HPLC法检测定盐酸度洛西汀原料药中的甲醛含量研究

韩立春

（山东康力生药业有限公司，山东 日照 276800）

HPLC法检测定盐酸度洛西汀原料药中的甲醛含量研究

韩立春

（山东康力生药业有限公司，山东 日照 276800）

目的采用HPLC对盐酸度洛西汀原料药中甲醛含量予以测量。方法HPLC法分析甲醛衍生物，主要原理在于甲醛反应于1，4-二硝基苯肼可形成甲醛2，4-二硝基苯腙衍生物，明确色谱条件如流速、色谱柱、柱温及流动相等。结果甲醛衍生物可分开于待测样品中未知峰，有优良的专属性，0.4 ppm约为甲醛检测限；3份样本中甲醛检测结果中AU分别为0.37、0.52及0.43，As/2均为19.07，因此AU＜As/2，与≤20 ppm的标准相符。结论HPLC法操作简易，可靠稳定，反应灵敏，用于测量盐酸度洛西汀原料药中的甲醛含量价值较高。

HPLC法；盐酸度洛西汀；甲醛含量

盐酸度洛西汀为临床新型双重再摄取抑制剂，即去甲肾上腺素与选择性5-羟色胺，FDA于2004年批准上市，目前主要用于治疗糖尿病患者周围神经痛及抑郁症，且欧洲还批准用于治疗女性尿失禁[1]。生产盐酸度洛西汀期间应用甲醛溶剂，而甲醛会危害机体健康，WHO已明确其为致畸形及致癌物质，因此需对盐酸度洛西汀原料药中甲醛残留量予以严格控制。结合盐酸度洛西汀日剂量，初步明确20 ppm为甲醛限度规定[2]。当前有多种方法可测定该药物中甲醛含量，如色谱法、化学滴定、分光光度法及电化学法等，其中色谱法有较高的灵敏度且有专属性，且研究证实该方法可靠性与稳定性高[3-5]，故而相比其他方法该检测方法优势明显。本文现用HPLC法测定盐酸度洛西汀原料药中的甲醛含量。

1 实验材料

准备好检测设备及电子天平，准备好甲醛水溶液，37.3%为其含量，级别为ACS；准备好盐酸度洛西汀样品，甲醛2，4-二硝基苯腙含量为98%，级别为TCI；2，4-二硝基苯肼含量为99.6%；同时将乙腈（色谱纯）及甲醇等准备好。

2 方法与结果

2.1 制备溶液：①稀释液流动相A∶B=50∶50（V∶V）；②加水稀释9 mL盐酸至50 mL为2N盐酸溶液；③称取2，4-二硝基苯肼82.5 mg在50 mL量瓶中放置，乙腈溶解并稀释至刻度再混匀；④称取500 mg 37.3%甲醛水溶液在100 mL量瓶中放置，精密测定并用甲醇稀释而后混匀，即得标准储备溶液；⑤在100 mL量瓶中移取标准储备溶液1.0 mL放置，甲醇水稀释后混匀即得1.85 μg/mL浓度甲醛，此为标准溶液；⑥精密称定0.5 g盐酸度洛西汀样品，在10 mL量瓶中放置，甲醇稀释而后混匀即得样品溶液；⑦在10 mL量瓶中放置2，4-二硝基苯肼溶液2.0 mL，再添加2N盐酸溶液50 mL与甲醛270 μL，放置在室温下持续40 min，稀释后混匀即得衍生空白溶液，衍生标准溶液、衍生样品溶液及加样混合溶液做法与其一致，按照此步骤再开展4次便可获取上述溶液；⑧在100 mL量瓶中放置50 mg甲醛2，4-二硝基苯腙，甲醇稀释至刻度水平而后混匀；再在量瓶中放置该溶液1.0 mL，稀释后即得5 μg/mL浓度甲醛2，4-二硝基苯腙溶液。于配制好后4 h内行进样分析。2.2 色谱条件：色谱柱为5 μm、250 mm×4.6 mm，乙腈-水（60∶40）为流动相，360 nm为检测波长，1.0 mL/min为流速，30 ℃为柱温，10 μL为进样量，38 min为运行时间。

2.3 考察方法学

2.3.1 专属性：对空白溶剂及杂质对目标峰测定干扰予以明确，测定加样混合溶液、衍生空白与标准溶液、甲醛2，4-二硝基苯腙溶液，结果在目标峰甲醛2，4-二硝基苯腙溶液处空白溶液有干扰，可能因该试剂自身带入后无法消除，故而计算甲醛含量时需将空白值扣除。衍生标准溶液与甲醛2，4-二硝基苯腙溶液有相同的峰保留时间，因此10.6 min峰可能为甲醛2，4-二硝基苯腙色谱峰。加样混合色谱图表明样品其他杂质峰无干扰作用，说明有优良的专属性[6-7]。

2.3.2 检测限（LOD）：按照3∶1信噪比要求将目标峰检测限溶液配制出来，即在10 mL量瓶中添加2，4-二硝基苯肼2.0 mL，再添加2N盐酸溶液50 μL，再添加标准溶液3 μL，反应于室温下约40 min，稀释后即得。持续进样3针后获取3次信噪比，分别为3.4、3.5及2.9，3.3为其平均值，0.4 ppm为对应甲醛LOD，说明灵敏度与要求相符。

2.3.3 测定样品：取盐酸度洛西汀样品3份并编号为样品1、2、3，依据衍生样品溶液法制备法将溶液制备出来，平行各制备2份，1份测定1次，将色谱图记录下来。3份样本中甲醛检测结果中AU分别为0.37、0.52及0.43，As/2均为19.07，因此AU＜As/2，与≤20 ppm的标准相符，但对AU及As予以计算时应将空白值后数据扣除，具体见表1。

3 讨 论

表1 样品中甲醛检测结果

盐酸度洛西汀化学结构为S-构型体，若有少量R-异构体混合其中会对疗效产生影响[8]，若甲醇含量过多会损伤机体健康，因此本文采用HPLC法测定该药物中甲醛含量。在确定吸收波长时可结合以往研究直接选定测定波长为360 nm，因甲醛衍生物紫外吸收光谱图中360 nm左右为最大吸收波长[9-11]。因成品盐酸度洛西汀中甲醛有十分低的含量，其检测结果比10%接受标准水平该明显要低，因此企业在开展日常检测时无需控制杂质，只需采取周期性控制方式。此外，

HPLC法受控于杂质限量，因此可按照文献要求中分析方法验证指南验证杂质限量检测方法，在方法学中只需验证检测限及专属性即可[12-15]。

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Determination of the Fromaldehyde Content in Duloxetine Hydrochloride Raw Material by HPLC Method

HAN Li-chun
(Shandong Kanglisheng Pharmaceutical Co., Ltd., Rizhao 276800, China)

ObjectiveUsing HPLC method to determinate the fromaldehyde content in duloxetine hydrochloride raw material.MethodsAnalyze the formaldehyde derivatives by HPLC method. Main principle is that formaldehyde reaction in the 1,4-dintrobenzene hydrazine can form formaldehyde 2,4-dintrobenzene hydrazone derivatives, clear chromatographic conditions such as flow velocity, chromatographic column, column temperature, flow and so on.ResultFormaldehyde derivatives can be separated in unknown peak in the sample under test, with high specificity, 0.4 ppm of formaldehyde detection limit, results of 3 samples in formaldehyde test Au is 0.37, 0.52 and 0.43 respectively, As/2 is 19.07, so the Au＜As/2, consistent with the standard of ≤20ppm.ConclusionHPLC method is simple operation, stable and reliable, responsive, used to measure the fromaldehyde content in duloxetine hydrochloride raw material is valuable.

HPLC method; Duloxetine hydrochloride; Fromaldehyde content

R927.2

B

1671-8194（2017）16-0026-02