贵阳市大肠杆菌耐药性监测

金志强，尹泽东，谭艾娟

(1.贵阳市农委，贵州 贵阳 550081 ；2.贵州农业职业学院，贵州 贵阳 550345；3.贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025)



·研究简报·

贵阳市大肠杆菌耐药性监测

金志强1，尹泽东2，谭艾娟3*

(1.贵阳市农委，贵州 贵阳 550081 ；2.贵州农业职业学院，贵州 贵阳 550345；3.贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025)

为了调查贵阳市猪、鸡及环境中的大肠杆菌的耐药情况，从贵阳市花溪区、乌当区等7个县区采集了猪、鸡肛门拭子及排污口处的粪便，共420份样品，分离鉴定出300株大肠杆菌，应用琼脂稀释法测定其对10种常用抗菌药物的MIC值，并统计抗菌药物的平均耐药倍数、敏感率、耐药率等。结果表明：大肠杆菌对10种药物的耐药率整体偏高，除庆大霉素接近50%外，土霉素和氟苯尼考超过80%，链霉素、头孢噻呋、阿莫西林和磺胺嘧啶超过70%，恩诺沙星和环丙沙星超过60%。300株分离菌均多重耐药菌株，主要集中在5～10耐之间。结果表明贵阳市猪、鸡源大肠杆菌的耐药较严重。

大肠杆菌；耐药性；琼脂稀释法；多重耐药

随着抗菌药物的广泛使用，细菌耐药水平不断升高和耐药谱不断扩大，导致高度耐药和多重耐药菌株，甚至超级细菌的出现，使动物疾病的预治面临严峻挑战，目前已成为影响养殖业正常发展的主要因素之一。同时，动物源耐药菌可通过食物、饮水、空气等途径将其耐药性传递给人源细菌，导致临床治疗的失败，严重威胁人的健康。因此，如何降低和消除细菌耐药性的危害已成为全球关注的热点。大肠杆菌由于广泛存在于动物体内环境中，是细菌耐药基因储存库和重要传播中转站，国内外将其确定为耐药性监测的指示菌株[1]，通过监测大肠杆菌耐药性反映该区域的细菌的耐药水平。本研究对从贵阳市7个县区的猪、鸡及养殖场总排污口处分离得到300株大肠杆菌进行耐药性监测，旨在为猪、鸡养殖业中科学、合理选用药物提供依据，从而控制或减少本地区动物源细菌耐药水平。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 大肠杆菌质控菌ATCC25922为华南农业大学兽医药理实验室惠赠，300株大肠杆菌由本实验室从贵阳市的猪、鸡及环境中分离得到，经染色镜检和肠杆菌科生化编码鉴定。

1.1.2 培养基 米勒-海顿琼脂(MHA)、米勒-海顿肉汤(MHB)、麦康凯培养基和伊红美蓝琼脂均购自上海盛思生化科技有限公司。

1.1.3 药物 阿莫西林、环丙沙星、土霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素和磺胺嘧啶钠七种原料药购自上海盛思生化科技有限公司，恩诺沙星、氟苯尼考和头孢噻呋钠由贵州省兽药监察所提供。

1.1.4 主要仪器 恒温培养箱、超净工作台、电子天平和多点接种器等。

1.2 方法

采用琼脂稀释法测定300株大肠杆菌对链霉素、卡拉霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、头孢噻呋、阿莫西林、氟苯尼考、土霉素和磺胺嘧啶等10种抗菌药物的MIC值。MIC值测定试验中所用的抗菌药物按照美国实验室标准化委员会(CLSI)2013年版标准配置并根据其标准进行判读(见表1)。

2 结果与分析

2.1 大肠杆菌对10种抗菌药的耐药性

由图1可知，大肠杆菌对10种药物的耐药率整体偏高，除庆大霉素接近50%外，土霉素和氟苯尼考超过80%，链霉素、头孢噻呋、阿莫西林和磺胺嘧啶超过70%，恩诺沙星和环丙沙星超过60%。从大类上看，耐药率四环素类>酰胺醇类>发喹诺酮类>磺胺类>氨基糖苷类。

2.2 各县区大肠杆菌对抗菌药MIC值统计结果

由表2和图2可知，各县区对10种药物耐药水平均较高，但也有自己的特点。各区县对土霉素耐药水平最高，其MIC50耐药倍数均超过10倍，其次是阿莫西林和氟苯尼考，其MIC50耐药倍数均超过6倍，各区县对庆大霉素和磺胺嘧啶的耐药水平较其他药物抵；花溪区对链霉素、卡那霉素和头孢噻呋耐药水平高于其他区县，白云区对环丙沙星和恩诺沙星的耐药水平最高，因此，本地区细菌耐药水平较高。

表1 抗菌药物敏感性试验判定标准

图1 300株大肠杆菌的耐药性统计结果

2.3 不同来源的大肠杆菌耐药性统计

由表3可知，猪、鸡源大肠杆菌对各种抗菌药物的耐药率和耐药水平(平均耐药倍数)基本相同，对庆大霉素(猪、鸡1.9倍)和恩诺沙星(猪、鸡3.5倍)的较低；对阿莫西林(猪9.5倍，鸡9.7倍)、土霉素(猪11.7倍，鸡11.7倍)的平均耐药倍数较高；环境中的大肠杆菌，即来源于规模化养殖场和散养户的总排污口，其耐药水平除阿莫西林、磺胺嘧啶钠外，均比猪、鸡源的要高少许；由于耐药基因可在环境中长期存在，因此，环境是细菌耐药性的储藏和传播的重要环节。

表2 各县区大肠杆菌对抗菌药的MIC值(ug/ml)

表3(续) 各县区大肠杆菌对抗菌药的MIC值

注：平均耐药倍数=平均MIC值/耐药标准值。

图2 各区县对不同药物的平均MIC耐药倍数

图2(续) 各区县对不同药物的平均MIC耐药倍数

抗菌药物猪源(N=154)鸡源(N=125)环境(N=21)平均MIC值平均耐药倍数耐药率(%)平均MIC值平均耐药倍数耐药率(%)平均MIC值平均耐药倍数耐药率(%)链霉素1544．874．71464．676．01534．890．5卡那霉素3225．065．62874．562．43054．876．2庆大霉素311．950．6311．948．0322．052．9环丙沙星153．867．5153．866．4164．076．2恩诺沙星143．573．4143．575．2143．577．1头孢噻呋钠1695．372．11916．083．22357．390．5阿莫西林3059．572．73099．777．62588．176．7氟苯尼考2738．585．72558．083．23079．681．0土霉素18811．785．718711．788．822013．895．2磺胺嘧啶钠15263．874．715203．876．012383．173．8

2.4 多重耐药情况统计(见图2)

由图3可知，300株大肠杆菌均为多重耐药菌，至少耐二种药，以耐8种与9种药的百分率最高，分别占20.7%、20.3%，耐药谱主要集中在耐5～10种之间，5耐及5耐以上的菌株所占百分比达91%，因此，多重耐药严重。

图3 多重耐药情况

3 结论与讨论

3.1 贵阳市大肠杆菌耐药现状

图1表明耐药率明显高于敏感率，其中耐药率超过80%的有土霉素(87.7%)和氟苯尼考(84.4%)；而敏感率(包括中度敏感率)除庆大霉素超过50%外，可作为临床首选药物。表1表明各区县对土霉素耐药水平最高，其MIC50耐药倍数均超过10倍，其次是阿莫西林和氟苯尼考，其MIC50耐药倍数均超过6倍，如果按照规定剂量用药难以取得治疗效果，因此耐药形势严峻。鸡源和猪源大肠杆菌的耐药情况相似，其中猪源耐药率：对链霉素、庆大霉素和环丙沙星比韩伟[3]报道的低10%左右；对阿莫西林、环丙沙星、恩诺沙星、卡那霉素和氟苯尼考比林居纯[4]等报道的要高；对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考比杜向党[5]报道的要低许多，但头孢噻呋却要高11.2%。鸡源耐药率：对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星和恩诺沙星比杜向党[5]的要低许多，但氟苯尼考、头孢噻呋却高许多。对阿莫西林、环丙沙星和恩诺沙星比林居纯[4]报道的低，但卡那霉素，氟苯尼考却要高许多。由此可以看出，猪、鸡及环境耐药性在地区上的差异可能是不同地区在养殖模式和用药习惯上的差异引起。

3.2 排污口样品的意义

表2表明环境中的大肠杆菌总体耐药水平略高于猪、鸡的，但差异不大，而韩伟等[3]报道的环境中的大肠杆菌耐药水平略低于猪。因此采样时采集总排污口处的粪便可能更有代表性，更能代表该养殖场的耐药水平，这可能与养殖场所有的猪、鸡粪便排往总排污口及耐药性能在环境中传播有关。

本研究的总体结果与国内外报道的健康人群及动物肠道大肠杆菌的耐药率均高于50%相符。耐药性的各项指标均比金凌艳等[6]报道的高，这可能与上海地区的养殖业比较发达、养殖技术水平高有关。

3. 3 应对措施

广大兽医工作者在养殖业的管理及临床用药中，要规范使用抗菌药，相关职能部门应针对性的组织培训，增加用药常识，合理用药。实践中有条件的可先对菌株进行药敏试验，选择 敏感的药物，严格按说明足量足疗程使用或根据药物的配伍禁忌联合用药；一方面可以充分发挥抗菌药物之间的协同作用，增加疗效；另一方面可以避免细菌长期与某一种药物接触，增加产生耐药性机率[7]。同时可推广应用中草药和微生态制剂进行治疗[8]。再配合科学的饲养管理和加强环境消毒等措施，以达到最佳的治疗效果，减少耐药性的发生，保障养殖业的健康发展。

[1] Patrick Butaye， Engeline van Duijkeren， John F，etal. Antimicrobial resistance in bacteria from animals and the environment [J].VeterinaryMicrobiology， 2014， 171(3) ： 269 -272.

[2] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standerds For antimicrobial susceptibility testing： twenty-third informational supplements： M100-$23 [s].WaynePA：CLSI， 2014： 80 - 84.

[3] 韩 伟，肖云民，顾 鸣. 供港猪饲养场细菌耐药性监测情况分析[J].上海畜牧兽医通讯，2008，(4)：41-43.

[4] 林居纯，卓家珍. 不同地区猪源和禽源大肠杆菌耐药性监测[J]. 华南农业大学学报，2009，30(01)：86-88.

[5] 杜向党，焦显芹，陈玉霞，等. 河南地区鸡猪源大肠杆菌的耐药性监测[J]. 江西农业大学学报，2008，30(6)：956-959.

[6] 金凌艳，顾 欣，蔡金华，等.上海市动物源大肠杆菌耐药性监测[J].上海畜牧兽医通讯，2009(3)：31-32.

[7] 张广群，王春光，张国磊，等. 55株猪源大肠杆菌的耐药性监测[J]. 中国动物检疫，2006，23(2)：34-35.

[8] 石锦良，刘学贤，龚建森. 微生态制剂与鸡病防制[J].中国禽业导刊，2006(06)：32.

A Surveillance on the Antibiotic Resistance ofE.Coliin Guiyang City

JINZhi-qiang1，YINZe-dong2，TANAi-juan3

(1.AgricultureCommitteeofGuiyangCity,Guiyang,Guizhou550081,China; 2.GuizhouVocationalCollegeofAgriculture,Guiyang,Guizhou550345,China; 3 .CollegeofLifeSciences,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China.)

To investigate the antibiotic resistance ofE.Coliisolated from swine, chicken and environment in Guiyang City, 420 feces samples were collected and 300E.Colistrains were isolated and identified. The MIC values of the 300E.Colistrains to 10 antibiotics were measured with the method of solid agar dilution. The Mean drug resistance multiple, antibiotic sensitive rate, antibiotic resistance rate of the 300E.Colistrains were also analyzed. The results showed that the resistance levels of all strains to 10 antibiotics were quite high. Except the resistance rates to gentamicin, which was about 50%, the resistance rates of the 300 isolated strains to oxytetracycline and florfenicol were over 80%, to streptomycin, ceftiofur, amoxicillin and sulfadiazine were over 70%, toenrofloxacin and ciprofloxacin were over 60%,. All of the 300E.Colistrains were multiple-antibiotic-resistant, which mainly concentrated in 5-10 resistance. The resistance situation of E. Coli isolated from swine, chicken and environment in Guiyang City was considerable serious.

E.Coli； antibiotic resistance； solid agar dilution； multidrug resistant

2017-04-11；

2017-06-07

贵阳市农委科学技术计划项目“贵阳市屠宰场猪肉致病菌污染调查及防控措施研究” (筑科合(2010第12-1号)。

S852.61

A

1008-0457(2017)04-0064-04 国际

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2017.04.011

*通讯作者：谭艾娟(1963-)，女，白族，教授，主要研究方向：微生物与生化药学；E-mail：ajtan@gzu.edu.cn。