P<0.01），肝素组的CT明显长于其余4组（P<0.01）；各组的红细胞開始破裂的NaCl溶液浓度两两比较无统计学意义（P>0.05）。结论VE不影响血液凝固和红细胞膜稳定性，能延长生理性止血时间，此作用存在量效关系。

【关键词】维生素E；出血时间；凝血时间；红细胞渗透脆性；小鼠

中图分类号：R285.5文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.04.018

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of vitamin E（VE）on bleeding time（BT），clotting time（CT）and red cell osmotic fragility（ROF）in mice.Methods50 Kunming mice were randomly divided into normal control group（given 0.9% of NaCl by injection），etamsylate group（given 40 mg/ml of etamsylate by intragastric administration）and heparin group（given 0.03 mg/ml of heparin by intragastric administration），VE low concentration group and high concentration group（given 2.5 and 5.0 mg/ml of VE by intragastric administration，respectively），with 10 case in each group.The amount of gastric lavage was calculated according to the body weight of mice（0.01 ml/g），once a day，for 14 consecutive days.30 min after the last intragastric administration，tail-cutting method was used to measure BT，slide method was used to detect CT，and eyeball enucleation was used to collect blood to detect ROF.ResultsThe BT in the VE high concentration group and the heparin group was longer than that in the normal control group and the etamsylate group（P<0.01），there was no statistically significant difference in BT between the VE high concentration group and the heparin group（P>0.05）.There was no statistically significant difference in the CT between the VE high concentration group，the VE low concentration group and the normal control group（P>0.05）.The CT of the etamsylate group was shorter than that of the other four groups（P<0.01），but the CT of the heparin group was significantly longer than that of the other four groups（P<0.01）.There was no statistical significance in the concentration of NaCl solution in which the red blood cells began to burst in pairwise comparison between each group（P>0.05）.ConclusionVE has no effect on blood coagulation and erythrocyte membrane stability，it can prolong physiological hemostasis time，and there is dose effect relationship in this effect.

【Key words】VE；BT；CT；ROF；miceendprint

维生素E（Vitamin E，VE）又称生育酚，是一种很强的脂溶性抗氧化剂，能清除自由基和维持细胞膜的正常结构[1]。近年研究发现，VE对心、肝、肾、胃等器官有保护作用[2～5]，但尚未发现有VE对出血时间（Bleeding time，BT）、凝血时间（clotting time，CT）和红细胞渗透脆性（Red cells osmotic fragility，ROF）影响的报道。本实验利用VE、酚磺乙胺、肝素的临床用量[6]换算为小鼠灌胃量给小鼠灌胃后，检测小鼠的BT、CT和ROF，并与临床常用的促凝血药酚磺乙胺和抗凝血药肝素作比较分析，明确VE对血液系统的生理特性影响，为临床用药提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物昆明种健康雄性KM小鼠50只，体重20～30 g，由右江民族医学院实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK 桂2011-0010，实验动物生产许可证号：SCXK桂2012-0003。

1.2药品维生素E溶液（桂林南药股份有限公司，批号：151201）、酚磺乙胺注射液（四川美大康华康药业有限公司，批号：15070917）、肝素（南京新百药业有限公司，批号：H32025851）、0.9%NaCl注射液（广西裕源药业有限公司，批号：L16062904）。

1.3实验方法将小鼠随机平均分为5组，正常对照组、酚磺乙胺组、肝素组、VE低浓度组和VE高浓度组。正常对照组给予0.9%NaCl注射液，酚磺乙胺组给予40 mg/ml酚磺乙胺注射液，肝素组给予0.03 mg/ml肝素，VE低浓度组和高浓度组分别给予2.5、5.0 mg/ml VE溶液灌胃，灌胃量均按小鼠的体重计算（0.01 ml/g），每天1次，连续14 d。

1.4小鼠的BT检测末次给药灌胃前禁食12 h，禁水2 h，末次给药灌胃后30 min将小鼠置于固定器中，用手术剪剪断小鼠尾尖3 mm，每隔15 s 用滤纸轻吸尾尖自行溢出的血液直至出血停止，记录断尾至出血停止时间为BT（即生理性止血时间）。由专人进行检测并观察结果。

1.5小鼠的CT检测检测BT后，用手术剪剪断小鼠尾尖3 mm，用滤纸吸去第一滴血再将血滴在清洁的玻片上，血滴直径约5 mm，每隔15 s 用清洁干燥的大头针从血滴边缘向内轻挑1次，直至挑起出现纤维蛋白丝为止，记录血滴到玻片至挑起出现纤维蛋白丝时间为CT。由专人进行检测并观察结果。

1.6小鼠的ROF检测检测CT采血后，使用摘除眼球法取血放入肝素钠采血管，分别向盛有浓度递减（0.60%、0.58%、0.56%、0.54%、0.52%、0.50%、0.48%、0.46%、0.44%、0.42%、0.40%、0.38%、0.36%、0.34%、0.32%、0.30%）的低渗NaCl溶液试管中滴入0.1 ml血液，在37℃环境中静置1 h，从高浓度开始依次观察并记录试管上清液开始呈现浅红色（即红细胞开始破裂）的Nacl溶液浓度为ROF。由专人进行检测并观察结果。

1.7统计学方法利用SPSS 16.0统计软件进行数据分析，计量资料符合正态分布采用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验，检验水准：α=0.05，双侧检验。

2结果

VE高浓度组和肝素组的BT明显长于正常对照组、酚磺乙胺组（P<0.01），VE高浓度组与肝素组的BT比较无统计学意义（P>0.05），VE低浓度组的BT与其余4组相比较无统计学意义（P>0.05）；VE高浓度组、VE低浓度组、正常对照组的CT两两比较无统计学意义（P>0.05），酚磺乙胺组的CT明显短于其余4组（P<0.01），肝素组的CT明显长于其余4组（P<0.01）；各组的ROF两两比较无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3讨论

酚磺乙胺、肝素都是临床常用促凝血药，在本实验结果显示，酚磺乙胺组的凝血时间明显短于正常对照组，提示酚磺乙胺通过促进凝血达到止血作用；肝素組的出血时间和凝血时间均明显长于正常对照组，提示肝素通过延长出血时间和凝血时间达到抗凝血作用；说明用于本研究的小鼠对促凝血药物和抗凝血药物有正常反应的效果，提示本研究中VE对出血时间和凝血时间影响的结果可靠。由于肝素为红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂[7]，因此本实验的血标本抗凝处理环节采用肝素作为抗凝剂。

本研究结果显示，VE低浓度组的出血时间与正常对照组比较无统计学意义，VE高浓度组的出血时间明显长于正常对照组，但VE低浓度组和VE高浓度组的出血时间与肝素组比较无统计学意义，说明VE能的延长生理性止血时间，此作用存在量效关系，该作用与肝素的效果相当；VE低浓度组和VE高浓度组的凝血时间与正常对照组比较无统计学意义，但明显长于酚磺乙胺组、短于肝素组，说明VE不影响血液凝固过程；各组的红细胞渗透脆性浓度两两比较无统计学意义，说明VE、酚磺乙胺、肝素的红细胞渗透脆性正常，同时提示这些物质都不影响红细胞膜的稳定性。本研究结果提示VE不影响血液凝固和红细胞膜稳定性，能延长生理性止血时间。

综上所述，VE对心、肝、肾、胃等器官有保护作用，还能抗衰老，增加机体的免疫力和记忆力等[2～5，7～9]，但VE用于保健和治疗时，并不适合所有机体的应用，VE能延长生理性止血时间，从而提示我们患有血液病（如血小板减少症、再生障碍性贫血、白血病、血友病等）和可能导致出血的疾病（如高血压病）及手术病人、产妇要禁用或慎用VE，而血液易凝固的疾病（如脑栓塞、肺栓塞、心肌栓塞等）可作为辅助治疗药物。

从生理学角度分析，生理性止血包括小血管收缩、血小板止血栓形成、血液凝固等三个过程[10]，本研究结果表明VE不影响血液凝固和红细胞膜稳定性，但能延长生理性止血时间，提示VE延长生理性止血时间可能通过影响小血管收缩、血小板止血栓形成的环节实现，又有资料表明VE能抑制血小板聚集而防止血栓形成[6]，但VE是否影响小血管收缩还有待于今后的研究证实。

参考文献

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