黑龙江省实验室能力比对乳粉中阪崎肠杆菌检验结果分析

（黑龙江省食品药品检验检测所，哈尔滨150088）

黑龙江省实验室能力比对乳粉中阪崎肠杆菌检验结果分析

田冬梅，史春辉，张肖宁

（黑龙江省食品药品检验检测所，哈尔滨150088）

通过实验室能力比对工作，评价食品微生物实验室的检测能力，提高实验室的检测水平，保证检测结果准确、可靠。依据CNAS-GL02《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》和CNAS-CL57《能力验证提供者认可准则在微生物领域的应用说明》进行结果统计和评价。结果表明：40家参比实验室中，4家为不满意结果，满意率为90%。食品微生物实验室检验能力尚存在不足，检验能力有待提高。

阪崎肠杆菌；实验室能力比对；结果评价

0 引言

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是肠杆菌科的一种，1980年由黄色阴沟肠杆菌更名而来，是人和动物肠道内寄生的一种周身有鞭毛，兼性厌氧，无芽孢的革兰阴性棒状杆菌，营养要求不高，能在6～47℃宽泛的温度下生长繁殖[1]。2008年，IVERSEN等在杂志《国际系统与进化微生物学杂志》提议将阪崎肠杆菌生物群划分为一个新属，即克罗诺杆菌属（Crono⁃bacter spp.）[2-3]，属内包括阪崎克罗诺杆菌（Crono⁃bacter sakazakii）等7个种和3个亚种[4-5]。阪崎肠杆菌主要危害免疫力低下的婴幼儿，可引起严重的新生儿脑膜炎小肠结肠炎和菌血症，严重者可引起神经系统后遗症或死亡，死亡率高达50.0%以上[6]。

1 实验室能力比对基本情况

1.1 实验室能力比对样品

参加比对的实验室均收到3份样品，其中包括3个阪崎肠杆菌样品和3袋奶粉样品，每个相同编号的阪崎肠杆菌样品和奶粉样品作为1份样品，阪崎肠杆菌样品为西林瓶装的白色小球，奶粉样品每袋质量100 g，比对样品均由中国食品药品检定研究院提供。

1.2 参加比对的实验室

参加黑龙江省乳粉中阪崎肠杆菌实验室能力比对的实验室共计40家，包括地市级食品检验机构4家，黑龙江省承检机构7家，婴配基粉生产企业29家。按照参加实验室城市划分，哈尔滨市、齐齐哈尔市、绥化市及大庆市为主要集中城市，共占77.5%，如图1所示。

1.3 检测方法

依据GB 4789.40-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》[7]及作业指导书进行阪崎肠杆菌检测。

图1 参加实验室比对计划的实验室城市分布情况

1.4 结果统计与评价

1.4.1 统计与评价依据

依据CNAS-GL02《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》[8]和CNAS-CL57《能力验证提供者认可准则在微生物领域的应用说明》[9]进行结果统计和评价。

1.4.2 结果评价原则

判定不满意的标准：实验室上报结果中任意一份样品与样品实际结果不一致的，则判定结果为“不满意”。

判定满意的标准：实验室上报结果与样品实际结果完全一致；且结果提交时间在截止日期内，则判定结果为“满意”。

2 实验室能力比对结果分析

在上报结果的40家实验室中，36家为满意结果，4家为不满意结果（具体情况如表1所示），整体满意率为90%，不满意结果均为婴配基粉生产企业，占生产企业的13.8%，如图2所示。图2中，带百分号的数据表示的是满意率。析产生错误结果的具体原因，建议加强增菌步骤的操作，提高检验人员的检测能力，加强无菌操作意识。

图2 参加实验室比对不满意结果情况

3 讨论

此次实验室能力比对为黑龙江省食品药品监督管理局首次牵头组织的乳粉中阪崎肠杆菌检验，比对样品无背景干扰菌，对实验室检验能力要求不高，但通过上报结果及实验室提供的原始记录分析，发现食品微生物检验实验室仍存在不足，应在原始记录、检验能力及安全意识等方面进行提高，并加强实验室的质量控制管理工作。

3.1 提升原始记录书写能力

实验室的原始记录是对检测人员的检测活动和结果数据真实性提供的关键证据，记录应原始、真实、内容完整、数据无误、结论正确、书写清晰、整洁，应包含所有关键实验操作步骤。但通过实验室能力比对工作发现各实验室提供的原始记录存在最大的问题是溯源性不强，无具体的样品处理过程、试验步骤、菌落形态描述、培养条件、培养基配制及菌种使用等相关信息，无法通过原始记录进行回溯，多数实验室在对原始记录的重要性理解不到位。实验室原始记录应包括以下内容[10-11]：样品名称、实验日期、检验依据、检验方法、实验参数（所用的重要设备、培养基、试剂、菌株相关信息）、培养条件、实验结果（包括菌落形态描述）、判定标准、结论、检验者、复核者等。对于试验过程的重要参数，如培养箱、灭菌器的温度，培养基及试剂批号，菌种编号、传代代数等均应有记录，以满足实验记录的追溯性。实验记录修改，应有明确要求，如记录有误时，应用单线划掉并签字或盖章，保持原有字迹清晰可辨，原来数据不能抹去或覆盖等，避免造假。

3.2 提高人员的检验能力

通过问卷调查发现，从事食品微生物检验的人员专科以下学历的超过50%，本科学历的接近30%，研究生学历不足20%，并且研究生学历的检验人员绝大多数均为刚毕业的学生，工作经验不到3年，微生物专业领域的检验人员不足50%，这很大程度上说明目前食品微生物实验室检验人员专业素质不高，通过不满意实验室结果分析，发现检验人员的基本无菌操作理念和方式方法仍存在较大差异性。故应加强实验室人员专业技能培训，提高检验人员的整体检验水平，尤其非微生物专业或工作经验少的人员应提高对标准掌握能力，专业的检验能力、检验过程的把控及结果判断能力，避免误判或漏判现象。

3.3 重视安全意识

实验室应加强生物安全管理理念，提高检验人员的安全意识，应严格按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》[12]、《病原微生物实验室生物安全环境管理办法》[13]、《实验室生物安全通用要求》[14]及《生物安全实验室建筑技术规范》[15]进行实施管理，质控用菌的管理及使用应参照《中国微生物菌种保藏管理条例》[16]及实验室相应管理文件执行。微生物实验室应制定适合自己的生物安全手册，包括紧急联系信息（电话、联系人等）、紧急导向信息（实验室平面图、紧急出口、实验室标识系统等）、应急操作（人员物品出入控制、急救处理指南等）、危险源及处理措施（生物危险、化学品安全等）及个人防护措施等。与此同时，定期对实验室进行生物安全检查，检验人员应严格遵守生物安全规范，经考核合格的实验人员方可进行致病性微生物的后期鉴定工作[17]。通过提高操作规范性，加强自我防护意识，在不污染样品的同时更应避免致病性微生物对试验人员、实验室的污染，避免生物安全事故的发生。

3.4 加强实验室质量控制

实验室质量控制是实验室质量管理不可缺少的一部分，是保障实验室质量安全的至关点，通过控制样品检验的各个环节及影响因素，将检验结果的误差控制在可控范围内。实验室的质量控制一般包括内部质量控制和外部质量评估。首先，实验室应该做好实验室内部质量控制，应尽可能覆盖实验室的所有检测项目和检测人员，定期对实验环境的洁净度、设备性能、培养基、关键试剂、生化试剂盒、菌株的活性以及人员检验能力、检验过程关键点进行监控[18-19]；定期对每个检测人员进行定性或定量检测的加标回收试验、科室内部人员比对、仪器比对等质控活动，检验过程还应考虑到平行样、空白对照及阳性对照等，降低检验过程对结果的影响。除此之外，实验室还应积极参加检测范围相关的国家能力验证或有关政府部门、国际组织、专业技术评价机构组织开展的检验检测机构能力验证或者检验检测机构间比对，提高检验人员的技术水平，确定实验室的检测能力，证实实验室对检验程序、方法等有效控制[20]。

[1]曲春波.婴儿奶粉中阪崎肠杆菌的检测[J].农产品加工（学刊），2013（7）：64-66.

[2]WHO[World Health Organization].Enterobacter sakazakii（Cronobacter spp.）in powdered follow-up formulae：meeting report，2008.MRA Series15[R].www.who.int/entity/food-safety/publications/micro/ MRA_followup.pdf.

[3]赵贵明，袁飞，杨海荣，等.阪崎肠杆菌的分类变化及新种属生物学特性[J].卫生研究，2011，39（2）：248-250.

[4]董晓辉，李程思，吴清平，等.食品污染克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）的分离鉴定[J].微生物学报，2013，53（5）：429-436.

[5]田雪，综述，王娉，等.克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）分子分型技术研究进展[J].卫生研究，2014，43（5）：862-865.

[6]The Centers for Disease Control and Prevention US.Enterobacter sakazakii infect ions associated with the use of powdered infant fomu⁃la-Tennessee 2001[J].MMWR，2002，51（14）：298-300.

[7]国家卫生和计划生育委员会.GB 4789.40-2010食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验[S].2010.

[8]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL02能力验证结果的统计处理和能力评价指南[S].2014.

[9]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL57能力验证提供者认可准则在微生物领域的应用说明[S].2015.

[10]苏德模，胡昌勤，曹晓云.药品检验所微生物实验室质量管理规范问题的浅见[J].中国药品标准，2003，3（4）：8-10.

[11]李秋菲，王小亮，绳金房.现行版美国药典微生物实验室质量管理规范译介[J].中国药事，2010，18（19）：4-5.

[12]中华人民共和国国务院.国务院令第424号病原微生物实验室生物安全管理条例[S].2004.

[13]国家环境保护总局.国家环境保护总局令第32号病原微生物实验室生物安全环境管理办法[S].2006.

[14]中国国家标准化管理委员会.GB 19489-2008实验室生物安全通用要求[S].2008.

[15]中华人民共和国住房和城乡建设部.GB 50346-2011生物安全实验室建筑技术规范[S].2011.

[16]卫生部菌种管理委员会.中国医学微生物菌种保藏管理办法[S]. 1985：03-23.

[17]蔡雪凤，侯翠艳.浅谈食品微生物实验室全面质量管理[J].中国卫生检验杂志，2014，24（13）：1969-1971.

[18]刘锐萍，王峰，刘珊珊，等.食品、药品微生物检测实验室质量控制方法分析[J].中国微生态学杂志，2013，25（07）：847-850.

[19]任军霞.2011年微生物实验室质控盲样结果分析[J].医学动物防制，2012，28（12）：1401-1402.

[20]毛歆，项新华，肖镜，等.2013年食品药品系统实验室能力验证结果分析[J].中国药事，2015，29（11）：1145-1150.

Result analysis of the laboratory proficiency comparison in HeiLongjiang prov⁃ince:Enterobacter Sakazakii examination in the milk powder

TIAN Dongmei,SHI Chunhui,ZHANG Xiaoning
（Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin 150088，China）

To assess and evaluate the testing proficiency of the food microbiology laboratory by the laboratory proficiency comparison,im⁃prove the level of laboratory testing,and ensure the accuracy and reliability of testing result.Statistics and evaluate the results according to CNAS-GL02“guidance on statistic treatment of proficiency testing results and performance evaluation”and CNAS-CL57“guidance on the application of accreditation criteria for proficiency testing providers in the field of microbiology”.There were four laboratories that were un⁃satisfied results in 40 laboratories,satisfaction rate was 90%.The testing proficiency of the food microbiology laboratory is insufficient,and needs to improve.

Enterobacter sakazakii；laboratory proficiency testing；results evaluation

TS252.7

：A

：1001-2230（2017）07-0045-03

2016-11-25

田冬梅（1980-）女，主管药师，研究方向为食品、药品、医疗器械等微生物检验。

张肖宁